吳正銅（廣西壯族自治區(qū)環(huán)江毛南族自治縣疾病預(yù)防控制中心 547100）

隨著經(jīng)濟(jì)全球化和國際間的交流合作越來越密切，國內(nèi)外的各種進(jìn)出口商檢、檢疫以及醫(yī)療機(jī)構(gòu)和疾病預(yù)防控制系統(tǒng)等對樣品微生物的檢測越來越多。在檢驗(yàn)過程中，常常用到定性實(shí)驗(yàn)和手工操作，這些都離不開人為的主觀判斷，由于個體差異可能會導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果不一致［1］。因而對微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行質(zhì)量控制，確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性是非常重要的。質(zhì)量控制包括室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量控制，其中室內(nèi)質(zhì)量控制是質(zhì)量保證的核心和基礎(chǔ)，也是做好室間質(zhì)控的基礎(chǔ)和前提，它貫穿于微生物學(xué)檢驗(yàn)質(zhì)量控制技術(shù)的各個方面。作者根據(jù)國內(nèi)一些資料和結(jié)合自身的工作經(jīng)驗(yàn)，總結(jié)出要做好微生物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制，主要從以下9個方面著手。

1 實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員

1.1 從事微生物檢驗(yàn)的技術(shù)人員必須經(jīng)過系統(tǒng)、全面的基礎(chǔ)培訓(xùn)教育，包括微生物學(xué)、基礎(chǔ)微生物學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)等知識的學(xué)習(xí)，以及一定的專業(yè)化技能培訓(xùn)，經(jīng)考核合格后持證上崗。

1.2 實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)定期或不定期到上級技術(shù)指導(dǎo)單位進(jìn)行業(yè)務(wù)培訓(xùn)或進(jìn)修學(xué)習(xí)，更新和掌握微生物新知識和新技術(shù)，隨時了解微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制。

1.3 實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員的有關(guān)學(xué)習(xí)、培訓(xùn)經(jīng)歷及個人的技術(shù)業(yè)績材料要整理完善和歸檔保存。

2 工作手冊

2.1 實(shí)驗(yàn)室技術(shù)負(fù)責(zé)人要組織專業(yè)人員根據(jù)所在實(shí)驗(yàn)室的條件需要而編寫標(biāo)準(zhǔn)的工作手冊，并定期進(jìn)行修改、完善和補(bǔ)充，使之成為全體人員需要共同尊守的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，不能因?yàn)槿藛T的變動而隨意更改。工作手冊應(yīng)該包含以下內(nèi)容：實(shí)驗(yàn)室可開展的檢驗(yàn)項(xiàng)目；各檢驗(yàn)項(xiàng)目具體的操作規(guī)程；儀器設(shè)備的操作步驟；標(biāo)本采集和處理指南；培養(yǎng)基和試劑的配制方法及保存措施；菌（毒）種管理；環(huán)境設(shè)施的監(jiān)控和要求；廢棄物的處理；實(shí)驗(yàn)室的安全措施等［2］。

2.2 實(shí)驗(yàn)室還應(yīng)同時配備一些參考書，如關(guān)于部分少見微生物的檢驗(yàn)參考書，以指導(dǎo)某些少見菌種的分離鑒定。

2.3 專業(yè)雜志是了解新的檢驗(yàn)方法的主要來源，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)訂閱一些權(quán)威的、知名度很高的專業(yè)雜志，以便快速了解、掌握新檢驗(yàn)方法的有關(guān)信息。

3 標(biāo)準(zhǔn)菌株

3.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株是指具備典型的、穩(wěn)定的生理生化特征，并被國際社會所認(rèn)可的菌株。它來自權(quán)威機(jī)構(gòu)，如我國的衛(wèi)生和計劃生育委員會（原衛(wèi)生部）藥品生物制品鑒定所菌種保藏中心，美國菌種保藏中心等。各檢驗(yàn)中心下發(fā)的質(zhì)控菌株可作為平時試驗(yàn)用的質(zhì)控菌株。

3.2 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保存其試驗(yàn)所需要的標(biāo)準(zhǔn)菌毒株，并設(shè)有專人管理，在文件中明確其職責(zé)，對菌毒株的保存地點(diǎn)或設(shè)施應(yīng)有嚴(yán)格的措施、要求，使其他人員無法獲得。保存方法分為一般保存法和冷凍保存法。一般保存法是將細(xì)菌接種于半固體培養(yǎng)基中，35℃培養(yǎng)18～24h后封蓋1cm厚的無菌液狀石蠟置4℃保存，此方法簡單、方便，不需要貴重儀器，故在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室廣泛使用，是最簡單的保存法。冷凍干燥保存法的優(yōu)點(diǎn)主要是不改變菌種的性狀以及保存時間長，缺點(diǎn)是要有專門的冷凍干燥設(shè)備，但此法是最可靠的菌種保存方法。

4 培養(yǎng)基

4.1 配制好的培養(yǎng)基應(yīng)標(biāo)明名稱、濃度、pH值、配制日期、失效日期、配制者姓名等信息，同時應(yīng)做全面檢定和性能試驗(yàn)，配制完成的培養(yǎng)基pH應(yīng)與規(guī)定的pH相差±0.2之內(nèi)。

4.2 培養(yǎng)基質(zhì)量好壞通常以目標(biāo)細(xì)菌能否在培養(yǎng)基中生長或能否形成典型菌落而其他細(xì)菌受抑制不能生長或生長很弱來判斷。購買培養(yǎng)基時，應(yīng)該選擇著名的生物培養(yǎng)基生產(chǎn)公司生產(chǎn)的產(chǎn)品。

5 試劑、染色劑和診斷血清

5.1 試劑和染色劑必須注明購入日期，按試劑要求的條件貯存并在有效期內(nèi)使用。使用配制時要做好記錄，對穩(wěn)定性較差的試劑，每次實(shí)驗(yàn)時必須進(jìn)行陽性和陰性對照實(shí)驗(yàn)。

5.2 診斷血清的來源必須可靠，在購進(jìn)各種診斷血清時，在檢查其基本特性的同時，均應(yīng)詳細(xì)記錄診斷血清名稱、包裝規(guī)格及數(shù)量、生產(chǎn)廠家、聯(lián)系電話、廠址、郵編、批號、失效期、購買日期、驗(yàn)收者姓名等。在使用時應(yīng)觀察其是否澄清透明，如果有任何混濁和顔色改變，都不能再使用。

6 儀器設(shè)備

6.1 大容量高壓滅菌器必須定期（一般為3年）邀請?zhí)胤N設(shè)備檢驗(yàn)所對其性能進(jìn)行全面檢測，并取得檢測合格證書。新購買的滅菌器必須進(jìn)行滅菌性能檢測，檢測合格后方可投入使用。要定期用生物指示劑，化學(xué)指示劑或留點(diǎn)溫度計對滅菌器的滅菌效果進(jìn)行監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)異常問題立刻停止工作，查找原因并給予糾正。

6.2 二氧化碳培養(yǎng)箱要定期檢查箱內(nèi)CO2的濃度，可用CO2檢測儀或血?dú)夥治鰞x測定。也可用淋病奈瑟菌或腦膜炎奈瑟菌等CO2依賴細(xì)菌進(jìn)行生長試驗(yàn)。

6.3 生物安全柜必須定期請專業(yè)技術(shù)人員對儀器作一個全面檢查。紫外線消毒效果監(jiān)測是每個季度進(jìn)行檢測一次。

6.4 定期對微生物鑒定儀的探測部位進(jìn)行清潔，并用標(biāo)準(zhǔn)模板進(jìn)行校正。及時更新微生物鑒定系統(tǒng)操作軟件，對每批號的鑒定卡板條用標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行一次測定，并核對每個反應(yīng)結(jié)果和藥物敏感結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)的一致性。

7 環(huán)境潔凈度

7.1 微生物實(shí)驗(yàn)室常需要用到潔凈室和超凈工作臺，它們的潔凈度對產(chǎn)品的微生物檢驗(yàn)結(jié)果影響很大，所以應(yīng)定期監(jiān)測其消毒滅菌效果以保證其符合樣品檢測所需的環(huán)境要求，當(dāng)潔凈度不符合要求時，應(yīng)立即采取有效措施進(jìn)行徹底消毒，直至符合要求為止。

7.2 無菌室和超凈工作臺應(yīng)有日常維護(hù)及監(jiān)控的記錄。日常維護(hù)包括紫外線燈擦拭，空氣消毒及全面的清潔衛(wèi)生，監(jiān)控紫外線強(qiáng)度和空氣沉降菌菌落總數(shù)，空氣中紫外線燈以30W功率計，紫外線燈下方垂直1.0m處的253.7nm紫外線輻射強(qiáng)度應(yīng)大于或等于70uw／cm2［3］；空氣沉降菌菌落總數(shù)以直徑為9cm平板暴露0.5h計，百級環(huán)境沉降菌菌落應(yīng)達(dá)到每個器皿的沉降菌小于或等于1cfu［4］。

8 檢測方法

實(shí)驗(yàn)室所使用的檢驗(yàn)方法必須是經(jīng)確認(rèn)的現(xiàn)行有效版本。在日常工作中，應(yīng)采用已知的標(biāo)準(zhǔn)菌株或陽性標(biāo)本進(jìn)行適時或定期監(jiān)控，可以幫助發(fā)現(xiàn)了解檢測過程客觀存在的變異、程度和原因。

9 標(biāo)本檢驗(yàn)過程的控制

9.1 標(biāo)本的采集和運(yùn)送標(biāo)本的采集是否符合要求，將直接影響檢驗(yàn)質(zhì)量。臨床標(biāo)本采集應(yīng)在病程急性期，使用抗菌藥物前，食物中毒標(biāo)本采集應(yīng)具有典型性和代表性，采集后用無菌容器送檢，必要時需冷藏、保溫或厭氧處理。

9.2 標(biāo)本培養(yǎng)前的涂片是非常必要和重要的，一方面可確定標(biāo)本是否合格，另一方面可直接發(fā)現(xiàn)病原體，尤其是形態(tài)特征典型者。

9.3 血清學(xué)鑒定單憑血清學(xué)凝集試驗(yàn)陽性不能判斷結(jié)果，因?yàn)橛锌赡艽嬖诮徊婵乖虼植谛途湓斐傻募倌?，因此挑出的典型菌落要做生化反?yīng)和血清學(xué)凝集反應(yīng)，兩者都符合時才能確認(rèn)報告。

綜上所述，影響微生物實(shí)驗(yàn)室檢測質(zhì)量的內(nèi)部因素很多，分布在整個檢測過程，為了避免實(shí)驗(yàn)過程中人為、儀器、試劑等因素對檢測結(jié)果的影響，保證結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠和有可比性，必須不折不扣地全面加強(qiáng)內(nèi)部質(zhì)量控制，才能保證得到準(zhǔn)確、可靠、滿意的檢測結(jié)果。

［1］張卓然.臨床微生物學(xué)和微生物檢驗(yàn)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：528.

［2］黃薇，蔡炯，黃劍屏，等.疾病預(yù)防控制系統(tǒng)微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制與評價［J］.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2007，17（1）：134-135.

［3］中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.GB／T27405-2008實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制控制規(guī)范-食品微生物檢測［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008：21.

［4］中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.GB／T16294-2010醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測試方法［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2011：13-17.