龔子恒　(荊州中學(xué)高三6班，湖北 荊州 434000)

范瑞琴　(荊州市第二人民醫(yī)院肝病科，湖北 荊州 434000)

?

橙皮苷對(duì)D-氨基半乳糖小鼠急性肝損傷氧化應(yīng)激的影響

龔子恒(荊州中學(xué)高三6班，湖北 荊州 434000)

范瑞琴(荊州市第二人民醫(yī)院肝病科，湖北 荊州 434000)

[摘要]目的：研究橙皮苷對(duì)D-氨基半乳糖(D-GalN)小鼠急性肝損傷氧化應(yīng)激的影響。方法：40只小鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、橙皮苷低、高劑量組，各組分別灌胃給藥7d后，通過(guò)腹腔注射D-GalN誘導(dǎo)急性肝損傷模型，計(jì)算小鼠肝指數(shù)，測(cè)定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)以及肝組織中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛 (MDA)。結(jié)果：模型組與正常組比較小鼠肝指數(shù)顯著升高，血清ALT、AST及ALP水平顯著升高，肝組織勻漿中GSH-Px 、SOD活性顯著降低，MDA含量顯著升高。橙皮苷低、高劑量組與模型組比較，降低了D-GalN致肝損傷小鼠肝指數(shù)，降低血清中ALT、AST及ALP水平，提高肝組織勻漿中GSH-Px 、SOD活性，降低MDA含量。結(jié)論：橙皮苷對(duì)D-GalN誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷具有明顯保護(hù)作用，其機(jī)制可能與減輕小鼠肝損傷氧化應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]橙皮苷；D-氨基半乳糖；肝損傷；氧化應(yīng)激

橙皮苷是橙皮素與蕓香糖形成的二氫黃酮苷類(lèi)化合物，廣泛存在于豆科、蕓香科、柑橘屬等植物之中，在柑橘類(lèi)植物果皮內(nèi)含量尤為豐富[1]。研究發(fā)現(xiàn)，橙皮苷具有抗菌、抗氧化、抗血栓形成及抗腫瘤等多種藥理學(xué)作用[2,3]。本實(shí)驗(yàn)采用D-GalN致小鼠急性肝損傷模型，研討橙皮苷對(duì)急性肝損傷氧化應(yīng)激的影響。

1材料與方法

1.1動(dòng)物

昆明種雄性小鼠40只，體重18～20g，由武漢大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2藥物

橙皮苷和D-氨基半乳糖(D-GalN)均購(gòu)于Sigma公司；羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)購(gòu)于上海國(guó)藥集團(tuán)；谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)等購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

1.3方法

1)分組與給藥將小鼠隨機(jī)分為4組，即正常組、模型組、橙皮苷低劑量組(150mg/kg)及高劑量組(300mg/kg)。正常組及模型組給予0.5%CMC-Na灌胃，橙皮苷低、高劑量組將橙皮苷溶于0.5%CMC-Na配成不同劑量的溶液灌胃，持續(xù)7天。末次給藥2h 后，除正常組外，剩余各組腹腔注射10%D-GalN生理鹽水溶液600mg/kg誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷。末次處理后各組動(dòng)物禁食24h，不禁水。

2)標(biāo)本檢測(cè)指標(biāo)小鼠摘眼球取血，靜置后離心分離血清，嚴(yán)格參照試劑盒說(shuō)明檢測(cè)ALT、AST及ALP水平。小鼠處死后立即摘取肝臟，生理鹽水漂洗，吸干準(zhǔn)確稱(chēng)重，肝指數(shù)(%)=(肝臟重量/ 體重)×100%。取部分肝左葉組織制備10% 肝勻漿，檢測(cè)GSH-Px 、SOD及MDA水平。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2結(jié)果

2.1橙皮苷對(duì)肝指數(shù)的影響

表1　橙皮苷對(duì)肝指數(shù)的影響

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01，下同。

模型組與正常組比較肝指數(shù)顯著升高(P<0.01)，而橙皮苷低、高劑量組與模型組比較肝指數(shù)顯著降低(P<0.01)，見(jiàn)表1。

2.2橙皮苷對(duì)血清ALT、AST及ALP的影響

模型組與對(duì)照組比較，ALT、AST及ALP水平顯著升高(P<0.01)。橙皮苷低、高劑量組與模型組比較，ALT、AST及ALP水平顯著降低(P<0.05或P<0.01)，其中高劑量組作用更明顯(P<0.01)，見(jiàn)表2。

表2　橙皮苷對(duì)血清ALT、AST及ALP的影響

2.3橙皮苷對(duì)肝組織中GSH-Px 、SOD及MDA的影響

模型組與正常組比較，肝組織勻漿中GSH-Px 、SOD的活性顯著降低(P<0.01)，MDA的含量顯著升高(P<0.01)；橙皮苷低、高劑量組與模型組比較，顯著升高肝組織中GSH-Px 、SOD活性，顯著降低MDA含量(P<0.01)，見(jiàn)表3。

表3　橙皮苷對(duì)肝組織中GSH-Px、SOD及MDA的影響

3討論

D-GalN導(dǎo)致小鼠急性肝損傷是一種經(jīng)典的篩選保肝藥物的動(dòng)物模型，與人類(lèi)急性肝炎的病理學(xué)變化相似[4]。D-GalN作為一種磷酸尿嘧啶核苷酸干擾劑，通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)生成二磷酸尿苷半乳糖使磷酸尿苷耗竭，引起肝細(xì)胞代謝障礙，導(dǎo)致肝細(xì)胞凋亡或死亡；同時(shí)過(guò)量自由基的產(chǎn)生和膜脂過(guò)氧化反應(yīng)，損傷細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，改變膜的通透性，影響肝細(xì)胞功能，最終導(dǎo)致肝損傷[5]。本研究發(fā)現(xiàn)，模型組肝功能指標(biāo)ALT、AST、ALP水平及肝指數(shù)顯著升高，表明肝損傷模型誘導(dǎo)成功；肝組織勻漿中GSH-Px 、SOD的活性顯著降低，MDA的含量顯著升高，提示模型組肝損傷與氧化應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。

橙皮苷給藥干預(yù)結(jié)果顯示，低、高劑量組與模型組相比，顯著降低了小鼠肝指數(shù)，降低ALT、AST及ALP水平，且有一定的劑量依賴(lài)關(guān)系，明顯改善肝組織病變程度，表明橙皮苷對(duì)D-GalN導(dǎo)致的急性肝損傷有一定的保護(hù)作用。研究還發(fā)現(xiàn)，肝組織勻漿中GSH-Px、SOD活性顯著升高，MDA含量顯著下降，機(jī)體內(nèi)抗氧化體系包括酶和非酶系統(tǒng)兩類(lèi)，酶系統(tǒng)中重要的抗氧化酶有GSH-Px和SOD等，能有效清除代謝過(guò)程中產(chǎn)生的自由基，MDA是膜脂過(guò)氧化的終產(chǎn)物，傷害細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，其含量高低可以判斷肝細(xì)胞損傷程度及氧化應(yīng)激水平[6]，提示橙皮苷對(duì)肝損傷的保護(hù)機(jī)制可能與提高肝臟抗氧化酶活性，清除氧自由基，防止過(guò)度的氧化應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。

本研究證實(shí)中藥有效成分橙皮苷對(duì)D-GalN誘導(dǎo)的急性肝損傷有較好的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與減輕小鼠肝損傷氧化應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)，此結(jié)果為開(kāi)發(fā)有效的病毒性肝炎防治藥物奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，但橙皮苷藥理學(xué)作用廣泛，是否還有其他保肝作用機(jī)理尚需進(jìn)一步探究。

[參考文獻(xiàn)]

[1]李榮，胡成穆，姜輝，等.橙皮苷的提取及其抗炎活性研究[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，42(5)：546～549.

[2]Morand C, Dubray C, Milenkovic D, et al.Hesperidin contributes to the vascular protective effects of orange juice: a randomized crossover study in healthy volunteers[J].Am J Clin Nutr, 2011,93(1)：73～80.

[3]Pradeep K, Ko K C, Choi M H, et al.Protective effect of hesperidin, a citrus flavanoglycone, against γ-radiation-induced tissue damage in Sprague-Dawley rats[J].J Med Food, 2012, 15(5)：419～427.

[4]Keppler D，Lesch R，Reutter W，et al.Experimental hepatitis induced by D-galactosamine[J].Exp Mol Pathol，1968，9(2)：279～290.

[5]Decker K，Keppler D.Galactosamine hepatitis: key role of the nucleotide deficiency period in the pathogenesis of cell injury and cell death[J].Rev Physiol Biochem Pharmacol，1974，71：77～106.

[6]Zheng S，Sanada H，Dohi H，et al.Suppressive Effect of Modified Arabinoxylan from Rice Bran (MGN-3) on D-Galactosamine-Induced IL-18 Expression and Hepatitis in Rats[J].Biosci Biotechnol Biochem，2012，76(5)：942～946.

[編輯]方多

[引著格式]龔子恒，范瑞琴.橙皮苷對(duì)D-氨基半乳糖小鼠急性肝損傷氧化應(yīng)激的影響[J].長(zhǎng)江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版)，2015，12(36)： 98～99，107.

[中圖分類(lèi)號(hào)]R285.5

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

[文章編號(hào)]1673-1409(2015)36-0098-02

通信作者：

[作者簡(jiǎn)介]龔子恒(1998-)，男，在讀學(xué)生；范瑞琴，fanruiqing79@163.com。

[收稿日期]2015-09-04 2015-08-25