周蓮，符明昌，羊文芳

(1.海南省第三人民醫(yī)院檢驗科，海南 三亞 572000；2.海南省西部中心醫(yī)院檢驗科，海南 儋州 571700)

抗核抗體和抗核抗體譜聯(lián)合檢測診斷自身免疫性疾病的臨床價值

周蓮1，符明昌1，羊文芳2

(1.海南省第三人民醫(yī)院檢驗科，海南 三亞 572000；2.海南省西部中心醫(yī)院檢驗科，海南 儋州 571700)

目的 探討自身免疫性疾病(AID)患者血清抗核抗體(ANA)和抗核抗體譜(ANAs)的表達(dá)及臨床意義。方法選取2013年1月至2015年4月海南省第三人民醫(yī)院收治的194例AID患者和103例非AID患者(對照組)，根據(jù)美國風(fēng)濕病學(xué)會的診斷標(biāo)準(zhǔn)將194例AID患者分為系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)組、混合性結(jié)締組織病(MCTD)組、干燥綜合征(SS)組、硬皮病(PSS)組、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)組和過敏性紫癜(AP)組。采用間接免疫熒光法(IIF)和免疫印跡法(IBT)檢測所有患者的ANA和ANAs，并進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果女性患者檢出ANA、Ul-SnRNP、抗dsDNA、抗SSA、抗SSB、抗核小體和抗組蛋白的陽性率均明顯高于男性，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；在不同AID患者中ANA檢測均呈陽性，其中SLE組陽性率最高，達(dá)93.5%，其次分別為MCTD組(85.0%)、SS組(79.2%)、PSS組(69.2%)、RA組(35.8%)、AP組(20.0%)，均明顯高于對照組(4.9%)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。RA組主要表達(dá)抗組蛋白(47.7%)，明顯高于對照組(1.0%)。SLE組主要表達(dá)抗SmDl(37.9%)、抗dsDNA(66.1%)、抗SSA (41.9%）、抗核小體(77.4%)和抗組蛋白(37.1%)，均明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。SS組主要表達(dá)抗SSA(58.3%)和抗SSB(50.0%)，均明顯高于對照組。MCTD組主要表達(dá)Ul-SnRNP(35.0%)、抗SSA(60.0%)和抗SSB(30.0%)，均明顯高于對照組。PSS組和AP組主要表達(dá)抗Scl-70(46.1%和10.0%)，均明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；130例ANA陽性患者檢出97例ANAs陽性，符合率74.6%；64例ANA陰性患者檢出58例ANAs陰性，符合率為90.6%；AID患者ANA核型分布以核顆粒型和核均質(zhì)型為主，其他核型較少見；核顆粒型多為抗SSA(48.5%)、抗SSB(23.7%)和抗組蛋白(26.8%)，核均質(zhì)型多為抗dsDNA(28.9%)、抗核小體(29.9%)和抗組蛋白(25.7%)。結(jié)論ANA可輔助診斷自身免疫性疾病，但缺乏特異性，聯(lián)合抗核抗體譜檢測對AID的診斷有重要意義。

自身免疫性疾病；抗核抗體；抗核抗體譜；表達(dá)；臨床意義

自身免疫性疾病(autoimmune diseases，AID)是機(jī)體自身發(fā)生免疫應(yīng)答及免疫功能發(fā)生紊亂而引發(fā)多器官系統(tǒng)受損的一種疾病[1]，臨床表現(xiàn)多變，往往累及皮膚、漿膜、關(guān)節(jié)、腎及中樞神經(jīng)系統(tǒng)等。越來越多的研究證實，采用間接免疫熒光法(indirect immunofluorescence，IIF)檢測抗核抗體(antinuclear antibody，ANA)，對輔助診斷AID具有重要的意義[2-3]。免疫印跡法(immunoblotting test，IBT)特異性抗核抗體譜(antinuclear antibody spectrum，ANAs)檢測對AID的鑒別診斷、病情判斷、治療監(jiān)測和預(yù)后評估具有重要的價值[4-5]。本研究通過對AID患者中ANA和ANAs的檢測，分析其在AID患者中的表達(dá)及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1月至2015年4月海南省第三人民醫(yī)院收治的194例AID患者，其中男性70例，女性124例，年齡5～82歲，平均(46.7±15.8)歲。所有患者均符合美國風(fēng)濕病學(xué)會的診斷標(biāo)準(zhǔn)，其中類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)65例，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)62例，干燥綜合征(sicca syndrome，SS)24例，混合性結(jié)締組織病(mixed connective tissue disease，MCTD)20例，硬皮病(progressive systemic sclerosis，PSS)13例，過敏性紫癜(allergic purpura，AP)10例。對照組為同期非AID住院患者103例，男性39例，女性64例；年齡15～74歲，平均(45.3±13.1)歲。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，并獲得患者或家屬知情同意。

1.2 主要儀器和試劑 抗核抗體以Hep-2/猴肝為抗原基質(zhì)，試劑盒由歐蒙公司提供，采用歐蒙公司EUROStarⅢPlus熒光顯微鏡觀察，細(xì)胞或組織內(nèi)出現(xiàn)特異性熒光判為陽性?？购丝贵w譜試劑購自歐蒙(德國)醫(yī)學(xué)實驗診斷股份公司產(chǎn)品，只要有一種抗體陽性，即視為抗核抗體譜檢測陽性。

1.3 檢測指標(biāo)與方法 所有患者均于入院次晨取空腹靜脈血3 mL，離心分離血清后，采用間接免疫熒光法(IIF)檢測ANA和毆蒙免疫印跡法(IBT)檢測抗核抗體譜(包括抗Ul-SnRNP、抗SmDl、抗dsDNA、抗Jo-1、抗SSA、抗SSB、抗Scl-70、抗核小體、抗組蛋白、抗CNEP-B、抗PM-Scl、抗Rib-P等12種不同抗原IgG類抗體)。整個操作過程嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料用率表示，率的比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同性別組ANA和ANAs陽性率比較 女性患者檢出ANA、Ul-SnRNP、抗dsDNA、抗SSA、抗SSB、抗核小體和抗組蛋白的陽性率明顯高于男性患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)?？筍mDl、抗Jo-1、抗Scl-70、抗CNEP-B、抗PM-Scl、抗Rib-P在性別間比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表1。

表1 不同性別組ANA和ANAs陽性率比較[例(%)]

2.2 AID患者ANA和ANAs陽性率比較 RA組ANA、抗dsDNA、抗SSA、抗SSB和抗組蛋白的陽性率分別為35.8%、7.7%、15.4%、6.2%、47.7%，均明顯高于對照組(P＜0.05)。SLE組ANA、Ul-SnRNP、抗SmDl、抗dsDNA、抗SSA、抗SSB、抗核小體、抗組蛋白和抗Rib-P的陽性率分別為93.5%、8.1%、37.9%、66.1%、41.9%、16.1%、77.4%、37.1%、12.9%，均明顯高于對照組(P＜0.05)。SS組ANA、抗SSA、抗SSB和抗組蛋白的陽性率分別為79.2%、58.3%、50.0%、8.3%，均明顯高于對照組(P＜0.05)。MCTD組ANA、Ul-SnRNP、抗dsDNA、抗SSA、抗SSB、抗Scl-70、抗組蛋白和抗Rib-P的陽性率均明顯高于對照組(P＜0.05)。PSS組和AP組ANA、抗Scl-70的陽性率均明顯高于對照組(P＜0.05)，見表2。

表2 AID患者ANA和ANAs陽性率比較[例(%)]

2.3 AID患者ANA表達(dá)和ANAs表達(dá)情況 194例AID患者檢出ANA陽性130例(67.0%)，檢出ANAs陽性124例(63.9%)，兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。130例ANA陽性患者檢出97例ANAs陽性，符合率為74.6%；64例ANA陰性患者檢出58例ANAs陰性，符合率為90.6%。

2.4 AID患者ANA核型與抗核抗體譜表達(dá)情況 對ANA和抗核抗體譜同時陽性的97例患者核型分析，其中核顆粒型多為抗SSA(48.5%)、抗SSB (23.7%)和抗組蛋白(26.8%)，核均質(zhì)型多為抗dsDNA (28.9%)、抗核小體(29.9%)和抗組蛋白(25.7%)，核仁型多為抗Scl-70(3.1%)，著絲點型多為抗CNEP-B (3.1%)，胞漿顆粒多為抗SSA(3.1%)，核點型和核膜型較少見，見表3。

表3 AID患者ANA核型與抗核抗體譜表達(dá)情況[例(%)]

3 討 論

AID是指機(jī)體免疫系統(tǒng)對自身組織或細(xì)胞產(chǎn)生病理性免疫應(yīng)答反應(yīng)而導(dǎo)致的組織損傷或功能障礙的疾病。AID的潛伏期較長，因此早期診斷AID，對改善預(yù)后及提高患者生存率具有重要的意義[6]。ANA是以各種細(xì)胞核成分為抗原的自身抗體的總稱，可存在細(xì)胞核、細(xì)胞骨架、細(xì)胞漿及細(xì)胞分裂周期中，不同的AID有不同的抗核抗體譜[7]。所以，檢測ANA和抗核抗體譜有助于診斷和鑒別診斷AID[8]。

身免疫性疾病女性患者較多，本研究結(jié)果顯示，女性患者檢出ANA、Ul-SnRNP、抗dsDNA、抗SSA、抗SSB、抗核小體和抗組蛋白的陽性率均明顯高于男性患者，與羅雯斌等[9]研究結(jié)果相似。提示女性相對于男性更容易發(fā)生自身免疫性疾病，臨床上表現(xiàn)為自身抗體的陽性率高于男性。在各種自身免疫性疾病中均可檢測ANA陽性，其中SLE組陽性率最高，其次分別為MCTD組、SS組、PSS組、RA組、AP組，與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。說明檢測ANA對AID的診斷具有一定臨床價值，但特異性較差，只能作為AID的過篩試驗。SLE患者免疫調(diào)節(jié)異常，在細(xì)胞凋亡過程中，吞噬細(xì)胞不能完全吞噬染色質(zhì)斷裂所釋放的核酸，從而可產(chǎn)生多種ANA。本研究顯示，SLE組主要表達(dá)抗SmDl、抗dsDNA、抗SSA、抗核小體和抗組蛋白，與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)?？筍mDl、抗核小體和抗dsDNA在SLE組中呈高表達(dá)，而在其他AID組表達(dá)極低。說明抗SmDl、抗核小體和抗dsDNA對SLE的診斷具有較高的特異性，可作為SLE診斷的標(biāo)記抗體。Tang等[10]研究表明，抗dsDNA抗體是SLE的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。覃仕鋒等[11]對ENA、ANA和抗dsDNA抗體在AID患者中的相關(guān)性研究，發(fā)現(xiàn)抗核小體對AID的診斷具有重要的意義。RA組主要表達(dá)抗組蛋白，明顯高于對照組，與吳茜等[12]研究結(jié)果基本一致?？筍SA抗體和抗SSB抗體是診斷SS的標(biāo)記性抗體，本研究SS組主要表達(dá)抗SSA和抗SSB，均明顯高于對照組(P＜0.05)?？筍SA在SLE組的陽性率較高，但抗SSB陽性率較低?？筍SB抗體較抗SSA抗體診斷SS具更高特異性，聯(lián)合檢測SSA抗體與抗SSB抗體對提高SS的診斷有重要意義?？筓l-SnRNP抗體是MCTD的標(biāo)志性抗體。本研究MCTD組Ul-SnRNP、抗SSA和抗SSB陽性率均明顯高于對照組(P＜0.05)。說明Ul-SnRNP抗體有助于鑒別結(jié)締組織病和非結(jié)締組織病，與牟君成等[13]研究結(jié)果相符。抗Scl-70抗體是PSS的特異性抗體，多見于彌散型PSS，可用于PSS的診斷。本研究PSS組主要表達(dá)抗Scl-70(46.1%)，明顯高于對照組(P＜0.05)。何建偉等[14]研究結(jié)果顯示PSS患者抗Scl-70陽性率為66.7%，與本研究存在差異，這可能與研究樣本量、研究方法學(xué)不同有關(guān)。

194例AID患者檢出ANA陽性130例，檢出ANAs陽性124例，兩者檢出率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。130例ANA陽性患者檢出97例ANAs陽性，符合率為74.6%；64例ANA陰性患者檢出58例ANAs陰性，符合率為90.6%，與胡朝軍等[15]研究結(jié)果基本一致。97例AID患者ANA核型分布以核顆粒型和核均質(zhì)型為主，其他核型較少見。核顆粒型多為抗SSA、抗SSB和抗組蛋白，核均質(zhì)型多為抗dsDNA、抗核小體和抗組蛋白。提示AID患者ANA核型與抗核抗體譜有一定的相關(guān)性，與文獻(xiàn)報道[16]相符合。

綜上所述，ANA檢測對AID具有篩查作用，抗核抗體譜特異性抗體檢測具有疾病特異度和較高的檢測敏感度。通過檢測ANA來排除AID患者的同時進(jìn)行抗核抗體譜特異性抗體檢測，可提高AID診斷準(zhǔn)確率，為療效觀察提供有效依據(jù)。

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Clinical value of combined detection of antinuclear antibody and antinuclear antibody spectrum in diagnosis of autoimmune diseases.

ZHOU Lian1,FU Ming-chang1,YANG Wen-fang2.1.Department of Clinical Laboratory,the Third People's Hospital of Hainan Province,Sanya 572000,Hainan,CHINA;2.Department of Clinical Laboratory,Western Central Hospital of Hainan Province,Danzhou 571700,Hainan,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of serum antinuclear antibody (ANA)and antinuclear antibody spectrum(ANAs)in patients with autoimmune diseases(AID).MethodsA total of 194 cases of AID patients and 103 cases of patients without AID(control group)in the Third People's Hospital of Hain-an Province were selected from January 2013 to April 2015.According to the diagnostic criteria of the American College of Rheumatology,the 194 patients with AID were divided into 6 groups as systemic lupus erythematosus(SLE) group,mixed connective tissue diseases(MCTD)group,sicca syndrome(SS)group,progressive systemic sclerosis (PSS)group,rheumatoid arthritis(RA)group and allergic purpura(AP)group.ANA and ANAs of all patients were detected by indirect immunofluorescence(IIF)and immunoblotting test(IBT),and the statistical analysis was performed.ResultsThe positive rates of ANA,Ul-SnRNP,anti dsDNA,anti SSA,anti SSB,anti nuclear and anti histone in female patients were significantly higher than those in males,and the differences were statistically significant(P＜0.05).ANA test was positive in different AID patients,among which the positive rate of SLE group was the highest (93.5%),followed by MCTD group(85.0%),SS group(79.2%),PSS group(69.2%),RA group(35.8%),AP group (20.0%),which were significantly higher than those of control group(4.9%).The expression of anti histone(47.7%)in the RA group was significantly higher than that in the control group(1.0%).SLE group mainly expressed anti-SmDl (37.9%),anti-dsDNA(66.1%),anti-SSA(41.9%),anti-nucleosome(77.4%)and anti-histone(37.1%),which were significantly higher than those of the control group(P＜0.05).SS group mainly expressed anti-SSA(58.3%)and anti-SSB (50.0%),which were significantly higher than those of the control group(P＜0.05).MCTD group mainly expressed Ul-SnRNP(5.0%),anti SSA(60.0%)and anti SSB(30.0%),which were significantly higher than those of the control group(P＜0.05).PSS and AP group mainly expressed anti Scl-70(46.1%and 10.0%),which were significantly higher than those of the control group(P＜0.05).A total of 97 cases of ANAs positive were detected in 130 cases of ANA positive patients,and the coincidence rate was 74.6%.Fifty-eight cases of ANAs negative were detected in 64 cases of ANA negative patients,with the rate of 90.6%.The distribution of ANA karyotype in AID patients was mainly nuclear particle type and nuclear homogeneous type,and other karyotype was rare.Nuclear particle types were mostly anti-SSA(48.5%),anti-SSB group(23.7%)and anti-histone(26.8%),and the nuclear homogeneous types were mostly anti-dsDNA(28.9%),anti-nucleosome(29.9%)and anti-histone(25.7%).ConclusionANA can assist in the diagnosis of autoimmune diseases,but lack of specificity.Combined detection of antinuclear antibody and antinuclear antibody spectrum has important significance for the diagnosis ofAID.

Autoimmune diseases(AID);Antinuclear antibody(ANA);Antinuclear antibody spectrum (ANAs);Expression;Clinical significance

R593.2

A

1003—6350（2016）18—2965—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.18.014

2016-03-10)

周蓮。E-mail：3306168047@qq.com