丁快快，劉文麗,3，曾尚梅,3，肖春生，李偉

1湖南農業(yè)大學商學院，湖南省長沙市 410128；

2中國煙草總公司湖南省公司，湖南省長沙市 410004；

3湖南涉農企業(yè)發(fā)展研究中心，湖南省長沙市 410128

蔡聯合1, 陳媛媛2, 謝小東3, 魏攀3, 張劍鋒3, 王忠3,李鋒3, 魏春陽3, 王燃3, 武明珠3, 羅朝鵬3 ,楊軍3，林福呈3

1 廣西中煙工業(yè)有限責任公司，南寧市北湖南路28號 530001；

2中原工學院，新鄭雙湖經濟開發(fā)區(qū)淮河路1號451191；

3中國煙草總公司鄭州煙草研究院，鄭州高新技術產業(yè)開發(fā)區(qū)楓楊街2號 450001

煙農專業(yè)合作社財務管理規(guī)范化研究
——以湖南省41家示范社為例

丁快快1，劉文麗1,3，曾尚梅1,3，肖春生2，李偉2

1湖南農業(yè)大學商學院，湖南省長沙市 410128；

2中國煙草總公司湖南省公司，湖南省長沙市 410004；

3湖南涉農企業(yè)發(fā)展研究中心，湖南省長沙市 410128

在湖南省41家示范社問卷調查與實地訪談的基礎上，對示范社在財務管理制度、財會人員、會計核算、審計與監(jiān)管、成員的合法權益保障等財務管理工作內容中出現的現象做了概括性總結和原因分析，最后提出實現財務管理工作規(guī)范化的合理建議。

煙農專業(yè)合作社；財務管理；會計核算；審計

通過文獻檢索發(fā)現，國內對煙農合作組織常見的叫法有煙草合作社、煙葉生產合作社、烤煙專業(yè)合作社等等，尚未形成一致的稱呼，因此在本文中統(tǒng)一使用“煙農專業(yè)合作社”稱呼（以下簡稱合作社）。煙農專業(yè)合作社是指在煙田家庭承包經營的基礎上，煙葉生產者自愿聯合、自主管理、自我服務、統(tǒng)分結合、雙層經營的煙農專業(yè)合作經濟組織[1]。湖南是農業(yè)大省，也是煙草農業(yè)大省，煙葉生產是湖南煙葉產區(qū)農民脫貧致富、地方財政增收的重要經濟來源。而煙農專業(yè)合作社已具備制度創(chuàng)新[2]，因而大力發(fā)展合作社是發(fā)展現代煙草農業(yè)的必然要求，是保持煙葉生產健康發(fā)展的迫切需要，對促進湖南農業(yè)結構調整，推進山區(qū)經濟的發(fā)展有著至關重要的意義。

隨著湖南煙農專業(yè)合作社的蓬勃發(fā)展，合作社規(guī)模和收入不斷增加，其財務管理工作中的問題也層出不窮，在一定程度上制約著合作社的健康發(fā)展。財務管理作為合作社規(guī)范化建設的基礎和核心,對保證合作社的可持續(xù)發(fā)展至關重要[3]。規(guī)范合作社的財務管理工作有利于促進合作社健康發(fā)展，有利于保障成員合法權益，勢在必行。為此，課題組于2014年3月對湖南省煙農專業(yè)合作社2013年度財務管理工作展開了實地調研與分析，涉及湖南省10個市州、31個產煙縣、41家示范社。

1 湖南煙農專業(yè)合作社財務管理存在的問題及原因

2013年全省煙農專業(yè)合作社由原有的247家整合為125家，其中示范社有41家，占合作社總數的32.8%；級別為行業(yè)示范社的有12家，占示范社總數的29%；級別為省級示范社的有29家，占示范社總數的71%。數據顯示，其中32.8%的合作社能夠適應示范社建設的要求，在民主管理、專業(yè)化服務效果等方面為其他合作社樹立了典型模范，同時也得到了煙草部門和各級財政的支持，能夠比較健康地發(fā)展。據統(tǒng)計，全省2013年41個示范社的總收入達26599萬元，扣除各項支出24172萬元之后，盈余2427萬元，社均收入648.76萬元，社均盈余59.20萬元，共返還給煙農成員的盈余1562萬元，戶均達到580元。但是，從調研結果中發(fā)現，示范社在財務管理工作中還存在一些突出問題。

1.1 財務管理制度不健全，執(zhí)行不到位

示范社基本上依照《農民專業(yè)合作社法》的規(guī)定成立，制定章程，設立三會：理事會、監(jiān)事會、成員（代表）大會，內部管理制度、財務管理制度等。但是，部分示范社沒有建立在章程指導下的與合作社業(yè)務相對應的實用財務管理制度，比如票據管理制度、資產管護制度、成員賬戶管理制度等。實際情況如下：

表1 湖南省41家示范社財務管理制度設立情況Tab.1 Financial management system in 41 model cooperatives of Hunan province

由于財務制度不健全，造成30%左右示范社的財務管理工作混亂，如白條入賬、會計信息質量失真等現象屢屢發(fā)生，盈余分配方案的決定以及財務公開等重大問題缺乏民主監(jiān)督，只關注費用的報銷、審批，不強調資產管理、收入管理和往來款項、經濟業(yè)務的監(jiān)督等。

11家示范社有較完善的財務制度并將制度裝框掛在辦公室醒目的位置，但沒有嚴格執(zhí)行到位。如：2家合作社忽視貨幣資金管理制度的規(guī)定，任意金額的交易都通過現金完成，還有3家合作社存在記賬人員代替出納人員工作的現象等等。深究其原因：一是合作社的管理人員和普通成員自身素質不高和能力不足；二是合作社側重經營業(yè)務、輕財務管理的問題比較突出，對財務制度存在較大的抵觸情緒。三是合作社負責人的小農意識表現愈顯突出，他們安于現狀，憑經驗而不是根據會計信息作決策，害怕“露富”，也不愿意公布會計信息和接受會計監(jiān)督[4]。這些因素都制約合作社財務管理制度的實施，造成合作社經營的不穩(wěn)定性，擴大了經營風險。

1.2 財會人員素質參差不齊

由于合作社大多地處偏僻，工作條件有限，合作社很難找到業(yè)務水平較高的財會人員，因此傳統(tǒng)的流水賬在合作社中還比較普遍。同時，合作社能給財會人員的薪酬遠低于同地區(qū)的企業(yè)，財會人員的流失現象日益嚴重，使得會計資料保管不善，進而使得財務數據銜接不上而影響會計信息質量。據調查，98.4%的合作社都是委托農村經營管理機構或財政所代理記賬，這些合作社一般是一個月或者一個季度進行一次賬務處理，會計核算沒有及時進行，從而導致形成的會計信息不完整、不真實。另外，現階段為合作社代理記賬的會計人員以前都是從事企業(yè)會計工作，不熟悉合作社財務會計制度，這些兼職會計也不常駐合作社，對合作社業(yè)務不熟悉，年齡也普遍較大、接受新知識能力較弱，從而造成目前合作社普遍存在會計業(yè)務水平不高的現象。對財會人員的調研結果顯示如表2和表3，數據表明煙農專業(yè)合作社的財會人員專業(yè)化水平整體偏低，這顯然不符合合作社未來發(fā)展的需要。

表2 湖南省41家示范社財會人員學歷分布Tab.2 Education degree of accountants in 41 model cooperatives of Hunan province

表3 湖南省41家示范社財會人員技術職稱Tab.3 Technical title of accountants in 41 model cooperatives of Hunan province

1.3 會計核算不規(guī)范

1.3.1 會計基礎工作“四不規(guī)范”

會計基礎工作質量的好壞直接影響合作社后續(xù)會計核算工作。合作社會計基礎工作問題主要體現在“四不規(guī)范”上：

原始憑證不規(guī)范。一是合作社存在大量白條入賬，其原因一方面是煙農合作社在提供專業(yè)化服務中，合作社作為專業(yè)化服務提供方未能開具發(fā)票，另一方面是合作社為降低成本，沒有索取發(fā)票，或者以出售方無法提供正式發(fā)票為由，僅以手寫的白紙黑字代替正式發(fā)票，從而無法真實核算生產經營成本。二是取得的原始憑證不合規(guī)，如銀行進賬單和現金繳款單回單上所蓋的業(yè)務辦訖章無日期；不同日期的業(yè)務所取得的收據的編號是連續(xù)的；永州1家示范社有自制的原始憑證但填寫內容不完整，如現金入股時缺少合作社財務專用章。三是原始憑證審批手續(xù)不規(guī)范，相關責任人不全，有的經辦人、審批就是同一個人。

會計科目使用不規(guī)范。一方面是合作社未按《農民專業(yè)合作社財務會計制度（試行）》的規(guī)定設置會計科目，而是沿用《企業(yè)會計制度》規(guī)定的會計科目。如以“其他應收款”代替“成員往來”，以“實收資本”代替“股金”等等。另一方面是有關會計科目之間的核算內容互相混淆。如：1家示范社將煙草部門補貼投入的實物記入“資本公積”科目，而按照合作社會計制度規(guī)定，應計人“專項基金”科目，而不應記入“資本公積”。

記賬憑證不規(guī)范。摘要不清晰，內容不完整，憑證要素不齊全，部分編號不連續(xù)，54%的示范社只有記賬，沒有制單，更沒有審核。如1家示范社的一筆業(yè)務是工行對公的扣款，銀行回單的金額是60萬元，而記賬憑證記錄的金額為72.67萬元。還有少數合作社的記賬憑證編制不及時，如1家示范社經濟業(yè)務已發(fā)生了2年，因業(yè)務量較少，合作社會計就選擇在一個年度編制記賬憑證，這就違反了會計分期假設，造成會計信息失效的后果。

會計賬簿不規(guī)范。合作社沒有按要求購置會計賬簿，或沒有按要求設置和使用會計賬簿，例如：1家示范社的現金日記賬、銀行存款日記賬、總賬連續(xù)幾年使用同一本賬簿，1家示范社的現金、銀行存款日記賬沒有分設，用一本流水賬記錄。示范社“五賬”不全，即總賬、明細分類賬、現金日記賬、銀行日記賬和固定資產明細賬不全，有1家示范社甚至出現有表無賬情況。對賬不及時；在進行錯誤更正時不按要求，存在挖、刮、補現象；月、季、半年、年終合計、累計、結轉不規(guī)范。

1.3.2 重點會計核算內容不完善

成員往來核算不完善。與企業(yè)和事業(yè)單位相比，合作社在成員構成、業(yè)務往來、盈余分配和公積金量化等具體會計核算事項有其獨特性，因此要重視成員往來的核算[5]。示范社成員往來的核算突出的問題主要有四種：一是2家示范社沒有設置成員賬戶。二是設置了成員賬戶，但成員賬戶的內容記載不完整。根據《綜合服務型煙農合作社建設指南》的規(guī)定，成員賬戶應記錄五個方面的內容，而調研結果顯示，大約65.9%的示范社成員賬戶同時包含五個方面的內容，其他合作社的成員賬戶只記錄部分內容或者只有該成員與本社的交易量（額）。三是設置了成員賬戶，但是沒有按照規(guī)定進行賬務處理。如：1家示范社共有3個成員，根據章程規(guī)定A、B、C出資額分別為10萬元、5萬元、5萬元。2月2日，收到A、B兩個成員的出資額，共150000元，C的出資額于3日支付。在處理該種業(yè)務時，合作社沒有通過成員往來賬戶進行反映，認為應該通過“應收款”賬戶對未付款進行處理，將會計分錄錯誤地寫成：借：銀行存款150000，應收款一成員C50000；貸：股金一各成員200000。正確賬務處理步驟應為：①在工商登記時，應該根據出資清單和合作社章程明晰股權，做如下會計分錄：借：成員往來一各成員200000；貸：股金一各成員200000；②在收到A、B兩個成員的出資額時，根據銀行進賬單，做如下會計分錄：借：銀行存款150000；貸：成員往來一A、B成員150000；③在收到C交款后的銀行進賬單后，做如下會計分錄借：銀行存款50000；貸：成員往來一成員C50000。四是現階段成員賬戶設計的格式不科學，記錄工作量大，造成了大量的人力財力物力耗費，還不便于查找合作社與成員的詳細業(yè)務往來。

成本核算過于簡單化。一是合作社產品物資的收發(fā)不計量、不登記，對后續(xù)成本核算工作造成基礎性的影響。二是有半數以上合作社未以成本核算對象和成本項目作為生產成本的明細科目歸集生產費用。如1家示范社綜合利用設施種植西瓜、蘑菇、木耳三種作物，分別投人種子、化肥、農藥、人工等。在核算時，各種農作物混淆，只記農作物，或者以設施綜合利用作為明細科目歸集費用，或者將多種農作物共同發(fā)生的生產費用全部記在某一種作物上。三是按照收付實現制核算，而沒有按權責發(fā)生制進行，造成總成本不正確，致使當年成本虛高虛低現象。造成以上問題的原因是合作社經營管理者管理水平低，對成本核算工作缺乏重視，以及合作社會計較低的專業(yè)素質而只能選擇傳統(tǒng)的簡單做法。

盈余分配核算背離“社員惠利”原則，分配亂象叢生。在盈余分配核算方面存在的問題主要有四種：一是由于合作社盈余分配制度不健全，普通成員被排斥在合作社盈余分配的范圍之外。二是盈余分配的項目及提取的程序不規(guī)范。煙農專業(yè)合作社還處于發(fā)展的初級階段，盈余分配的提取缺乏合理的標準章程，因而提取盈余分配的各個項目并不全面。數據顯示，提取盈余公積的示范社數量為38個，占比為92.68%；提取公益金的示范社數量為19個，占比為46.34%；提取資產管護經費的示范社數量為28個，占比為68.29%。同時，合作社在盈余分配各項目提取程序上比較隨意，從合作社負責人得知，如公共積累的提取大多數都是按照本合作社的盈余隨意提取的。三是合作社存在盈余分配的比例偏低，盈余返還不及時、不透明的情況，成員從合作社獲得的實惠并不明顯。從調研數據中得知，2013年有盈余的示范社為41家，其中對社員有盈余返還的有 35家，沒有盈余返還的有6家，后者占示范社總數的15%。盈余返還比例在35家示范社中也極不平衡，最低的返還比例僅為可分配盈余額的16.36%左右，最高的返還比例達到100%。四是合作社只分配一次，而沒有按照章程進行第二次分配核算。如：1家示范社2013年盈余5萬元，2012年未發(fā)生虧損，提取盈余公積0.5萬元。合作社便只進行了一次盈余分配，會計分錄如下：借：盈余分配一各項分配盈余返還 27000；貸：應付盈余返還一各成員 27000。其實，實行二次分配的初衷是在產中和產后的專用性投資保護中尋找一個平衡，交易量（額）返還，側重于保護農產品生產環(huán)節(jié)的農戶專用性投資；股金分紅，側重于保護資金和技術所有者產后環(huán)節(jié)的專用性投資[6]。因此，合作社會計在進行了第一次分配后，應該緊接著進行第二次分配即剩余盈余返還，并做如下會計分錄：借：盈余分配一各項分配（剩余返還）18000；貸：應付剩余盈余一各出資成員18000。造成以上問題的原因有：合作社盈余分配的決策權過于集中；管理者對合作社的普惠宗旨理解不到位；成員賬戶的編制不完整；社員對盈余分配缺乏了解；合作社會計專業(yè)素質低。1.3.3 會計報表編制不合理。

在會計報表方面存在的問題主要有以下三種：一是6家示范社按照小企業(yè)會計制度編制了資產負債表、利潤表、現金流量表，而沒有按照合作社會計制度的要求提供資產負債表、盈余及盈余分配表、成員權益變動表等。二是80%左右的示范社在年度終了時除編制了資產負債表和盈余及盈余分配表外，其他會計報表卻未能按要求編制。三是部分示范社編制的會計報表的內外勾稽關系不準確，資產負債表、盈余及盈余分配表和成員權益變動表之間相同項目的期末余額不相等。造成以上問題的原因有：一是合作社管理層還沒有明確煙農專業(yè)合作社與小企業(yè)是存在區(qū)別的；二是現階段合作社會計以前都是從事企業(yè)會計工作，習慣于做小企業(yè)報表；三是部分地區(qū)稅務專管員要求合作社按小企業(yè)會計報表報稅；四是現階段合作社會計專業(yè)素質普遍較低，難以準確、完整地編制會計報表。

1.4 審計流于形式，各方監(jiān)管乏力

在合作社，監(jiān)事會是監(jiān)督理事會執(zhí)行成員代表大會決策的監(jiān)督機構，并負責合作社內部審計工作。在調研過程中發(fā)現，合作社雖然推行民主管理，非營利經營，但治理層和監(jiān)管層可能會因利益而合謀，此時監(jiān)事會的監(jiān)管基本上流于形式，如果沒有獨立的外部審計機構的監(jiān)督，合作社的民主經營、民主管理將無從談起。

表4 湖南省41家示范社審計工作實施情況統(tǒng)計表Tab.4 Auditing condition in 41 model cooperatives of Hunan province

數據顯示，僅提供內部審計報告的示范社有23家，占總數的56%；既提供內部審計報告又提供外部審計報告的示范社僅1家，占總數的2%；兩者都沒有提供的示范社有17家，占總數的42%。另外，合作社所提供的審計報告都沒有提出整改意見或者建設性的意見，90%都是一般描述性的分析，也沒有將審計結果向成員大會（代表大會）報告，接受成員監(jiān)督。

各方監(jiān)管乏力的原因主要有：第一是煙草部門對會計信息的非有效需求，對合作社的財務沒有進行監(jiān)督和審計；如1家示范社會計核算不規(guī)范，也照樣從煙草部門得到補貼資金。第二是地方財政部門、農村經營管理部門以及煙草部門相互推諉管理和指導責任；第三是合作社普通成員不了解《農民專業(yè)合作社法》和《農民專業(yè)合作社財務會計制度(試行)》，無法利用會計信息來保障自己的合法權益，從而使得合作社會計信息供給失去信息需求和成員監(jiān)督，如部分示范社的成員（代表）大會并不以會計信息為依據表決重大事項，而是由核心成員說了算。

2 規(guī)范湖南煙農專業(yè)合作社財務管理工作的建議

2.1 提高管理者水平，健全財務管理制度

首先，需要加強對合作社管理人員的培訓力度，增強管理人員的法律規(guī)章意識、規(guī)范管理意識。其次，農民專業(yè)合作社能否成功運轉,關鍵看它的內部運行機制,而財務管理制度是內部機制有效運行的重要保證[7]。因此，合作社管理者應依據相關法律法規(guī)，并結合實際情況，建立健全財務管理制度。從合作社的實際需要出發(fā)，健全的財務管理制度應包括如表1中的13種。同時，煙草部門和其他政府部門在評選合作社示范社或者發(fā)放補貼扶持資金時，應將財務管理制度的建立、健全以及執(zhí)行作為考核的核心指標，從而敦促合作社達到要求。

2.2 培養(yǎng)一批財務業(yè)務一體化的財會人員

財務管理要走向規(guī)范化，就離不開一批既懂業(yè)務又懂財務的財會人員，因為財會人員才是財務工作的具體執(zhí)行者。財會人員的建設要充分利用社會各界的資源，應聯合煙草部門、農業(yè)院校以及合作社進行財會人員建設。另外，由于財務業(yè)務一體化的目標以及高技術人才和大學生群體對合作社認知程度低且沒有歸屬感，所選取培養(yǎng)的財會人員應出自合作社內部。

2.3 依法完善會計核算內容，提高會計核算水平

2.3.1 扎實規(guī)范會計基礎工作，堅實會計后續(xù)核算基礎

合作社要嚴格按 《會計法》、《農民專業(yè)合作社財務會計制度（試行）》的規(guī)定，從各方面落實會計核算基礎工作。一是原始憑證必須具備齊全的要素，填寫準確，才能制單，另外堅決抵制白條入賬。進一步規(guī)范原始憑證的“三性”即合法性、合規(guī)性、合理性審查。二是嚴格按照規(guī)定設置和使用會計科目。三是記賬憑證要如實根據原始憑證反映的經濟信息填制，同時實現各要素以及記賬、制單、審核都要齊全。四是健全會計賬簿，賬簿登記要及時明了，對賬、錯賬更正、結賬要有條不紊進行，最終實現“四相符”即賬款相符、賬物相符、賬證相符、賬表相符。

2.3.2 完善重點會計核算內容，提高會計信息質量

《農民專業(yè)合作社法》第三十六條明確規(guī)定,農民專業(yè)合作社應當為每個成員設立成員賬戶。因此，合作社要依法且科學合理地設立成員賬戶，并準確、完整記載五個方面的內容，保障成員的合理利益，提高成員的積極性。要完善合作社的成本核算應當建立健全存貨內部控制制度，建立保管人員崗位責任制。其次，成本項目的歸集與分配應考慮合作社的自身特點與管理需要[8]。為了直觀反映某產品或專業(yè)化服務的總成本及其具體項目的開支情況，應以產品或專業(yè)化服務名稱作為二級明細科目，如大白菜、育苗、植保等，以費用項目作為三級明細科目，如種苗費、肥料費、農藥費、人工費用等。再次，應正確劃分各項費用支出界限。最后，合作社應嚴格按照要求進行正確的賬務處理。分配制度實質是合作社的靈魂，它既是社員參與社內交易的核心激勵手段，也是合作社吸引非社員加入的關鍵制度安排[9]。因此，合作社應結合自身的特點和《農民專業(yè)合作社法》的規(guī)定，以“社員惠顧返利”原則完善盈余分配制度，規(guī)范分配標準，優(yōu)化盈余分配的比例，按時召開成員代表大會。

2.3.3 統(tǒng)一標準，優(yōu)化會計報表編制

合作社會計須按照《農民專業(yè)合作社財務會計制度(試行)》的規(guī)定準確、完整地編制資產負債表、盈余及盈余分配表、成員權益變動表、科目余額表和收支明細表、財務狀況說明書等，并及時報送相關部門。財政部門、農村經營管理部門以及煙草部門應以合作社是否提供符合要求的會計報表作為合作社獲取補貼和項目的重要條件之一。

2.4 內外部審計雙管齊下，各方力量齊抓共管

采用內外審計結合的方式加強對合作社的審計監(jiān)督。一方面，要求合作社設立監(jiān)事會，由其負責對本社財務進行內部審計，并將審計結果向成員（代表）大會報告；另一方面，為了防止在經營過程中可能因利益問題致使治理層和監(jiān)管層利益合謀，使監(jiān)事會的監(jiān)管作用無法發(fā)揮，還必須借助外部獨立的審計機構。此外，財政部門依照《會計法》的規(guī)定職責，對合作社的會計工作進行管理和監(jiān)督；農村經營管理部門和煙草部門則合作構建一份湖南省煙農專業(yè)合作社績效評價指標體系，每年對全省合作社的績效進行考核，比較不同合作社的經營管理水平，并提出整改意見；建立普通成員對合作社監(jiān)督的上報機制，同時加強對普通成員的培訓來提高其素質，從而提高普通成員的監(jiān)督意識。

2.5 探索建立湖南省煙農專業(yè)合作社信息服務平臺

省煙草部門和農經部門可以借鑒上海市新型農業(yè)經營主體信息管理系統(tǒng)的經驗來探索建立湖南省煙農專業(yè)合作社信息服務平臺，包括合作社信息網上公開、綜合利用產品電子商務、成員遠程培訓、會計電算化管理、合作社績效考核等綜合管理服務功能，全面實現合作社經營、銷售的信息化，從而帶動合作社財務管理的制度化、規(guī)范化、信息化的建設。

2.6 矯正“重數量，輕質量”的示范社建設路徑

在合作社發(fā)展的現階段,由于急功近利、較低的文化素質以及經驗的缺乏, 合作社管理者大多以本行業(yè)的模范合作社為標桿,簡單模仿或照搬示范社的整個發(fā)展過程。因此, 各級煙草部門要按照“高起點、高標準、高效益”的要求，科學制定標準，嚴格評定程序，強化動態(tài)管理，重點指導扶持，扎實推進合作社示范社建設工作。需要強調的是，“示范社”不一定是規(guī)模最大發(fā)展最好的合作社,而是在煙草行業(yè)各發(fā)展階段下具有一定代表性的合作社。

[1]黃祖輝,高鈺玲,鄧啟明. 農民專業(yè)合作社民主管理與外部介入的均衡——成員利益至上[J].福建論壇(人文社會科學版),2012,02:44-48.

[2]戴成宗,何軼,楊雙劍等.煙農專業(yè)合作社發(fā)展探析[J].中國煙草學報,2012,02:82-87.

[3]任坐田.農民專業(yè)合作社財務管理規(guī)范[J].經濟管理,2006,19:87-89.

[4]盧新國.農民專業(yè)合作社財會制度實施難的原因及對策[J].統(tǒng)計與決策,2009,22:76-78.

[5]王曉芊.關于完善農民專業(yè)合作社成員賬戶及其會計科目的思考[J].農村經濟,2010,09:128-129.

[6]王玉華. 當前農民合作社財務管理存在的問題及改進措施[J].農業(yè)經濟,2015,02:93-94.

[7]余艷鋒,羅青平,戴天放等.構建適宜我國農民專業(yè)合作社特征的財務管理制度[J]. 農村經濟,2009,01:126-129.

[8]李視友.淺議農民專業(yè)合作社農產品成本核算[J].財會月刊,2013,09:52-53.

[9]王麗敏.農民專業(yè)合作社會計制度規(guī)范化的現實思考[J].農業(yè)經濟,2009,12:52-53.

:DING Kuaikuai, LIU Wenli, ZENG Shangmei, et al. Study on standardization of financial management in tobacco farmer cooperatives: taking 41 demonstration cooperatives in Hunan province as examples [J]. Acta Tabacaria Sinica, 2015,21(6)

生物技術

煙草脈帶花葉病毒基因組序列分析

蔡聯合1, 陳媛媛2, 謝小東3, 魏攀3, 張劍鋒3, 王忠3,李鋒3, 魏春陽3, 王燃3, 武明珠3, 羅朝鵬3,楊軍3，林福呈3

1 廣西中煙工業(yè)有限責任公司，南寧市北湖南路28號 530001；

2中原工學院，新鄭雙湖經濟開發(fā)區(qū)淮河路1號451191；

3中國煙草總公司鄭州煙草研究院，鄭州高新技術產業(yè)開發(fā)區(qū)楓楊街2號 450001

摘 要：為了探明煙草脈帶花葉病毒危害和流行的機制，使用RT-PCR技術擴增獲得TVBMV云南分離物YN9.1基因組全序列，并進行了基因組結構、序列同源性、氨基酸保守基序、系統(tǒng)進化和重組分析。結果表明：（1）YN9.1基因組具有Potyvirus屬病毒典型特征，含有在Potyvirus屬病毒中較為少見的NIb/CP切割位點Q/N；（2）YN9.1與其它分離物核苷酸序列同源性為90.5-91.1%，氨基酸序列同源性為95.2-96.2%。與YND核苷酸和氨基酸序列同源性最高；（3）對HC-Pro和CP保守基序進行了分析。YN9.1具有RITC、PTK、DAG等病毒蚜蟲傳播保守基序，其中RITC在Potyvirus屬病毒中常見形式為KITC；（4）系統(tǒng)進化樹分析結果顯示，TVBMV進化形成2個組，云南分離物獨立進化形成一組，TVBMV進化與地域具有明顯的相關性；（5）重組分析發(fā)現PY為ZC1和YN的組內重組體，重組位點位于HC-Pro 3’末端和NIb 5’端。

關鍵詞：煙草脈帶花葉病毒；保守基序；序列分析；進化分析；重組分析

引用本文：蔡聯合, 陳媛媛, 謝小東,等. 煙草脈帶花葉病毒基因組序列分析[J]. 中國煙草學報，2015,21（6）

作者簡介：蔡聯合(1982—)，農藝師，從事煙草原料、倉儲及加工等方面研究工作，Tel：0771-8098546，Email：cailianhe12@163.com

通訊作者：羅朝鵬(1981—)，工程師，主要從事煙草病毒分子生物學和防治技術, 以及煙草分子生物學研究，Tel: 0371-67672307，Email: zhiwubingdu@sohu.com

收稿日期：2015-01-05

煙草脈帶花葉病毒(Tobacco vein banding mosaic virus, TVBMV)為馬鈴薯Y病毒科(Potyviridae)馬鈴薯Y病毒屬(Potyvirus)病毒。病毒粒體為彎曲線狀，長度約為780nm，直徑約為15nm[1]。該病毒主要通過蚜蟲以非持久性方式傳播，只侵染茄科植物。在莧色藜(C.amaranticolor)和昆諾藜(C.quinoa)葉片上產生枯斑，系統(tǒng)侵染本氏煙(N.benthamiana)、普通煙(N.tobacum)、番茄(L.esculentum)、曼陀羅(Datura stramonium)等[1,6,7]。煙草感染TVBMV后葉片表現為沿葉脈的帶狀綠島和深綠色斑塊癥狀[2,8]。TVBMV曾給臺灣和美國等地區(qū)的煙葉生產造成嚴重威脅[8-10]。近年來，TVBMV在我國多個主產煙區(qū)均有發(fā)生。1989-1991年進行的“全國煙草侵染性病害調查研究”項目研究結果表明，TVBMV只在福建、廣東和山東發(fā)現，為偶發(fā)病害[3]。其后的研究發(fā)現，TVBMV在貴州已經發(fā)展為次要病害[4]。近年來，TVBMV在我國云南、河南、山東等煙葉主產區(qū)的發(fā)生和危害呈上升趨勢[5,11,12]。由于田間癥狀與馬鈴薯 Y 病毒(Potato virus Y, PVY)相似，因此，TVBMV給我國煙葉生產造成的損失可能被大大低估[11]。

TVBMV基因組研究較晚。1994年，2個研究組分別報道了TVBMV基因組3’末端部分序列[13,14]，但直到2007年，首個基因組才被測定[6]，2010年測定了第二個基因組全序列[12]。在基因組研究的同時，TVBMV系統(tǒng)進化和分子變異研究已經開展。Tian報道了TVBMV 12個中國分離物3’-末端部分序列，根據CP基因進化關系，將其分為3個組。并且發(fā)現TVBMV基因組存在重組現象[11]。Zhang測定了40個中國分離物不同區(qū)域基因序列，根據這些區(qū)域，可以分為地域相關的2-3個組。分析發(fā)現在這些分離物中31%為重組體[15]。Yuan測定了10個TVBMV基因組序列，深入分析發(fā)現TVBMV可以分為不同的亞組，并且在10個分離物中有3個為重組體[16]。TVBMV在我國煙葉主產區(qū)的危害不斷上升，在此背景下，本文從云南煙區(qū)煙草樣品中獲得一株新的TVBMV分離物，在基因組水平進行了生物信息學分析，明確了該分離物基因組序列特征，系統(tǒng)進化關系和TVBMV重組株系及重組株系基因組組成?；蚪M水平的研究，對于明確TVBMV危害和流行的機理，進而制定針對性的防治措施具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 植物材料及試劑

病毒感染的煙草葉片采自云南煙區(qū)，采集時間為2012 年7月，經過ELISA檢測后保存于-80度冰箱。

AMV反轉錄酶、RNA酶抑制劑、XL10-Gold感受態(tài)細胞、DNA聚合酶、pBLUE -T載體、GenePure Gel Purification Kit、GenePure Plastid Mini Kit、SuperPure Plantpoly RNA Kit和DNA標準分子量均購自鄭州安賽生物科技有限公司。其它試劑均為進口或國產分析純。引物合成和測序在北京六合華大基因科技股份有限公司進行，引物見表1。

表1 基因組擴增引物Tab.1 Primers used to ampli fi ed genomic sequences of TVBMV

1.2 方法

1.2.1 基因組擴增

TVBMV基因組擴增體系參考DNA聚合酶說明書。PCR擴增條件為： 94℃ 3min；94℃ 30s，55℃30 sec，72℃ 1.5min；30次擴增循環(huán)；72℃10min。產物經1%瓊脂糖凝膠電泳分離，切膠回收目的片段。連接pBLUE -T載體，轉化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細胞。經過藍白斑篩選，挑取白色菌落，PCR鑒定陽性克隆后，測序。

1.2.2 序列分析

使用DNAMAN(version 6)軟件進行序列拼接；同源序列檢索使用BLAST (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)[17]進行。核酸和蛋白序列多重比對使 用CLUSTAL W2(http://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalw2/)[18]和Bioedit[19]軟件。利用MEGA5 (Version 6.06)軟件中的相鄰連接方法(Neighbor-Joining, NJ)構建系統(tǒng)進化樹。

1.2.3 重組分析

重組分析使用RDP4軟件包(Version 4.33)，包括 RDP、GENECONV、BOOTSCAN、MAXCHI、CHIMAERA、SISCAN和3Seq等不同分析方法。至少有4種方法支持，且P值＜10-6時，認定為可信的重組。RDP4軟件以默認參數運行，P值為0.05，窗口大小為10.

2 結果與分析

2.1 YN9.1基因組結構分析

YN9.1具有Potyvirus屬病毒典型結構，基因組為單鏈正義RNA分子，基因組由5’非翻譯區(qū)(5’ Untranslated region, 5’-UTR)、 單 一 開 放 閱 讀 框(Open reading frame, ORF)和 3’非 翻 譯 區(qū) (3’-UTR)組成，其中基因組5’端共價結合有NIa-Vpg，3’-端具有Poly(A)尾?；蚪M全長9570nt。其中5’-UTR長 146nt，3’-UTR 長 184nt。ORF 位 于基因組 147-9386，長9241nt，編碼的多聚蛋白長度為3080aa，計算的分子量為348.9kDa。YN9.1序列已經登錄GenBank，基因組序列登錄號KF444434，多聚蛋白登錄號AGZ95140。

多聚蛋白經自身切割后，生成10個成熟的蛋白，分別為P1、HC-Pro、P3、6K1、CI、6K2、NIa-VPg、NIa-Pro、NIb、CP。最新研究發(fā)現，P3基因內部通過移碼，還編碼一個新蛋白PIPO，長度約60aa[20,21]。11個蛋白的基因長度和蛋白分子量依次為(圖1)：P1基因長924nt (147-1070)，蛋白分子量為 35.3kDa；HC-Pro 1374nt (1071-2444)，52.1kDa；P3 1041nt(2445-3485)，40.4kDa；PIPO 180nt(2912-3091), 6.5kDa; 6K1 159nt (3486-3644)，6.2kDa；CI 1932nt(3645-5576)，71.9kDa；6K2 159 nt (5577-5735)，6.0kDa；NIa-VPg 570nt (5736-6305)，21.3kDa；NIa-Pro 726nt (6306-7031)，26.8kDa；NIb 1539nt (7032-8570)，58.5kDa；CP 813nt (8571-9386)，30.6kDa。除PIPO外，其它蛋白的切割位點分別為Y/S、G/G、Q/A、Q/S、Q/S、Q/G、E/A、Q/S和Q/N，其中NIb/CP的切割位點為Q/N，與同樣來自云南的YND分離物一致[6],而河南分離物HN39切割位點為Q/G[12]。在Potyvirus屬中，NIb/CP常見切割位點為Q/G[22]。

圖1 TVBMV基因組結構示意圖Fig.1 Schematic representation of the TVBMV genome

2.2 TVBMV序列同源性分析

使用YN9.1基因組序列進行Blast檢索，共檢索到12個TVBMV基因組序列。序列分析顯示(表2)，YN9.1與其它分離物基因組核苷酸序列同源性為90.5-91.1%，多聚蛋白氨基酸序列同源性為95.2-96.2%。不同區(qū)域，5’-UTR變異最大，同源性最低，只有84.2%-87.6%。3’-UTR最保守，同源性最高，為95.1%-96.1%。編碼蛋白的基因，PIPO、HCPro和CI變異較小，較保守。P1核苷酸和氨基酸序列同源性最低，變異最大。YN9.1與同樣來自云南的YND分離物基因組核苷酸和氨基酸序列同源性最高，分別為91.1%和96.2%。但在HC-Pro、6K1和CI區(qū)域，YN9.1與HN39分離物核苷酸和氨基酸序列同源性最高。YN9.1與YND PIPO核苷酸同源性最高，但蛋白同源性與幾個山東分離物最高。與其它病毒比較，YN9.1與同屬辣椒環(huán)斑病毒(Chilli ringspot virus,ChiRSV)同源性最高。

表2 YN9.1與其它分離物核酸和氨基酸同源性比較Tab.2 Nucleotide and amino acid identities between YN9.1 and other TVBMV isolates

2.3 YN9.1保守序列分析

與YND分離物一樣，YN9.1基因組5’UTR也含有2個在Potivirus中高度保守的potybox‘b’(TCAAGCA)基序[23]，分別位于基因組序列23-29nt和80-86nt，但在HN39分離物中只有1個potybox‘b’。最新發(fā)現的PIPO蛋白，其編碼序列5’端含有高度保守的G1-2A6-7基序，在YN9.1中，該基序為G1A6模式。研究發(fā)現，該基序與病毒運動相關[24]。

HC-Pro和CP是Potyvirus屬病毒重要的功能蛋白。其功能涉及病毒蚜蟲傳播、病毒復制，病毒移動，寄主癥狀表現，抑制RNA沉默等。YN9.1 HCPro含有鋅指結構域(zinc fi nger metal-binding motif)CGEVAGIICQSLMPCCRITCIQC。其中，RITC保守基序在病毒蚜蟲傳播過程中起關鍵作用[25]，該基序在Potyvirus屬病毒中稱為KITC，其它形式有K/R-I/L-T/S-C[6,25-27]。PTK也是病毒蚜傳關鍵基序[28]。FRNK基序與寄主的癥狀表現[29]和RNA沉默有關[31]。IQN是病毒基因組復制所必須的[31]。在CP中，DAG是涉及病毒蚜蟲傳播的關鍵基序，該基序通過與PTK互作，調節(jié)病毒的蚜傳活性[32]。

2.4 系統(tǒng)進化分析

根據基因組核苷酸序列NJ系統(tǒng)進化樹的分析結果 (圖2)，13個TVBMV分離物進化形成2個組，I和II。I組11個分離物全部來自河南和山東。II組只有兩個分離物，YN9.1和YND，均來自云南?？梢?，YN9.1和YND親緣關系最近，而且TVBMV分組與地理區(qū)域具有明顯的相關性。

圖2 TVBMV基因組序列系統(tǒng)進化樹Fig. 2 Phylogenetic trees of TVBMV based on genomic sequences

2.5 重組分析

根據全基因組序列重組分析結果，在13個TVBMV分離物中，只有PY為重組體，各方法的 P值 分 別 為 RDP 2.515×10-18、GENECONV 7.318×10-18、BOOTSCAN 1.719×10-9、MAXCHI 4.317×10-16、CHIMAERA 2.711×10-13、SISCAN2.767×10-14和 3Seq 7.338×10-27. 該重組分離物的2個親本分別為ZC1和YN，重組重組位點位于基因組序列2352和7067，處于HC-Pro 3’末端和NIb 5’端(圖3)。根據進化分析結果，這兩個親本均為I組分離物，因此PY為組內重組。

圖3 PY基因組序列重組區(qū)域示意圖Fig. 3 Bar presentation of PY recombination

3 結論與討論

成功克隆到TVBMV云南分離物YN9.1基因組全序列。YN9.1基因組具有Potyvirus屬病毒典型特征，含有較少見的NIb/CP切割位點。與YND核苷酸和氨基酸序列同源性最高，分別為91.1%和96.2%，但 在 HC-Pro、6K1和 CI區(qū) 域，YN9.1與 HN39分離物核苷酸和氨基酸序列同源性最高。YN9.1具有RITC、PTK、DAG等病毒蚜蟲傳播保守基序；根據系統(tǒng)進化樹分析結果，TVBMV進化形成2個組，云南分離物獨立進化形成一組，說明TVBMV進化與地域具有明顯的相關性；重組分析發(fā)現PY為ZC1和YN的組內重組體，重組位點位于HC-Pro 3’末端和NIb 5’端。

在TVBMV系統(tǒng)進化分析中，所用基因區(qū)域不同，分組不同。根據HC-Pro和CP基因序列，TVBMV分為3組。根據P3和6K1基因序列，TVBMV分為2組[15]。Yuan的分析發(fā)現，根據HC-Pro、P3和6K1，TVBMV都分為2組，但組1都可以進一步分為不同的亞組。根據HC-Pro，組1分為3個亞組；根據P3和6K1，組1分為2個亞組。根據基因組序列，12個TVBMV分離物分為2組[16]，本研究研究結果與此相同。不同區(qū)域，分組不同，說明不同基因進化速度不同。在所有分組中，有2個共同的結論，1. 云南分離物都自成一組；2. TVBMV進化具有明顯的地域相關性。

重組是病毒致病力分化和新株系產生的決定性因素之一[33]，重組在馬鈴薯Y病毒屬病毒中發(fā)生較為普遍[34-37]。在TVBMV中，也發(fā)現有重組現象。Tian對TVBMV 3’-末端部分基因序列分析發(fā)現，ZB6為重組體，重組位于CP基因上[11]。根據HC-Pro、P3、6K1和CP基因序列，Zhang在42個TVBMV分離物中發(fā)現有13個重組體，重組位點處于HC-Pro和6K1基因上[15]。根據基因組序列，Yuan在12個分離物中發(fā)現YN、ZC和PY 3個為重組體，重組位點分別位于CI、NIb、HC-Pro、VPg和6K1基因上[16]。本研究對13個基因組序列的重組分析發(fā)現只有PY為重組體，重組位點位于HC-Pro和NIb基因上，與Yuan的結果稍有不同。

參考文獻

[1]陳瑞泰. 臺灣省煙草病毒病害簡要綜述[J].中國煙草科學, 1997(1): 29-33 Chen R T. Tobacco Virus Diseases inTaiwan: a Brief Report[J]. Chinese Tobacco Science, 1997(1): 29-33 (in Chinese)

[2]劉勇, 楊華兵, 李梅云等. 云南省煙草品種脈帶花葉病的癥狀與抗性[J]. 中國煙草學報, 2013, 19(5): 62-66 Liu Y, Yang H B, Li M Y, Li Y P. Investigation into the symptom and resistance of Yunnan tobacco cultivars to tobacco vein banding mosaic virus[J]. Acta Tabacaria Sinica, 2013, 19(5): 62-66 (in Chinese)

[3]陳瑞泰, 朱賢朝, 王智發(fā), 等.全國16個主產煙省(區(qū))煙草侵染性病害調研報告[J].中國煙草科學, 1997(4):1-7.Chen R T, Zhu X C, Wang Z F, et al. A report of investigating and studying tobacco infectious diseases of 16 main tobacco producing provinces(regions) in China.Chinese Tobacco Science, 1997(4): 1-7. (in Chinese)

[4]朱賢朝, 王彥亭, 王智發(fā). 中國煙草病害[M]．北京：中國農業(yè)出版社，2001 Zhu C X, Wang Y T, Wang Z F. Tobacco Diseases in China[M]．Beijing: China Agricultural Press, 2001 (in Chinese)

[5]陳秀齋, 溫亮, 魏代福, 等. 蒙陰煙草病毒種類檢測[J].山東農業(yè)科學, 2009(10): 62-63 Chen X Z, Wen L, Wang Z F, et al. Detection of Tobacco Viral Disease in Mengyin[J]. Shandong Agricultural Sciences, 2009(10): 62-63 (in Chinese)

[6]Yu X Q, Lan Y F, Wang H Y, et al. The complete genomic sequence of Tobacco vein banding mosaic virus and its similarities with other potyviruses[J]. Virus genes, 2007,35(3):801-806.

[7]Roggero P, Accotto G, Ciuffo M, et al. First report of Tobacco vein banding mosaic virus in China (Xian, Shaanxi Province) in Datura stramonium and tobacco[J]. Plant Disease, 2000, 84(10):1152-1152.

[8]Chin W. A survey of tobacco mosaic viruses in central Taiwan[J]. J Agric Ass Chin, 1966, 55:85-88.

[9]Dean C, Clark F. Vein-banding on tobacco in North Florida[J]. Plant Dis Rep, 1968, 52:887-889.

[10]Reddick B, Collins-Shepard M, Christie R, et al. A new virus disease in North America caused by tobacco veinbanding mosaic virus[J]. Plant disease, 1992, 76(8):856-859.

[11]Tian Y P, Liu J L, Yu X Q, et al. Molecular diversity of tobacco vein banding mosaic virus[J]. Archives of virology,2007, 152(10):1911-1915.

[12]Wang H Y, Zhu T S, Cui T T, et al. Complete genome sequence of a tobacco isolate of the tobacco vein banding mosaic virus strain prevailing in China[J]. Archives of virology, 2010, 155(2):293-295.

[13]Habera L, Berger P, Reddick B. Molecular evidence from 3′-terminus sequence analysis that tobacco vein-banding mosaic virus is a distinct member of the potyvirus group[J].Archives of virology, 1994, 138(1-2):27-38.

[14]Chang B Y, Huang C, Yeh S D, et al. Nucleotide sequence of the coat protein coding region of the potyvirus tobacco vein-banding mosaic virus[J]. Archives of virology, 1994,138(1-2):17-25.

[15]Zhang C L, Gao R, Wang J, et al. Molecular variability of Tobacco vein banding mosaic virus populations[J]. Virus research, 2011, 158(1):188-198.

[16]Yuan T, Song Y, Li K, et al. Characterization of 10 tobacco vein banding mosaic virus isolates from China[J]. Acta virologica, 2012, 56(1):19-24.

[17]Altschul S F, Madden T L, Sch?ffer A A, et al. Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs[J]. Nucleic acids research, 1997,25(17):3389-3402.

[18]Thompson J D, Higgins D G, Gibson T J. CLUSTAL W:improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequence weighting, position-specific gap penalties and weight matrix choice[J]. Nucleic acids research, 1994, 22(22):4673-4680.

[19]Hall T. BioEdit. Biological sequence alignment editor for Win95[J]. 2004.

[20]Chung B Y, Miller W A, Atkins J F, et al. An overlapping essential gene in the Potyviridae. Proc Natl Acad Sci U S A.2008, 105(15):5897-5902.

[21]Geng C, Cong Q Q, Li X D, et al. NbDREPP Contributes to Potyvirus Movement and Transports to Plasmodesmata via the Early Secretory Pathway and the Actomyosin System. Plant Physiol. Published on December 24, 2014, as DOI:10.1104/pp.114.252734.

[22]Adams M J, Antoniw J F, Beaudoin F. Overview and analysis of the polyprotein cleavage sites in the family Potyviridae[J]. Molecular plant pathology, 2005, 6(4):471-487.

[23]Turpen T. Molecular cloning of a potato virus Y genome:nucleotide sequence homology in non-coding regions of potyviruses. J Gen Virol, 1989, 70:1951-1960.

[24]Wen RH, Hajimorad MR. Mutational analysis of the putative pipo of soybean mosaic virus suggests disruption of PIPO protein impedes movement. Virology, 2010, 400:1-7.

[25]Atreya C D, Pirone T P. Mutational analysis of the helper component-proteinase gene of a potyvirus: effects of amino acid substitutions, deletions, and gene replacement on virulence and aphid transmissibility[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 1993, 90(24):11919-11923.

[26]Ravi K, Joseph J, Nagaraju N, et al. Characterization of a pepper vein banding virus from chili pepper in India[J].Plant disease, 1997, 81(6):673-676.

[27]Anindya R, Joseph J, Gowri T, et al. Complete genomic sequence of Pepper vein banding virus (PVBV): a distinct member of the genus Potyvirus[J]. Archives of virology,2004, 149(3):625-632.

[28]Maia I G, Bernardi F. Nucleic acid-binding properties of a bacterially expressed potato virus Y helper componentproteinase[J]. The Journal of general virology, 1996, 77 ( Pt 5):869-877.

[29]Gal-On A. A point mutation in the FRNK motif of the potyvirus helper component-protease gene alters symptom expression in cucurbits and elicits protection against the severe homologous virus[J]. Phytopathology, 2000,90(5):467-473.

[30]Gal-On A. Zucchini yellow mosaic virus: insect transmission and pathogenicity -the tails of two proteins[J].Mol Plant Pathol, 2007, 8(2):139-150.

[31]Plisson C, Drucker M, Blanc S, et al. Structural characterization of HC-Pro, a plant virus multifunctional protein[J]. The Journal of biological chemistry, 2003,278(26):23753-23761.

[32]Atreya C D, Raccah B, Pirone T P. A point mutation in the coat protein abolishes aphid transmissibility of a potyvirus[J]. Virology, 1990, 178(1):161-165.

[33]Chare E R, Holmes E C. A phylogenetic survey of recombination frequency in plant RNA viruses[J]. Archives of virology, 2006, 151(5):933-946.

[34]Ogawa T, Tomitaka Y, Nakagawa A, et al. Genetic structure of a population of Potato virus Y inducing potato tuber necrotic ringspot disease in Japan; comparison with North American and European populations[J]. Virus Res, 2008,131(2):199-212.

[35]Seo J K, Ohshima K, Lee H G, et al. Molecular variability and genetic structure of the population of soybean mosaic virus based on the analysis of complete genome sequences[J]. Virology, 2009, 393(1):91-103.

[36]Ohshima K, Yamaguchi Y, Hirota R, et al. Molecular evolution of Turnip mosaic virus: evidence of host adaptation, genetic recombination and geographical spread[J]. The Journal of general virology, 2002, 83(Pt 6):1511-1521.

[37]Moreno I M, Malpica J M, Diaz-Pendon J A, et al.Variability and genetic structure of the population of watermelon mosaic virus infecting melon in Spain[J].Virology, 2004, 318(1):451-460.

Abstract：To gain insights into the damage mechanisms and prevalence of TVBMV， the complete genomic sequence of YN9.1 was determined by RT-PCR. The genome structure, sequence identity and similarity, conserved amino acid motif, phylogenetic and recombination analysis of YN9.1 were conducted. Results showed that （1）YN9.1 possessed typical genome characteristics of Potyvirus,and had a uncommon NIb/CP cleavage site of Q/N which was rare in potyviruses.（2）YN9.1 showed 90.5-91.1% nt and 95.2-96.2% aa identities with other TVBMV isolates, and shared the highest nt and aa sequence identity with YND. （3）Conserved motif in HC-Pro and CP of YN9.1 was analyzed, and the conserved motifs RITC、PTK and DAG were involved in aphid transmission. The motif RITC was the common form of KITC in Potyvirus.（4）Phylogenetic analysis showed that TVBMV isolates were divided into two evolutionary divergent groups, and isolates from Yunnan formed a separate branch, which revealed that TVBMV grouping was related to geographical origin. （5）The recombination analysis indicated that PY could be a intra-lineage recombinant, and had ZC1 as its major parents, and YN as its minor parent. The recombination sites were at the 3'end of HC-Pro and the 5'end of NIb.

Keywords:tobacco vein banding mosaic virus; sequence analysis; conserved motif; phylogenetic analysis; recombination analysis

Citation:CAI Lianhe, CHEN Yuanyuan, XIE Xiaodong, et al. Demarcating tobacco fi eld management based on GreenSeeker [J]. Acta Tabacaria Sinica, 2015,21(6)

Study on standardization of fi nancial management in tobacco farmer cooperatives: taking 41 demonstration cooperatives in Hunan province as examples

DING Kuaikuai1, LIU Wenli1.2, ZENG Shangmei1.2, XIAO Chunsheng3, LI Wei3
1 College of Business, Hunan Agriculture University, Changsha 410128, China;
2 Hunan Provincial Tobacco Corporation, Changsha 410128, China;
3 Hunan Research Center for Development of Agricultural Enterprises, Changsha 410128, China

This paper reviewed and analyzed financial management system, working staff, financial accounting, auditing, supervision,protection of farmers' legitimate rights and interests in tobacco farmer cooperatives based on data collected by questionnaire and fi eld investigation. Suggestions were thus proposed to help standardize fi nancial management in such tobacco farmer cooperatives.

tobacco farmers' cooperatives; fi nancial management; accounting；audit

Analysis of genomic sequence in tobacco vein banding mosaic virus

CAI Lianhe1, CHEN Yuanyuan2, XIE Xiaodong3, WEI Pan3, ZHANG Jianfeng3, WANG Zhong3，LI Feng3, WEI Chunyang3,WANG Ran3, WU Mingzhu3, LUO Zhaopeng3, YANG Jun3, LIN Fucheng3
1 China Tobacco Guangxi Industrial. Co. Ltd., Nanning 530001, China;
2 Zhongyuan University of Technology, Zhengzhou 451191, China;
3 Zhengzhou Tobacco Research Institute of CNTC, Zhengzhou 450001, China

丁快快，劉文麗，曾尚梅,等. 煙農專業(yè)合作社財務管理規(guī)范化研究——以湖南省41家示范社為例[J]. 中國煙草學報，2015,21（6）

中國煙草總公司湖南省公司科技創(chuàng)新項目“湖南省煙農專業(yè)合作社運行機制與績效評價體系研究與應用”（NO：14-15ZDBa08）；湖南省教育廳項目“現代農民專業(yè)合作社績效評價體系研究”（NO：13A039）；湖南省社會科學基金一般項目“混合所有制下現代農民專業(yè)合作社內部控制體系優(yōu)化研究”（NO：14YBA195）

丁快快（1990—），碩士研究生，主要研究現代煙草農業(yè)發(fā)展，煙農專業(yè)合作社的財務管理和績效評價方面，Email:1064103915@qq.com

劉文麗（1968—），博士，教授，主要研究內部控制和風險管理方面，Email: 316124741@qq.com

2015-04-14