王靜怡，范翠芳，孫艷梅，謝明花，王素青

(1武漢大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，武漢430071；2武漢大學(xué)人民醫(yī)院)

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子癇前期患者足月分娩后胎盤組織中PGRN mRNA及蛋白表達(dá)變化

王靜怡1，范翠芳2，孫艷梅2，謝明花1，王素青1

(1武漢大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，武漢430071；2武漢大學(xué)人民醫(yī)院)

摘要：目的觀察子癇前期患者足月分娩后胎盤組織中顆粒蛋白前體(PGRN)mRNA及蛋白的表達(dá)變化，并探討其意義。方法 子癇前期產(chǎn)婦20例，其中輕度子癇前期10例(輕度組)、重度子癇前期10例(重度組)，另選健康產(chǎn)婦10例為對(duì)照組。各組胎盤娩出后取胎盤組織，采用real-time PCR法檢測胎盤組織中的PGRN mRNA，采用免疫組化法檢測PGRN蛋白。結(jié)果對(duì)照組、輕度組、重度組胎盤組織中PGRN mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為1±0.083 474、0.578 398±0.110 795、0.360 415±0.164 284，輕度組、重度組與對(duì)照組相比，P均<0.05。對(duì)照組、輕度組、重度組胎盤組織中PGRN蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為87 466 413.2±14 162 957.0、59 561 837.0±4 370 396.7、56 734 851.3±3 060 036.0，輕度組、重度組與對(duì)照組相比，P均<0.05。結(jié)論 子癇前期產(chǎn)婦胎盤組織中PGRN mRNA及其蛋白表達(dá)低于正常，PGRN低表達(dá)可能與子癇前期的發(fā)生有關(guān)。

關(guān)鍵詞：妊娠并發(fā)癥；子癇前期；顆粒蛋白前體；胎盤組織

子癇前期可能造成孕婦多臟器功能衰竭，引起不良妊娠結(jié)局，危害母兒健康[1]。子癇前期的特征性病理改變是胎盤血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷與功能障礙。炎癥反應(yīng)是造成血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的主要原因，可導(dǎo)致胎盤發(fā)育不良，與胎盤形成不良密切相關(guān)[2]。研究[3]表明，TNF-α可能是造成子癇前期患者血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的主要因子之一。顆粒蛋白前體(PGRN)是TNF-α的拮抗劑，可阻斷TNF/TNFR介導(dǎo)的NF-κB、MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑活化，抑制炎癥相關(guān)基因表達(dá)，在機(jī)體生長發(fā)育、損傷修復(fù)和細(xì)胞增殖等方面發(fā)揮重要作用[4~6]。目前關(guān)于PGRN在子癇前期發(fā)病中的作用報(bào)道較少。為此，本研究觀察了子癇前期產(chǎn)婦胎盤組織中PGRN mRNA及蛋白的表達(dá)變化，現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1臨床資料2014年4~8月于武漢大學(xué)人民醫(yī)院住院分娩的子癇前期[7]產(chǎn)婦20例，其中輕度(輕度組)、重度(重度組)各10例。輕度組于孕(28.1±2.4)周確診，重度組于孕(27.1±1.8)周確診。另選健康產(chǎn)婦10例為對(duì)照組，均無其他內(nèi)外科及產(chǎn)科合并癥。三組一般資料具有可比性，見表1。三組產(chǎn)婦胎盤娩出即刻在胎盤中央附近的絨毛膜板下取胎盤絨毛組織兩塊，一塊置于-80 ℃冰箱保存；另一塊樣品1 cm3大小，用無菌生理鹽水沖洗后，放入4%多聚甲醛中固定，常規(guī)乙醇脫水，石蠟包埋，室溫保存。

表1　三組一般資料比較

1.2胎盤組織中PGRN mRNA檢測采用real-time PCR法。常規(guī)TRIzol提取胎盤組織RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，進(jìn)行PCR反應(yīng)。PGRN上游引物序列為5′-ACACTGTGTGTGACCTGATCCAGAG-3′，下游引物序列為5′-CGACTGTAGACGGCAGCAGGTA-3′；內(nèi)參β-actin上游引物序列為5′-GGACTTCGAGCAAGAGATG-3′，下游引物序列為5′-AGCACTGTGTTGGCGTACG-3′。PCR反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性10 min，95 ℃變性15 s，60 ℃退火20 s，72 ℃延伸30 s，共40個(gè)循環(huán)。每個(gè)樣品做3個(gè)平行樣，以2-ΔΔCt表示目的基因相對(duì)表達(dá)量。

1.3胎盤組織中PGRN蛋白檢測采用免疫組化法。光鏡下(400×)每張切片隨機(jī)挑選10個(gè)區(qū)域，以細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為PGRN表達(dá)陽性。用Image Pro Plus6.0軟件進(jìn)行分析，以累積光密度值(IOD)代表選定區(qū)域的蛋白表達(dá)量。

2結(jié)果

2.1各組胎盤組織中PGRN mRNA表達(dá)比較對(duì)照組、輕度組、重度組胎盤組織中PGRN mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為1±0.083 474、0.578 398±0.110 795、0.360 415±0.164 284，輕度組、重度組與對(duì)照組相比，P均<0.05。

2.2各組胎盤組織中PGRN蛋白表達(dá)比較對(duì)照組、輕度組、重度組胎盤組織中PGRN蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為87 466 413.2±14 162 957.0、59 561 837.0±4 370 396.7、56 734 851.3±3 060 036.0，輕度組、重度組與對(duì)照組相比，P均<0.05。

3討論

多項(xiàng)研究表明，子癇前期的病理基礎(chǔ)是血管內(nèi)廣泛、過度炎癥反應(yīng)導(dǎo)致的內(nèi)皮細(xì)胞損傷。Redman等[8]首次提出正常妊娠孕婦本身存在輕微的炎癥反應(yīng)，而子癇前期為過度的炎癥反應(yīng)。Greer等[9]發(fā)現(xiàn)患有妊娠高血壓疾病的孕婦外周血中活化的中性粒細(xì)胞增多，導(dǎo)致母體血管內(nèi)皮損傷及功能障礙。國外研究[10]表明，早期應(yīng)用小劑量阿斯匹林可降低高危孕婦子癇前期的發(fā)生率。有學(xué)者[11]發(fā)現(xiàn)，子癇前期產(chǎn)婦胎盤組織中TNF-α表達(dá)量高于健康產(chǎn)婦，TNF-α可能是造成子癇前期患者血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的主要因子之一。

PGRN在富含上皮細(xì)胞的組織與器官中廣泛分布，在脾、腎上腺、生殖器官(卵巢、附睪)中表達(dá)最強(qiáng)[12]。PGRN能與TNF-α直接結(jié)合，從而擾亂TNF/TNFR相互作用[13]。有學(xué)者[14]認(rèn)為PGRN是TNFR的一種配體，是TNF-α信號(hào)途徑的拮抗劑，在小鼠關(guān)節(jié)炎的病理過程中扮演重要角色，提出PGRN有望成為治療TNF-α相關(guān)疾病的一個(gè)新的靶點(diǎn)。

本研究分別檢測了健康孕婦及子癇前期產(chǎn)婦胎盤組織中的PGRN mRNA及蛋白，結(jié)果顯示，輕度、重度子癇前期產(chǎn)婦胎盤組織中PGRN mRNA及蛋白相對(duì)表達(dá)量低于健康產(chǎn)婦，提示子癇前期的發(fā)病可能與PGRN低表達(dá)有關(guān)。我們推測，PGRN可能通過作用于TNF-α參與子癇前期的發(fā)生。PGRN作為TNF-α生理?xiàng)l件下的拮抗劑，可以阻斷TNF/TNFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，當(dāng)PGRN表達(dá)減少，TNF/TNFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路活化增強(qiáng)，導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，進(jìn)而誘發(fā)子癇前期。本研究中輕度組與重度組PGRN表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這一結(jié)果提示PGRN表達(dá)量下降也可能是承載PGRN表達(dá)的滋養(yǎng)層細(xì)胞發(fā)生凋亡所致。有研究表明子癇前期本身與滋養(yǎng)細(xì)胞的凋亡有關(guān)，子癇前期孕婦胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡顯著增加，胎盤細(xì)胞凋亡與疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。究竟是滋養(yǎng)細(xì)胞本身的凋亡導(dǎo)致PGRN表達(dá)減少還是PGRN本身不表達(dá)，還有待進(jìn)一步證實(shí)。

結(jié)合上述研究結(jié)果，我們認(rèn)為，PGRN表達(dá)下調(diào)可能與子癇前期的發(fā)病有關(guān)，對(duì)于其具體機(jī)制及如何通過調(diào)控PGRN表達(dá)預(yù)防或控制子癇前期，尚需進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1] 張展,薛閃輝,張琳琳,等.重度子癇前期患者胎盤組織中Notch1、Jagged1表達(dá)變化及意義[J].山東醫(yī)藥,2015,55(38):10-13.

[2] 張靜,楊再全,李霞,等.子癇前期患者胎盤及臍帶組織IDO、MIF表達(dá)變化及意義[J].山東醫(yī)藥,2015,55(12):61-63.

[3] 郝殿晉,李亞卓,孫鑫,等.妊娠高血壓綜合征患者血清IL-12、TNF-α和CRP的變化及其意義[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2013,21(11):56-58.

[4] 趙霞,韓世愈.顆粒蛋白前體在免疫和感染及炎癥中的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2014,20(24):4445-4448.

[5] Forsgren S, Renstrom L, Purdam C, et al. TNF-Alpha in the locomotor system beyond joints: high degree of involvement in myositis in a rabbit model[J]. Int J Rheumatol, 2012,2012:637452.

[6] 魏凡華,張玉穎,于修平.生長因子Progranulin的結(jié)合受體和生物學(xué)功能[J].中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào),2014,30(7):655-659．

[7] 樂杰.婦產(chǎn)科學(xué)[M].7版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2008：92-99．

[8] Redman CWG, Sacks GP, Sargent IL. Preeclampsia: An excessive maternal inflammatory response to pregnancy[J]. Am J Obstet Gynecol, 1999,180(2):499-506.

[9] Greer IA, Dawes J, Johnston TA, et al. Neutrophil activation is confined to the maternal circulation in pregnancy-induced hypertension[J]. Obstet Gynecol, 1991,78(1):28-32.

[10] Chiaffarino F, Parazzini F, Paladini D, et al. A small randomised trial of low-dose aspirin in women at high risk of pre-eclampsia[J]. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol, 2004,112(2):142-144.

[11] Szarka A, Janos Rigo J, Levente L, et al. Circulating cytokines, chemokines and adhesion molecules in normal pregnancy and preeclampsia determined by multiplex suspension array[J]. BMC Immunol, 2010,11(1):59-68.

[12] Bhandari V, Giaid A, Bateman A. The complementary deoxyribonucleic acid sequence, tissue distribution, and cellular localization of the rat granulin precursor[J]. Endocrinology, 1993,133(6):2682-2689.

[13] Toshiya M, Ayako M, Kohtaro M, et al. PGRN is a key adipokine mediating high fat diet-induced i nsulin resistance and obesity through IL-6 in adipose tissue[J]. Cell Metabolism, 2012,15(1):38-50.

[14] Tang W, Lu Y, Tian QY, et al. The growth factor progranulin binds to TNF receptors and is therapeutic against inflammatory arthritis in mice [J]. Science, 2011,332(6028):478-484.

(收稿日期：2015-09-28)

中圖分類號(hào)：R714.25

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號(hào)：1002-266X(2016)07-0062-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.07.023

通信作者：王素青(E-mail: swang2099@whu.edu.com)