莊粵蕾

(湛江中心人民醫(yī)院病理科，廣東 湛江 524037)

CCN1和Mel-18在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其臨床病理意義

莊粵蕾

(湛江中心人民醫(yī)院病理科，廣東 湛江 524037)

目的 探討CCN1和Mel-18在結(jié)腸癌中的表達(dá)及其臨床病理意義。方法采用免疫組化法觀察56例手術(shù)切除的結(jié)腸癌組織及相應(yīng)的癌旁組織中CCN1和Mel-18的表達(dá)情況，分析兩種蛋白與結(jié)腸癌臨床病理特征的關(guān)系及預(yù)后意義。結(jié)果CCN1蛋白在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率為76.79%，明顯高于相應(yīng)癌旁組織的14.29%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且在不同臨床分期及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌組織中表達(dá)的陽(yáng)性率比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；Mel-18蛋白在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率為39.29%，明顯低于相應(yīng)癌旁組織的66.07%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且在不同臨床分期及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌組織中表達(dá)的陽(yáng)性率比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；相關(guān)性分析顯示，CCN1和Mel-18蛋白在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.472，P＜0.05)。結(jié)論CCN1在結(jié)腸癌中的表達(dá)上調(diào)和Mel-18在結(jié)腸癌中的表達(dá)下調(diào)可能與結(jié)腸癌的發(fā)生有關(guān)，有可能成為新的預(yù)測(cè)結(jié)腸癌惡性程度及是否發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的有效分子標(biāo)志物。

結(jié)腸癌；CCN1；Mel-18；

CCN1是一種生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)產(chǎn)生的富含半胱氨酸的分泌性肝素連接蛋白，Mel-18屬于多梳基因家族的重要成員，已有多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)CCN1和Mel-18蛋白在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，但兩種蛋白在不同腫瘤中的研究結(jié)果并不一致[1-2]。本研究分別檢測(cè)了CCN1和Mel-18蛋白在結(jié)腸癌組織及相應(yīng)的癌旁正常組織中的表達(dá)情況，并分析兩種蛋白蛋白的表達(dá)與結(jié)腸癌的臨床病理特征的相關(guān)性，以初步探討CCN1和Mel-18蛋白與結(jié)腸癌發(fā)生和發(fā)展的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院病理科2011年6月至2013年4月手術(shù)切除的結(jié)腸癌及相應(yīng)癌旁結(jié)腸黏膜組織(距癌灶邊緣≥5 cm[3])標(biāo)本各56例，均經(jīng)術(shù)后病理組織學(xué)確診。所有病例術(shù)前均未行放化療治療，臨床資料齊全，均簽署知情同意書(shū)。其中男性32例，女性24例；年齡38～79歲，平均(55.82±7.73)歲。

1.2 方法 采用免疫組化二步法檢測(cè)結(jié)腸癌及相應(yīng)癌旁正常組織中CCN1、Mel-18的表達(dá)情況。鼠抗人多克隆抗體CCN1、兔抗人多克隆抗體Mel-18和免疫組織化學(xué)試劑盒均購(gòu)自北京博奧森生物有限公司。使用時(shí)CCN1抗體按1:200稀釋，Mel-18抗體按1:100稀釋，DAB顯色，蘇木素輕度復(fù)染，鹽酸酒精固定，梯度酒精脫水，透明封片，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，光鏡下觀察并攝片。采用已知陽(yáng)性標(biāo)本切片作陽(yáng)性對(duì)照，并采用PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定[4]所有標(biāo)本切片均在雙盲條件下觀察，并根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)及著色強(qiáng)弱判定表達(dá)結(jié)果。選取5個(gè)高倍鏡視野，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞率和著色強(qiáng)弱綜合判斷。陽(yáng)性細(xì)胞率：0%為0分，1%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～70%為3分，71%～100%為4分。著色強(qiáng)弱：無(wú)色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分。兩項(xiàng)得分相乘：0～4分為陰性(-)表達(dá)，≥5分為陽(yáng)性(+)表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，結(jié)腸癌組織中CCN1、Mel-18蛋白表達(dá)間的相關(guān)性檢驗(yàn)采用Spearman相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)腸癌及相應(yīng)癌旁組織中CCN1和Mel-18的表達(dá) CCN1陽(yáng)性染色呈棕黃色或棕褐色顆粒狀，定位于細(xì)胞漿，Mel-18陽(yáng)性染色呈黃色顆粒狀，定位于細(xì)胞核，見(jiàn)圖1。CCN1蛋白在結(jié)腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于相應(yīng)癌旁正常組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；Mel-18蛋白在結(jié)腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于相應(yīng)癌旁正常組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

圖1 CCN1和Mel-18在結(jié)腸癌組織及相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)

表1 CCN1和Mel-18蛋白在結(jié)腸癌及相應(yīng)癌旁正常組織中陽(yáng)性表達(dá)率的比較[例(%)]

2.2 CCN1和Mel-18蛋白與結(jié)腸癌臨床病理特征的關(guān)系 CCN1和Mel-18蛋白在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)與患者的性別、年齡、腫瘤大小、分化程度無(wú)關(guān)(P＞0.05)。CCN1蛋白在不同臨床分期結(jié)腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，以Ⅲ、Ⅳ期最高，其次為Ⅱ期，最低為Ⅰ期；CCN1蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌組織(P＜0.05)；Mel-18蛋白在不同臨床分期結(jié)腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，以I期最高，其次為Ⅱ期，最低為Ⅲ、IV期；CCN1蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌組織(P＜0.05)，見(jiàn)表2。

表2 CCN1和Mel-18蛋白的表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理特征的關(guān)系

2.3 CCN1和Mel-18蛋白在結(jié)腸癌組織中表達(dá)的相關(guān)性 結(jié)腸癌組織中CCN1和Mel-18蛋白雙陽(yáng)性表達(dá)率為17.86%(10/56)，雙陰性率為1.79%(1/56)，可見(jiàn)CCN1和Mel-18蛋白在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.472，P=0.008)，見(jiàn)表3。

表3 CCN1和Mel-18蛋白在結(jié)腸癌組織中表達(dá)的相關(guān)性(例)

3 討論

結(jié)腸癌是我國(guó)常見(jiàn)惡性腫瘤之一，近年來(lái)由于人們飲食習(xí)慣、生活方式發(fā)生變化，以及環(huán)境、基因突變等因素，結(jié)腸癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，且具有年輕化趨勢(shì)[5]。結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的多階段過(guò)程，癌基因激活、抑癌基因失活及腫瘤血管生成是其發(fā)生、發(fā)展的基礎(chǔ)。

CCN1是結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CCN)家族成員之一[6]，近年來(lái)多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)CCN1在腫瘤微血管形成及腫瘤細(xì)胞增殖、粘附、擴(kuò)散轉(zhuǎn)移、耐藥性產(chǎn)生等過(guò)程中起重要作用[7]。國(guó)內(nèi)外大量研究[8-10]顯示，CCN1的功能具有顯著的組織特異性，其在不同組織來(lái)源的腫瘤中的表達(dá)水平及功能差異較大。在乳腺癌、胃癌、食管癌、前列腺癌等腫瘤組織中CCN1表達(dá)水平明顯升高，在功能上可增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞增殖、遷徙能力；而在非小細(xì)胞癌、子宮內(nèi)膜癌、宮頸癌等組織中CCN1表達(dá)水平明顯下降，在功能上起抑癌基因的作用，低表達(dá)可引發(fā)腫瘤形成和發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，CCN1在結(jié)腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于相應(yīng)的癌旁組織，且隨著結(jié)腸癌臨床分期進(jìn)展和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，CCN1陽(yáng)性表達(dá)率明顯升高，提示CCN1參與了結(jié)腸癌的發(fā)生，且在結(jié)腸癌的發(fā)展中起促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、遷徙作用。

Mel-18屬于多梳基因家族成員[11]，有研究報(bào)道[12]Mel-18在乳腺癌、胃癌、前列腺癌等腫瘤組織中表達(dá)強(qiáng)度降低，外源性Mel-18過(guò)表達(dá)可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖速度減慢，提示Mel-18在腫瘤進(jìn)展過(guò)程中起抑制作用。Mel-18抑制腫瘤進(jìn)展的機(jī)制可能是：抑制cyclin D2活性，導(dǎo)致其與CDK復(fù)合物結(jié)合受阻，阻滯腫瘤細(xì)胞由G1期轉(zhuǎn)化至S期；抑制c-myc/cdc25通路，進(jìn)而抑制cyclin-CDK復(fù)合物的活性；通過(guò)與具有癌基因作用的Hox基因結(jié)合，從而抑制其活性[13-14]。本研究顯示Mel-18在結(jié)腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于相應(yīng)的癌旁組織，且隨著結(jié)腸癌臨床分期進(jìn)展和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，Mel-18陽(yáng)性表達(dá)率明顯降低，提示Mel-18的異常表達(dá)與結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)生有關(guān)，其在結(jié)腸癌中可能起抑癌基因的作用，在結(jié)腸癌的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中起抑制作用。

本研究發(fā)現(xiàn)CCN1和Mel-18在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)，CCN1在結(jié)腸癌中的表達(dá)上調(diào)，而Mel-18表達(dá)下調(diào)，進(jìn)一步提示CCN1在結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起癌基因的作用，促進(jìn)結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展，而Mel-18起抑癌基因的作用，抑制結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展。本研究結(jié)果證實(shí)CCN1在結(jié)腸癌中的表達(dá)上調(diào)和Mel-18在結(jié)腸癌中的表達(dá)下調(diào)可能與結(jié)腸癌的發(fā)生有關(guān)，有可能成為新的預(yù)測(cè)結(jié)腸癌惡性程度及是否發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的有效分子標(biāo)志物，其作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。

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Expression and clinical significance of CCN1 and Mel-18 in colon cancer.

ZHUANG Yue-lei.Department of Pathology,Zhanjiang People's Central Hospital,Zhanjiang 524037,Guangdong,CHINA

Objective To discuss the expression and clinical significance of CCN1 and Mel-18 in colon cancer.MethodsFifty-six cases of colon cancer tissues and their matched pericarcinous tissues were respectively detected by immunohistochemical technique,to analyze the relationship of the expression of CCN1 and Mel-18 protein with the clinical pathological features.ResultsThe positive rate of CCN1 expression in colon cancer tissues (76.76%)was significantly higher than that of pericarcinous tissue(14.29%,P＜0.05),and there were no significant difference of CCN1 positive expression between different clinical stages and lymph node metastasis(P＜0.05).The positive rate of Mel-18 expression in colon cancer tissues(39.29%)was significantly lower than that of pericarcinous tissue(66.07%,P＜0.05),and there were no significant difference of Mel-18 positive expression between different clinical stages and lymph node metastasis(P＜0.05).There was a negative correlation between the expression of CCN1 and Mel-18 in colon cancer tissues(r=-0.472,P＜0.05).ConclusionThe up-regulated CCN1 expression and down-regulated Mel-18 expresson may be closely related with the occurrence of colon cancer,as a possible effective molecular markers to forecast the malignant degree and distant metastasis of colon cancer.

Colon cancer;CCN1;Mel-18

R735.3+5

A

1003—6350（2015）14—2153—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.14.0777

2014-12-08)

莊粵蕾。E-mail：785553163@qq.com