網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2014-12-4 13:45網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/doi/10.3969/j.issn.1001-1978.2015.01.016.html

通心絡(luò)聯(lián)合阿托伐他汀、阿司匹林對(duì)家兔動(dòng)脈粥樣硬化早期血管外膜滋養(yǎng)血管新生的干預(yù)作用

郎艷松1，2， 秘紅英1，2,劉紅利2,袁國強(qiáng)3，4

(1. 河北醫(yī)科大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合教研室，河北 石家莊050017；2.河北以嶺醫(yī)藥研究院，國家中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)研究室(心腦血管絡(luò)病)，河北 石家莊050035；3.河北醫(yī)科大學(xué)附屬以嶺醫(yī)院心血管科(國家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)絡(luò)病學(xué)重點(diǎn)學(xué)科)，河北 石家莊050091；4. 河北省絡(luò)病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 石家莊050035)

中國圖書分類號(hào)：R-332；R322.121；R364.3；R543.5；R972.6

摘要：目的觀察通心絡(luò)聯(lián)合阿托伐他汀、阿司匹林對(duì)家兔動(dòng)脈粥樣硬化早期頸動(dòng)脈外膜滋養(yǎng)血管新生的影響。方法72只健康♀♂各半新西蘭白兔隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、通心絡(luò)(TXL)組、阿托伐他汀(ATO)組、阿司匹林(ASP)組、金三角(ATS)`([1])組，各12只。對(duì)照組給予普通飼料、模型組及各用藥組家兔均實(shí)施單側(cè)頸動(dòng)脈硅膠管包裹術(shù)復(fù)合高脂飼料喂養(yǎng)，TXL組給予通心絡(luò)超微粉混懸液0.3 g·kg`(-1)·d`(-1)灌胃，ATO組給予阿托伐他汀2.5 mg·kg`(-1)·d`(-1)灌胃，ASP組給予阿司匹林12 mg·kg`(-1)·d`(-1)灌胃，ATS組給予通心絡(luò)超微粉混懸液0.3 g·kg`(-1)·d`(-1)加阿托伐他汀2.5 mg·kg`(-1)·d`(-1)加阿司匹林12 mg·kg`(-1)·d`(-1)灌胃，連續(xù)給藥4周后取材，HE染色觀察頸動(dòng)脈內(nèi)中膜的變化；免疫組化法檢測(cè)頸動(dòng)脈外膜CD34表達(dá)情況；微球檢測(cè)頸動(dòng)脈微血管血流量的變化；RT-PCR和Western blot檢測(cè)頸動(dòng)脈組織中VEGF、VEGFR-2基因和蛋白表達(dá)情況。結(jié)果與對(duì)照組比較，模型組VEGF、VEGFR-2基因和蛋白表達(dá)以及微血管血流量明顯增強(qiáng)(P<0.01)。與模型組比較，各用藥組VEGF、VEGFR-2基因和蛋白表達(dá)以及微血管血流量明顯減弱(P<0.01,P<0.05)。與其他用藥組比較，ATS組VEGF、VEGFR-2基因和蛋白表達(dá)以及微血管血流量明顯減弱(P<0.01,P<0.05)。與ASP組比較，TXL組、ATO組VEGFR-2蛋白表達(dá)均明顯降低 (P<0.05)，ATO組微血管血流量減少明顯(P<0.05)。TXL組與ATO組兩組間比較差異無顯著性(P>0.05)。VEGF、VEGFR-2基因和VEGF蛋白表達(dá)組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。各用藥組頸動(dòng)脈外膜CD34表達(dá)減少。結(jié)論“ATS”方案有助于減少動(dòng)脈粥樣硬化早期頸動(dòng)脈VEGF、VEGFR-2表達(dá)，抑制血管外膜滋養(yǎng)血管新生，減少促炎物質(zhì)進(jìn)入血管中膜、內(nèi)膜，延緩動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程。

關(guān)鍵詞：動(dòng)脈粥樣硬化；滋養(yǎng)血管；血管內(nèi)皮生長因子；彩色微球；通心絡(luò)超微粉；阿司匹林；阿托伐他汀

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2015.01.016

文章編號(hào)：

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A1001-1978(2015)01-0071-06

收稿日期:2014-09-28,修回日期:2014-11-15

基金項(xiàng)目：國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973計(jì)劃)資助項(xiàng)目(No 2012CB518606)

作者簡介：郎艷松(1988-)，女，碩士,E-mail:769424369@qq.com ；

通訊作者袁國強(qiáng)(1977-)，男，博士，副主任醫(yī)師，研究方向：中西醫(yī)結(jié)合臨床心血管病，,E-mail:yuanguoqiang7508@163.com

Abstract:AimTo observe the effect of a treatment proposal named“Golden Triangle”(Atorvastatin, Tongxinluo,and Aspirin) on the vasa vasorum angiogenesis of early atherosclerosis lesions in rabbits carotid artery.MethodSeventy-two healthy New Zealand rabbits with half males and half females were divided into 6 groups randomly(n=12):control group,model group, Tongxinluo group(TXL), atorvastatin group(ATO), aspirin group(ASP),golden triangle group(ATS).The control group was fed with common feedstuff, and all the other groups′ right carotid arteries were equipped with the silicone tube,and were then fed with fatty feedstuff.The Tongxinluo group, the Atorvastatin group and the Aspirin group were given suspension of Tongxinluo supermicro powder(0.3 g·kg`(-1)·d`(-1)),Atorvastatin(2.5 mg·kg`(-1)·d`(-1))and Aspirin (12 mg·kg`(-1)·d`(-1)),the golden triangle group were given suspension of Tongxinluo supermicropowder(0.3g·kg`(-1)·d`(-1)),atorvastatin(2.5 mg·kg`(-1)·d`(-1))and Aspirin (12 mg·kg`(-1)·d`(-1)). All the groups were fed with medicine for 4 weeks.Tissue slice of carotid artery was stained with HE and observed under light microscope.The change of blood liquid was detected by biochemical assay.Immunohistochemical staining was used to detect the protein expression of CD34 around the carotid artery adventitia.Color microsphere method was used to detect the blood flow volume change of the cartoid artery microvascular. VEFG,VEGFR-2 gene and protein expression in the cartoid artery were detected by Real-time PCR and Western Blot.ResultCompared with the control group,the content of VEGF,VEGFR-2 gene and protein expression and the microvascular blood flow volume of cartoid artery microvascular in the model were significantly increased(P<0.01).But those in each drug group were lighter than those in the model group(P<0.01,P<0.05).In the ATS group，the content of VEGF,VEGFR-2 gene and protein expression and the microvascular blood flow volume of cartoid artery microvascular were lower than those in the TXL，ATO and ASP group(P<0.01,P<0.05).Compared with the ASP group,the content of VEGFR-2 protein expression was significantly decreased(P<0.01)in the TXL and ATO group.VEGF,VEGFR-2 gene and protein expression in different subgroups showed no significant difference(P>0.05).The content of CD34 was decreased in TongxinLuo group,atorvastatin group,aspirin group and ATS group.ConclusionThe ATS project can reduce the expression of VEGF,VEGFR-2, inhibit the vasa vasorum angiogenesis and decrease proinflammatory substances in the tunica media and intima of vascular wall. It plays an important role in intervening in the process of AS.

血管外膜在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用越來越受到重視[2]，血管外膜上有外彈力板、神經(jīng)的終末分支、滋養(yǎng)血管以及結(jié)締組織等，但近來研究發(fā)現(xiàn)在高膽固醇血癥豬模型上，新生滋養(yǎng)血管出現(xiàn)及密度增加在動(dòng)脈粥樣硬化早期就已出現(xiàn)[3]，滋養(yǎng)血管新生程度與動(dòng)脈粥樣硬化嚴(yán)重程度相關(guān)，此外新生的滋養(yǎng)血管能夠?yàn)榇傺孜镔|(zhì)及促動(dòng)脈粥樣硬化血液成分進(jìn)入血管壁提供通路[4]，易損斑塊內(nèi)的新生血管96.5%來源于血管外膜[5]。以往研究顯示通心絡(luò)[6]和他汀類藥物[7]主要通過保護(hù)血管內(nèi)皮、抗炎、抗氧化和調(diào)脂等作用發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用，阿司匹林[8]則主要通過抑制血小板活化、抗炎、抗氧化等機(jī)制延緩動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程。此外通心絡(luò)[9]、阿托伐他汀[10]、阿司匹林[11]均能夠減少斑塊內(nèi)血管新生，起到穩(wěn)定斑塊的作用。根據(jù)polypill策略[12]，即在固定藥物劑量的基礎(chǔ)上聯(lián)合用藥，有研究者提出他汀類藥物聯(lián)合應(yīng)用阿司匹林及中藥通心絡(luò)膠囊，形成有效防治缺血性心腦血管疾病的“金三角”(ATS)優(yōu)選方案，在減少危險(xiǎn)因素的同時(shí)未導(dǎo)致不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)提高，從而減少心腦血管的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。因此，我們?cè)噲D通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證通心絡(luò)聯(lián)合阿托伐他汀、阿司匹林對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化早期滋養(yǎng)血管新生的干預(yù)作用。

1材料與方法

1.1材料與設(shè)備3k15型高速冷凍離心機(jī)(Sigma)；T10型勻漿機(jī)(德國IKA公司)；JB-2A型恒溫磁力攪拌器(上海雷磁新涇儀器有限公司)；756型紫外分光光度計(jì)(美國Thermo Fisher公司)；ABI 7300 Real-Time PCR System(美國ABI公司)；通心絡(luò)超微粉(石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：20120924)；阿托伐他汀片(輝瑞制藥有限公司，批號(hào)：1237179); 阿司匹林(石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司，批號(hào)：018130311)；羧甲基纖維素鈉( 天津永大化學(xué)試劑開發(fā)中心，批號(hào)：20130418)；DYE-TRAK彩色微球(美國Triton Technology公司，批號(hào)：15TB0911)；VEGF鼠抗兔單克隆抗體(英國Abcam 公司，批號(hào)：ab1316)；VEGFR-2 山羊多克隆抗體(美國Santa Cruz公司，批號(hào)：sc-48161)。

1.2方法

1.2.1分組與造模健康新西蘭白兔(北京富豪實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖中心，批號(hào)：SCXR[京]2010-0010)，單籠飼養(yǎng)于河北省絡(luò)病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，體質(zhì)量(1.8±0.2) kg，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，將72只健康清潔級(jí)新西蘭白兔隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、通心絡(luò)(TXL)組、阿托伐他汀(ATO)組、阿司匹林(ASP)組、金三角(ATS)組，每組12只。對(duì)照組給予普通飼料，其余各組硅膠管包裹后給予高脂飼料(膽 固 醇1%，蛋黃粉7.5%，豬油5%，基礎(chǔ)飼料86.5%，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心加工定制)喂養(yǎng)[13]。自耳緣靜脈注射3%戊巴比妥(1 mL·kg-1)，將新西蘭白兔仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，脫毛后常規(guī)消毒，鋪洞巾，沿其頸部正中線剪開皮膚，逐層鈍性分離，右側(cè)頸動(dòng)脈鞘暴露后，仔細(xì)游離出右頸動(dòng)脈(RCA)約2.5 cm。用準(zhǔn)備好的的硅膠管縱向切開后包裹于RCA外，滴加青霉素預(yù)防感染。術(shù)后，縫合傷口，自主蘇醒。術(shù)后2次/日，連續(xù)3 d局部消毒，以預(yù)防感染。對(duì)照組家兔不作任何處理。 每天12h間隔照明，溫度20℃～25℃，濕度50%～70%，自由飲水和攝食。實(shí)驗(yàn)室每日按時(shí)通風(fēng)和消毒。

1.2.2標(biāo)本采集和處理喂養(yǎng)4周后，標(biāo)本采集前12 h禁食禁水，3%戊巴比妥鈉耳緣靜脈注射麻醉(1 mL·kg-1)，腹主動(dòng)脈取血。嚴(yán)格無菌操作，剃毛后消毒，沿頸部正中線剪開，快速分離并取下包管側(cè)頸動(dòng)脈，生理鹽水洗凈，一部分4%多聚甲醛保存，另一部分液氮凍存?zhèn)溆?。剩余組織制作石蠟切片，蘇木精-伊紅(HE)染色。

1.2.3病理標(biāo)本光鏡觀察將已固定標(biāo)本脫水、石蠟包埋切片(厚度約4 μm)，HE染色，光鏡觀察。

1.2.4免疫組化法檢測(cè)血管外膜CD34表達(dá)取固定標(biāo)本，脫水、石蠟包埋，切片,嚴(yán)格按照說明書行CD34免疫組織化學(xué)染色。

1.2.5彩色微球測(cè)量管壁微血管血流量

1.2.5.1測(cè)量原理自家兔左心室注入直徑約為15 μm的彩色微球，隨后微球隨體循環(huán)至全身并最終嵌頓于微血管中，將待測(cè)標(biāo)本中的彩色微球回收后，再用有機(jī)溶劑將彩色微球洗脫干凈，利用紫外分光光度計(jì)測(cè)得吸光度值，用以計(jì)算待測(cè)標(biāo)本的微循環(huán)血流量。

1.2.5.2測(cè)量方法用3%戊巴比妥鈉(30 mg·kg-1)耳緣靜脈麻醉后，于右側(cè)腹股溝處脫毛后常規(guī)消毒，剝離股動(dòng)脈并插管(管內(nèi)充滿50 kU·L-1的肝素生理鹽水，并與1 mL注射器相連)。胸部脫毛消毒，沿正中線剪開直至暴露心臟，10 s內(nèi)將微球(500 μL含有1.2×106個(gè)黃色微球，最大吸光度波長448 nm)注射于左心室，在注射前5 s于股動(dòng)脈插管持續(xù)采血1 min并抗凝。處死動(dòng)物后迅速取出包管處頸動(dòng)脈并放入聚丙烯離心管中，稱量血液樣本及組織樣本重量。最后利用Triton Technology公司的Excel宏文件(Triton1 Plus Control)計(jì)算各組標(biāo)本中管壁微血管血流量值(單位: μL/min·g)，實(shí)驗(yàn)具體操作方法嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.2.6VAGF/VEGFR-2的RT-PCR檢測(cè)①組織總RNA提取及定量：取50 mg組織用TRIzol試劑(Gibco)提取組織總RNA。751紫外分光光度計(jì)測(cè)A260和A280值；以檢測(cè)RNA純度并定量。②RNA完整性鑒定，取總RNA液3 μL，加上樣緩沖液1 μL，1%瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈觀察28S和18S條帶的完整性。③逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng),逆轉(zhuǎn)錄cDNA的合成反應(yīng)：取總RNA 6 μg，5×R．T．buffer 4 μL，dNTPs(10 mmol·L-1)2 μL，Random primer 1 μL，RNasin(5×107U·L-1)0.4 μL，AMV-RT(1×107U·L-1)1 μL，DEPC-H20 3．6 μL，充分混勻后，42 ℃反轉(zhuǎn)錄 40 min，95℃ 5 min滅活反轉(zhuǎn)錄酶;引物合成：VEGF(73 bp)：上游5′-GCGTTCTCAGTGGTGTTTGA-3′，下游5′-TGGCTTGTTCCTCCTTCTTG-3′；VEGFR-2(141 bp)：上游5′-GGTTCAAAGACAACGAGATGC-3′，下游5′-TCACACAGCCAAGGACACTG-3′。GAPDH(92 bp)：上游5′-AGAGATTGTGCGGGATGTC-3′，下游5′-CCAGTGAGGAAGATGCTGCT-3′；PCR反應(yīng)體系(25 μL)：R．T．product 5.0 μL，10×PCR buffer 2.5 μL，MgCl22.5 μL，primer each 1 μL，Taq DNA polymerase1 μL，DDW 13 μL；反應(yīng)條件：94℃ 3 min，94℃ 45 s，53℃ 45 s，72℃ 45 s，30個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸5 min。④RT-PCR產(chǎn)物半定量分析：取10 μL產(chǎn)物2%瓊脂糖電泳(85 mA，125 V)50 min，用凝膠圖像分析管理系統(tǒng)(珠海黑馬有限公司)進(jìn)行拍照和半定量分析，用任意單位(AU)表示凝膠譜帶面積×熒光強(qiáng)度值，VEGFR/GAPDH的AU比值代表VEGFmRNA相對(duì)表達(dá)水平,VEGFR-2/GAPDH的AU比值代表VEGFR-2mRNA相對(duì)表達(dá)水平。

1.2.7VAGF/VEGFR-2的Western blot檢測(cè)取頸動(dòng)脈組織約100 mg，加入1 mL細(xì)胞裂解液，待充分裂解后進(jìn)行定量，取蛋白樣品進(jìn)行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳完畢后對(duì)凝膠進(jìn)行半干轉(zhuǎn)膜。轉(zhuǎn)膜完畢，取出PVDF膜，置于封閉液中并室溫封閉2 h。將封閉后的PVDF膜置入稀釋后的一抗溶液中，4 ℃緩慢搖動(dòng)過夜。室溫洗膜后，將PVDF膜置入稀釋的辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗溶液中，室溫反應(yīng)2 h。抗體結(jié)合區(qū)帶用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)。以GAPDH作為內(nèi)參照，以目的基因吸光度值/GAPDH吸光度值的比值表示檢測(cè)樣品中目的蛋白的相對(duì)含量進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。

2.1各組兔頸動(dòng)脈光鏡觀察對(duì)照組：內(nèi)皮細(xì)胞與內(nèi)彈力板貼合緊密，內(nèi)皮細(xì)胞連續(xù)結(jié)構(gòu)完整。平滑肌細(xì)胞排列整齊；模型組：內(nèi)膜層明顯增生,內(nèi)皮細(xì)胞不連續(xù)，內(nèi)可見少量泡沫狀巨噬細(xì)胞形成；各用藥組內(nèi)膜層部分增厚，但內(nèi)膜損傷程度減輕，以阿托伐他汀組、通心絡(luò)組及ATS組改善更為明顯。見Fig 1。

2.2頸動(dòng)脈壁CD34免疫組織化學(xué)染色CD34在頸動(dòng)脈外膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞陽性表達(dá)呈現(xiàn)棕褐色，凡是呈現(xiàn)棕色的并與鄰近組織有明顯界限，可視為一個(gè)微血管；與空白組比較，模型組CD34在血管外膜新生滋養(yǎng)血管處表達(dá)增多；與模型組比較，各用藥組外膜新生滋養(yǎng)血管數(shù)量減少(Fig 2中箭頭所示)。2.3動(dòng)脈微血管血流量的變化與空白組比較，模型組頸動(dòng)脈微血管血流量增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與模型組比較，各用藥組頸動(dòng)脈微血流量減少(P<0.01)。ATS與其余各用藥組比較微血管血流量減少明顯(P<0.01)。ASP組微血管血流量改變與ATO組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，剩余兩組之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見Tab 1。

Tab 1Comparison of microvascular blood

GroupMicrovascularbloodflowvolume/μL·min-1·g-1Control21.92±1.96Model55.8±2.57**TXL43.69±1.59##△△ATO41.75±1.05##△△ASP45.06±1.44##△△%ATS38.33±1.57##

**P<0.01vscontrol group:##P<0.01vsmodel group:△△P<0.01vsATS group:%P<0.05vsATO

2.4頸動(dòng)脈外膜VEGF mRNA、VEGFR-2 mRNA的變化與正常組比較，模型組VEGF mRNA、VEGFR-2 mRNA 表達(dá)明顯升高(P<0.01)。與模型組比較，TXL、ATO、ASP、ATS組VEGF mRNA、VEGFR-2 mRNA 表達(dá)均明顯降低 (P<0.01,P<0.05)。ATS組VEGF mRNA、VEGFR-2 mRNA 表達(dá)均低于ASP、TXL及ATO組(P<0.01)，兩組間比較差異無顯著性(P>0.05)。見Tab 2。

Fig 1　Appearance of carotid artery morphology in all groups(HE staining×400)

Fig 2　Appearance of CD34 in carotid artery adventitia in all groups(IHC×200)

GroupVEGFVEGFR-2Control1.05±0.161.01±0.18Model4.12±0.51**3.95±0.14**TXL2.17±0.26#△△2.06±0.06#△△ATO1.92±0.33#△△2.73±0.53#△△ASP2.07±0.5#△△2.46±0.51##△△ATS1.21±0.19#1.1±0.12#

**P<0.01vscontrol group;#P<0.05,##P<0.01vsmodel group;△△P<0.01vsATS group

(P<0.01)。與模型組比較，TXL、ATO、ASP、ATS組 VEGF 蛋白表達(dá)均明顯降低 (P<0.01,P<0.05)；ATS組 VEGF 蛋白表達(dá)均低于ASP、TXL及ATO組(P<0.01,P<0.05)，兩組間比較差異無顯著性(P>0.05)。

2.5各組頸動(dòng)脈外膜VEGF、VEGFR-2蛋白水平與正常組比較，模型組VEGF蛋白表達(dá)明顯升高與正常組比較，模型組VEGFR-2蛋白表達(dá)明顯升高(P<0.01)。與模型組比較，TXL、ATO、ASP、ATS組 VEGFR-2蛋白表達(dá)均明顯降低 (P<0.01)；ATS組VEGFR-2蛋白表達(dá)均低于ASP、TXL及ATO組(P<0.01)，與ASP組比較，TXL組、ATO組VEGFR-2 蛋白表達(dá)均明顯降低 (P<0.05)，兩組間比較差異無顯著性(P>0.05)。見Tab 3。

3討論

隨著對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化研究機(jī)制的深入，血管外膜在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中的作用也越來越受到重視，滋養(yǎng)血管作為外膜中的一部分， 在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成之前，在動(dòng)脈粥樣硬化早期新生滋養(yǎng)血管就已出現(xiàn)[14]。新生的滋養(yǎng)血管同時(shí)也是炎性物質(zhì)等進(jìn)入血管壁的通路[4]。本實(shí)驗(yàn)中單側(cè)頸動(dòng)脈硅膠管包裹術(shù)復(fù)合高脂飼料喂養(yǎng)模型[15]是為了建立動(dòng)脈粥樣硬化早期滋養(yǎng)血管新生模型，以驗(yàn)證“金三角”方案對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化早期滋養(yǎng)血管新生的干預(yù)作用。

Fig 3Expression of VEGF and VEGFR-2 protein in the

adventitia of common carotid artery in all groups

A：Control group；B：Model group；C：TXL group；D：ATO group；E：ASP group；F:ATS group

Tab 3Levels of VEGF and VEGFR-2 protein expression in the

GroupVEGFVEGFR-2Control0.04±0.010.27±0.02Model0.31±0.01**0.61±0.02**TXL0.24±0.01##△0.40±0.03#△aATO0.18±0.01#△△0.39±0.02#△aASP0.21±0.04#△0.47±0.05#△ATS0.11±0.03#0.31±0.05#

**P<0.01vscontrol group;#P<0.01,##P<0.05vsmodel;△P<0.01,△△P<0.05vsATS group;aP<0.05vsASP group

血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)特異的作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的增生、遷移，從而發(fā)揮生理和病理性促血管新生的作用。VEGF促血管新生的作用主要通過兩個(gè)特異表達(dá)血管內(nèi)皮細(xì)胞的酪氨酸激酶受體：VEGFR-1和VEGFR-2，VEGF主要通過VEGFR-2促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖和新生血管形成[16]。VEGFR-2經(jīng)過自身胞質(zhì)內(nèi)酪氨酸殘基磷酸化，進(jìn)而激活下游信號(hào)通路，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的存活、增生和遷移，誘導(dǎo)新生血管形成，VEGF及其受體VEGFR-2通路是血管新生發(fā)生的主要通路。在滋養(yǎng)血管新生處可見大量VEGF、VEGFR-2表達(dá)[17]。采用彩色微球技術(shù)可較為準(zhǔn)確的測(cè)定局部血流狀況[18]，本實(shí)驗(yàn)采用該技術(shù)檢測(cè)頸動(dòng)脈上微血管的血流量，以間接證實(shí)頸動(dòng)脈外膜滋養(yǎng)血管新生的程度。CD34可間接反映頸動(dòng)脈外膜微血管數(shù)量[15]。

通心絡(luò)、他汀類藥物、阿司匹林均對(duì)斑塊內(nèi)新生血管有一定干預(yù)作用，此外，辛伐他汀可通過微血管內(nèi)皮保護(hù)作用發(fā)揮抑制滋養(yǎng)血管異常增生的作用，但是他汀類的副作用不可避免，既往研究已證實(shí)，“金三角”方案減少西藥副作用，上述實(shí)驗(yàn)已證實(shí)，3藥聯(lián)用組能明顯減少VEGF/VEGFR-2基因和蛋白表達(dá)，另外3藥聯(lián)用組同時(shí)可明顯減少頸動(dòng)脈微血管血流量，其效果優(yōu)于3藥單用?！敖鹑恰狈桨改軌驕p少血管外膜新生滋養(yǎng)血管數(shù)量，使炎性物質(zhì)進(jìn)入血管壁的途徑減少，從而為延緩動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程提供一種新途徑。但是“金三角”抑制滋養(yǎng)血管新生的相關(guān)機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

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Interventional effects of Tongxinluo combined with Atorvastatin and

Aspirin(ATS) on the angiogenesis of vasa vasorum

in the early stage of atherosclerosis

LANG Yan-song1,2,MI Hong-ying1,2，LIU Hong-Li2,YUAN Guo-qiang3,4

(1.DeptofIntegratedTraditionalChineseandWesternMedicineofHebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050017,China;

2.DeptofCardiology,YilingMedicalResearchInstituteofHebeiProvince,KeyLaboratoryofStateAdministrationof

TraditionalChineseMedicine(cardio-cerebralvascularnetworkdisease),Shijiazhuang050035,China; 3.Deptof

CadiovascularDiseases,YilingHospitalofHebeiMedicalUniversity,KeyDisciplineofStateAdministrationofTraditionalChinese

Medicine,Shijiazhuang050091; 4.KeyLaboratoryofNetworkDiseaseofHebeiProvince,Shijiazhuang050035,China)

Key words:atherosclerosis;vasa vasorum;VEGF;color microsphere;Tongxinluo supermicropowder;Atorvastatin;Aspirin