閆 佳，許晶晶，陳躍元，譚為霞，雷 蕾

(1.暨南大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)系，廣東 廣州 510630；2.深圳市南山區(qū)蛇口人民醫(yī)院，廣東 深圳 518067)

黃芩苷用于犬實(shí)驗(yàn)性牙髓炎蓋髓的研究

閆 佳1，許晶晶1，陳躍元1，譚為霞2，雷 蕾1

(1.暨南大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)系，廣東 廣州 510630；2.深圳市南山區(qū)蛇口人民醫(yī)院，廣東 深圳 518067)

目的 觀察黃芩苷糊劑對(duì)Beagle犬實(shí)驗(yàn)性牙髓炎模型行直接蓋髓術(shù)的效果。方法兩只健康雄性beagle犬，分為7 d組和30 d組。各選取24顆健康牙齒，用內(nèi)毒素誘導(dǎo)法制備牙髓炎模型，隨機(jī)分成三組：黃芩苷糊劑組、Dycal組、牙髓炎組。分別于7 d、30 d后處死Beagle犬，通過(guò)組織學(xué)方法評(píng)價(jià)牙髓修復(fù)情況。結(jié)果蓋髓后7 d，黃芩苷糊劑組的炎癥反應(yīng)和組織紊亂程度較Dycal組弱，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。蓋髓后30 d，黃芩苷糊劑組的炎癥反應(yīng)、組織紊亂程度及修復(fù)性牙本質(zhì)形成情況均優(yōu)于Dycal組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論黃芩苷糊劑用于犬實(shí)驗(yàn)性牙髓炎直接蓋髓較Dycal療效更好。

牙髓炎；蓋髓術(shù)；黃芩苷

牙髓炎是常見(jiàn)的口腔疾病，活髓保存治療是牙髓治療學(xué)中最符合生物學(xué)觀點(diǎn)的治療方法，其中，蓋髓劑對(duì)治療成敗起著至關(guān)重要的作用。本研究將黃芩苷糊劑用于Beagle犬實(shí)驗(yàn)性牙髓炎模型的直接蓋髓治療，了解黃芩苷對(duì)實(shí)驗(yàn)性牙髓炎的治療效果。

1 材料與方法

1.1 材料和試劑 雄性SPF級(jí)Beagle犬(廣東省高要市康達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司)，黃芩苷(中國(guó)藥品生物制品檢定所)，Dycal(登士柏公司)，玻璃離子粉劑和液劑(3M公司)。

1.2 黃芩苷糊劑的制備 黃芩苷與生理鹽水調(diào)和成稠糊狀。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 實(shí)驗(yàn)分組 健康雄性Beagle犬兩只，分為7 d組和30 d組。每只犬按上、下、左、右四區(qū)分組，各選擇無(wú)齲壞、牙周正常的6顆牙，共24顆牙齒編號(hào)，按隨機(jī)數(shù)表法分成3組：黃芩苷糊劑組12顆牙，Dycal組8顆牙，牙髓炎組4顆牙。

1.3.2 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕?根據(jù)參考文獻(xiàn)[1]，Beagle犬全麻下行側(cè)臥固定，去除牙面菌斑及牙石，消毒后，用裂鉆在牙齒唇、頰面頸部距牙齦緣1 mm釉質(zhì)部位制備寬2 mm、高3 mm的”V”類洞(犬齒距齦緣3 mm)，近髓透紅時(shí)，用無(wú)菌生理鹽水沖洗、干燥、隔濕，將5 mg/ml內(nèi)毒素緩慢注入髓腔(針頭進(jìn)入髓腔約1 mm)，玻璃離子水門汀封閉窩洞。

1.3.3 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷纳w髓術(shù) 黃芩苷糊劑組、Dycal組去除玻璃離子水門汀，直徑0.5 mm球鉆在窩洞底(不進(jìn)入牙髓組織)、無(wú)菌生理鹽水沖洗下制備穿髓孔，止血、溫生理鹽水沖洗、干燥窩洞，分別用黃芩苷糊劑、Dycal蓋髓，玻璃離子水門汀充填。定期觀察每只犬的飲食改變、日?；顒?dòng)及口腔組織的情況。

1.3.4 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的制備 術(shù)后7 d、30 d處死動(dòng)物，4%多聚甲醛頸動(dòng)脈灌注固定，分離實(shí)驗(yàn)牙，截?cái)喔?/3。實(shí)驗(yàn)牙編號(hào)，常規(guī)固定，連續(xù)脫鈣兩周。常規(guī)脫水、透明、浸蠟、包埋。于穿髓孔中央沿牙髓唇舌向制作切片，HE染色，顯微鏡觀察，按Josimeri等[2]的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行牙髓組織病理學(xué)評(píng)價(jià)，細(xì)胞炎性反應(yīng)的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為0～3級(jí)，0級(jí)：穿髓孔對(duì)應(yīng)處牙髓組織中沒(méi)有或僅有個(gè)別炎性細(xì)胞；1級(jí)：多形及單個(gè)核細(xì)胞輕度浸潤(rùn)；2級(jí)：冠髓有中度炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；3級(jí)：冠髓有重度炎性細(xì)胞浸潤(rùn)或膿腫形成。組織紊亂的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為0～3級(jí)，0級(jí)：正常組織；1級(jí)：成牙本質(zhì)細(xì)胞層紊亂，中心牙髓組織正常；2級(jí)：全部牙髓組織失去正常形態(tài)；3級(jí)：牙髓壞死。硬組織形成的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為0～3級(jí)，0級(jí)：無(wú)硬組織形成；1級(jí)：穿髓孔下有少量硬組織沉積；2級(jí)：穿髓孔下有中等量硬組織沉積；3級(jí)：穿髓孔下有大量硬組織沉積，完整的牙本質(zhì)橋形成。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，各蓋髓組不同時(shí)點(diǎn)分級(jí)數(shù)據(jù)采用Kruskal-WallisH檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 牙髓炎組 鏡下見(jiàn)牙髓炎組穿髓點(diǎn)下方血管擴(kuò)張充血，局部大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，成牙本質(zhì)細(xì)胞層紊亂，空泡性變。根髓基本正常(圖1)。表明本實(shí)驗(yàn)成功建立了實(shí)驗(yàn)性牙髓炎模型。

圖1 牙髓炎(HE×10)

2.2 7 d組牙髓組織病理學(xué)評(píng)價(jià) 蓋髓后7 d，黃芩苷糊劑與Dycal組間細(xì)胞炎性反應(yīng)(Z=8.385，P= 0.015)、組織紊亂程度(Z=13.424，P=0.009)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，硬組織形成情況(Z=5.210，P=0.266)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明兩組都出現(xiàn)了不同程度的炎癥反應(yīng)和組織紊亂，但黃芩苷糊劑組均輕于Dycal組，兩組未見(jiàn)完整牙本質(zhì)橋形成，見(jiàn)表1。

表1 7 d組牙髓組織病理學(xué)評(píng)價(jià)(顆)

2.3 30 d組牙髓組織病理學(xué)評(píng)價(jià) 蓋髓后30 d，黃芩苷糊劑與Dycal組間細(xì)胞炎性反應(yīng)(Z= 17.691，P=0.001)、組織紊亂程度(Z=17.645，P=0.001)、硬組織形成情況(Z=24.231，P=0.000)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。黃芩苷糊劑組的炎癥反應(yīng)和組織紊亂顯著弱于Dycal組，且黃芩苷糊劑組有修復(fù)性牙本質(zhì)橋形成，而Dycal組未見(jiàn)修復(fù)性牙本質(zhì)橋形成，見(jiàn)表2。

表2 30 d組牙髓組織病理學(xué)評(píng)價(jià)(顆)

3 討 論

牙髓炎是一種混合細(xì)菌感染性疾病，內(nèi)毒素是細(xì)菌毒性產(chǎn)物中的主要毒力因子，能直接或間接構(gòu)成成牙本質(zhì)細(xì)胞和牙髓組織的損傷。本實(shí)驗(yàn)參照有關(guān)文獻(xiàn)[1]用內(nèi)毒素誘導(dǎo)建立實(shí)驗(yàn)性牙髓炎模型，術(shù)后第3天，鏡下呈現(xiàn)冠髓急性炎癥反應(yīng)，根髓基本正常，類似可復(fù)性牙髓炎的病理變化。

牙髓保存治療中，蓋髓劑的作用至關(guān)重要。理想的蓋髓材料應(yīng)具有消除感染和炎癥、誘導(dǎo)牙髓細(xì)胞分化、修復(fù)性牙本質(zhì)形成、保存活髓的特性[3]。目前臨床使用的活髓保存材料有氧化鋅丁香酚，氫氧化鈣玻璃離子/樹(shù)脂改良型玻璃離子，礦物三氧化物凝聚體和粘結(jié)系統(tǒng)等[4]。其中，氫氧化鈣作為傳統(tǒng)的蓋髓材料，是臨床首選的蓋髓劑，以Dycal為代表的雙份糊劑型氫氧化鈣更因使用方便、性能良好得到廣泛應(yīng)用。然而，這些蓋髓劑雖有諸多優(yōu)點(diǎn)，但均無(wú)顯著抗感染、消除炎癥的作用。

黃芩中的有效成分黃芩苷具有抗炎、抗菌、抗氧化、清除自由基、調(diào)節(jié)免疫[5]、降解細(xì)菌內(nèi)毒素[6]等多種生物活性。本實(shí)驗(yàn)組前期實(shí)驗(yàn)[7]觀察到黃芩苷可抑制由LPS誘導(dǎo)的人牙髓細(xì)胞TLR4表達(dá)及TNF-α分泌，表明黃芩苷可通過(guò)阻斷LPS的作用途徑，起到保護(hù)牙髓細(xì)胞和抗炎的作用。提示黃芩苷可作為蓋髓劑用于控制牙髓炎癥。

當(dāng)外界刺激引起牙髓炎癥反應(yīng)時(shí)，牙髓會(huì)出現(xiàn)組織水腫，成牙本質(zhì)細(xì)胞受損萎縮或消失，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等組織學(xué)改變。保髓治療成功與否主要通過(guò)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和修復(fù)性牙本質(zhì)形成情況進(jìn)行評(píng)定。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)HE染色對(duì)黃芩苷蓋髓效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示：蓋髓后7 d、30 d，黃芩苷糊劑組的牙髓修復(fù)情況優(yōu)于Dycal組。提示黃芩苷可更有效的降解內(nèi)毒素、保護(hù)牙髓組織。而Dycal組療效較差的原因可能是由于其呈強(qiáng)堿性，對(duì)牙髓細(xì)胞缺乏保護(hù)[8]，難以有效的降解內(nèi)毒素、促進(jìn)修復(fù)性牙本質(zhì)形成。

TNF-α是機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)產(chǎn)生較早，并起核心作用的炎癥介質(zhì)，可介導(dǎo)幾乎所有內(nèi)毒素的生物學(xué)效應(yīng)[7]，在牙髓炎癥過(guò)程中表達(dá)顯著增加，與被激活的單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)合并，介導(dǎo)炎癥及免疫反應(yīng)。柴玉爽等[9]研究黃芩苷對(duì)模式識(shí)別受體TLR2/4-NOD2的作用及其成藥性意義，發(fā)現(xiàn)黃芩苷能夠特異性的抑制疾病過(guò)程中TLR2/4-NOD2的表達(dá)，抑制下游炎癥因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表達(dá)，從而在一定程度上抑制免疫炎性反應(yīng)。

牙髓炎治療的理想效果是消除炎癥、恢復(fù)可逆性的牙髓損傷，既保患牙，又使牙髓能行使其防御、修復(fù)和重建等功能[10]。本實(shí)驗(yàn)表明，黃芩苷糊劑用于直接蓋髓，具有良好的降解內(nèi)毒素和保護(hù)牙髓細(xì)胞的特點(diǎn)，較Dycal能更好地減輕牙髓炎癥，發(fā)揮牙本質(zhì)-牙髓復(fù)合體的修復(fù)再生能力，提高蓋髓療效，對(duì)LPS引起的牙髓炎具有潛在治療作用，為黃芩苷在臨床上作為蓋髓劑的應(yīng)用提供了理論基礎(chǔ)。

[1]Rutherford RB,Gu K.Treatment of inflamed ferret dental pulps with recombinant bone morphogenetic protein-7[J].Eur J Oral Sci, 2000,108(3):202-206.

[2]Josimeri H,Elisa MAG,Carlos ASC.Biocomp-atibility of an adhesive system applied to exposed human dental pulp[J].Journal of Endod-ontics,1999,25(10):676-682.

[3]彭 軼,劉 浩.兩種蓋髓材料用于103顆牙蓋髓術(shù)治療的效果觀察[J].重慶醫(yī)學(xué),2013,42(9):1019-1020.

[4]金 燕,劉 茜,周紅艷,等.活髓保存材料的現(xiàn)狀和展望[J].口腔生物醫(yī)學(xué),2011,2(2):100-103.

[5]雷 芳.黃芩苷藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥業(yè),2010,19(15): 87-93.

[6]竇永青,杜文力,薛 毅,等.黃芩苷降解細(xì)菌內(nèi)毒素的定量分析測(cè)定[J].華西口腔醫(yī)學(xué)雜志,2007,25(2):169-172.

[7]于 淼,雷 蕾,譚為霞,等.黃芩苷對(duì)LPS誘導(dǎo)人牙髓細(xì)胞TLR4表達(dá)及TNF-α分泌的影響[J].牙體牙髓牙周病學(xué)雜志,2009,19 (11):633-636.

[8]鐘 波,雷 蕾,于 淼,等.黃芩苷在可復(fù)性牙髓炎蓋髓術(shù)中的應(yīng)用[J].臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志,2009,25(5):310-311.

[9]柴玉爽,雷 帆,邢東明,等.黃芩苷對(duì)模式識(shí)別受體TLR2/ 4-NOD2的作用及其成藥性意義[J].中國(guó)中藥雜志,2013,38(16): 2639-2644.

[10]Trope M.Regenerative potential of dental pulp[J].J Endod,2008, 34(7):206-210.

Experimental study of baicalin as pulp capping agent in beagle dogs.

YAN Jia1,XU Jing-jing1,CHEN Yue-yuan1, TAN Wei-xia2,LEI Lei1.1.Department of Stomatology,Jinan University,Guangzhou 510632,Guangdong,CHINA;2. Shenzhen Shekou People's Hospital,Shenzhen 518067,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo observe the effect of using baicalin as pulp capping agent in experimental models of beagle dog with pulpitis.MethodsTwo healthy male beagle dogs were enrolled in the study.In each dog,24 sound teeth were selected and induced with lipopolysaccharide(LPS)to establish experimental models of pulpitis, which were then divided into 3 groups:baicalin group,Dycal group,pulpitis group.The dogs were sacrificed after 7 days(7 days group)and 30 days(30 days group).Histological methods were applied to assess the repair condition of pulps.ResultsAt 7 days after pulp capping,inflammatory reaction,disorderliness of tissue in baicalin group were slighter than those in Dycal group,and the differences were statistically significant(P＜0.05).At 30 days after pulp capping,inflammatory reaction,disorderliness of tissue and the formation of reparative dentin in baicalin group were better than those in Dycal group,and the differences were statistically significant(P＜0.05).ConclusionThe effect of baicalin as pulp capping agents on experimental dog models with pulptis might be better than Dycal.

Pulpitis;Pulp capping;Baicalin

R-332

A

1003—6350（2015）14—2037—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.14.0737

2015-01-25)

雷 蕾。E-mail：tleil@jnu.edu.cn