王力寧+鐘李英+蒙春雪+劉利明+高沖+姚勇志+黃小琪+陳晶+梁麗英

[摘要] 目的 研究哮喘分期序貫治療對(duì)大鼠哮喘模型氣道重構(gòu)及過敏性氣道炎癥的作用。 方法 56只SD大鼠隨機(jī)分成正常組、哮喘組、序貫治療1組、序貫治療2組、序貫治療3組、布地奈德組、孟魯司特鈉組，每組8只，除正常組外，其余各組均以卵蛋白（OVA）輔以氫氧化鋁為佐劑于第1、8、15天注射致敏，22 d后隔天霧化吸入OVA 8周激發(fā)哮喘，建立哮喘模型。從實(shí)驗(yàn)第8天開始，給藥組序貫治療1組急性期麻杏二陳湯灌胃；序貫治療2組急性期麻杏二陳湯灌胃，緩解期胃飼金水六君煎加減；序貫治療3組急性期麻杏二陳湯灌胃，緩解期胃飼金水六君煎加減方，穩(wěn)定期胃飼六味地黃顆粒；布地奈德組大鼠激發(fā)后霧吸沙丁胺醇，緩解期和穩(wěn)定期霧吸布地奈德；孟魯司特鈉組激發(fā)后霧吸沙丁胺醇，緩解期和穩(wěn)定期胃飼孟魯司特鈉；哮喘模型組以生理鹽水胃飼代替，干預(yù)7周后觀察實(shí)驗(yàn)大鼠全血白細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)，支氣管平滑肌層、上皮下膠原、內(nèi)管壁的厚度，肺組織羥脯氨酸含量。 結(jié)果 ①大鼠肺支氣管病理學(xué)觀察表明哮喘大鼠支氣管平滑肌層、上皮下膠原、內(nèi)管壁厚度[（27.87±0.81）、（9.11±0.58）、（39.00±3.68）μｍ]均較正常組[（10.76±0.67）、（3.37±0.42）、（20.40±2.85）μｍ]明顯增厚，肺組織羥脯氨酸含量[（11.50±3.81）mg/g]較正常組[（5.71±0.80）mg/g]明顯增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P = 0.00），表明哮喘時(shí)存在氣道重構(gòu)。②序貫治療1、2、3組、布地奈德組及孟魯司特鈉組對(duì)大鼠支氣管平滑肌層、上皮下膠原、內(nèi)管壁厚度、肺組織羥脯氨酸含量、全血白細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)均比哮喘模型對(duì)照組低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。 結(jié)論 中藥分期序貫治療具有減輕哮喘氣道慢性炎癥和延緩氣道重構(gòu)的作用。

[關(guān)鍵詞] 支氣管哮喘；氣道重構(gòu)；分期序貫；實(shí)驗(yàn)研究

[中圖分類號(hào)] R259[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A[文章編號(hào)] 1673-7210（2014）05（b）-0009-05

Effect of staging sequential treatment for airway remodeling and allergic airway inflammation of rats

WANG Lining1 ZHONG Liying2 MENG Chunxue3 LIU Liming2 GAO Chong2 YAO Yongzhi1 HUANG Xiaoqi1 CHEN Jing1 LIANG Liying1

1.The First Affiliated Hospital of Guangxi University of Chinese Medicine, Guangxi Zhuang Autonomous Region, Nanning 530023, China; 2.Guangxi University of Chinese Medicine, Guangxi Zhuang Autonomous Region, Nanning 530001, China; 3.Liuzhou Maternal and Child Health Hospital, Guangxi Zhuang Autonomous Region, Liuzhou 545001, China

[Abstract] Objective To analyze the effect of staging sequential treatment to airway remodeling and allergic airway inflammation of asthma rat models. Methods 56 male SD rats were randomly divided into group normal, group asthma, Sequential treatment group 1, 2, 3 and group Budesonide and group Montelukast, 8 rats in each group. For establishing asthma model, injection of egg ovalbumin (OVA) and aluminum hydroxide as adjuvant to the mice except for those in the normal control group were done in day 1, 8 and 15 for allergization, followed by an 8-week aerosol inhaling of OVA which started from day 22 and done once every two day as trigger of asthma. From day 8, Sequential treatment group 1 was given Ma Xing Er Chen Decoction i.g. in acute stage; sequential treatment group 2 was given Ma Xing Er Chen Decoction i.g. in acute stage and modified Jin Shui Liu Jun Decoction in remission stage; sequential treatment group 3 was given Ma Xing Er Chen Decoction i.g. in acute stage, modified Jin Shui Liu Jun Decoction by gastric gavage in remission stage and Liu Wei Di Huang Granule by gastric gavage in stable stage. Group Montelukast was given Salbutamol by aerosol inhalation at the onset of asthma and Montelukast i.g. in remission and stable stages. Group Budesonide was given Salbutamol by aerosol inhalation at the onset of asthma and Budesonide in remission and stable stages. The asthma model group was given normal saline i.g. After 7 weeks intervention, the total white blood cells, eosinophil cell count, the thickness of bronchial smooth muscle layer, subepithelial collagen, endotracheal tube wall, and the hydroxyproline content in lung tissue of all mice were examined. Results ①Compared with normal control group, the thickness of bronchial smooth muscle layer, subepithelial collagen, endotracheal tube wall, and the hydroxyproline content in lung tissue of asthma rats were remarkably higher [(27.87±0.81) μｍ vs (10.70±0.67) μｍ, (9.11±0.58) μｍ vs (3.37±0.42) μｍ, (39.00±3.68) μｍ vs （20.40±2.85）μｍ， (11.50±3.81) mg/g vs (5.71±0.80) mg/g, P = 0.00], which indicated the existence of airway remodeling in asthma. ②Compared with the asthma model group, the thickness of bronchial smooth muscle layer, subepithelial collagen, endotracheal tube wall, and the hydroxyproline content in lung tissue, total white blood cells and eosinophil cell count of sequential treatment group 1, 2, 3 and group Budesonide and group Montelukast were significantly lower (P < 0.05). Conclusion Staging sequential treatment of Chinese medicine exerts the function of relieving chronic airway inflammation in asthma and postponing airway remodeling.

[Key words] Bronchial asthma; Airway remodeling; Staging sequential; Experimental research

支氣管哮喘（簡(jiǎn)稱哮喘）是由多種細(xì)胞包括氣道炎癥細(xì)胞、結(jié)構(gòu)細(xì)胞和細(xì)胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾病[1]，是最常見的慢性疾病之一。支氣管哮喘不僅存在氣道炎癥，而且還可發(fā)生氣道結(jié)構(gòu)的改變，即氣道重構(gòu)。氣道重構(gòu)是導(dǎo)致哮喘患者不可逆性氣流阻塞及持續(xù)性非特異性氣道高反應(yīng)性（AHR）的重要原因[2]。為探討運(yùn)用中醫(yī)溫肺化痰-化痰養(yǎng)陰-滋陰補(bǔ)腎法分期序貫治療對(duì)抑制哮喘氣道炎癥與阻止哮喘氣道重構(gòu)的作用，筆者對(duì)大鼠哮喘模型采用麻杏二陳湯加減方、金水六君煎加減方和六味地黃丸加減方進(jìn)行分期序貫治療，觀察其對(duì)致敏哮喘大鼠全血中白細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞的數(shù)量、肺組織羥脯氨酸含量和支氣管肺組織病理學(xué)改變情況的影響。結(jié)果報(bào)道如下：

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用3～4周齡正常健康SD大鼠56只，雄性，體重（100±20）g，SPF級(jí)，廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（粵）2008-0002。

1.2 藥物

中藥采用江陰天江藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的免煎中藥飲片顆粒劑，其中麻杏二陳湯加減方由炙麻黃、杏仁、射干、僵蠶、萊菔子、細(xì)辛、陳皮、法半夏、云茯苓、甘草組成，并按5∶8∶8∶6∶8∶2∶4∶6∶8∶6比例配伍；金水六君煎加減方由當(dāng)歸、熟地、陳皮、法半夏、云茯苓、萊菔子、杏仁、射干、甘草組成，并按6∶10∶4∶6∶8∶8∶8∶8∶6 比例配伍；六味地黃丸加減方由熟地黃、山茱萸、山藥、澤瀉、牡丹皮、白茯苓組成，并按8∶4∶4∶3∶3∶3比例配伍。各處方中藥顆粒均分別用溫開水調(diào)制成每毫升含生藥1g的藥液備用。孟魯司特鈉片（4 mg/片），由杭州默沙東制藥有限公司分裝，批號(hào)：B120718；布地奈德霧化混懸液（1 mg/2 mL），由澳大利亞阿斯利康有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：LOT314902。吸入型硫酸沙丁胺醇溶液（5 mg/mL），由葛蘭素史克集團(tuán)生產(chǎn)，批號(hào)：C589099。

1.3 動(dòng)物分組及處理

運(yùn)用Excel軟件[3]將56只大鼠按體重進(jìn)行分層隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，隨機(jī)分為序貫治療1組（A1組）、序貫治療2組（A2組）、序貫治療3組（A3組）、孟魯司特鈉組（M組）、布地奈德組（B組）、哮喘模型組（X組）、正常對(duì)照組（Z組），每組8只。于第1、8、15天，X組、A1組、A2組、A3組、M組和B組各組每只大鼠腹腔注射10%卵清白蛋白（OVA）抗原溶液由美國(guó)Sigma公司提供，批號(hào)：A5253-10 g；氫氧化鋁（分析純）由天津市博迪化工有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20060213）1.0 mL致敏，正常對(duì)照組予生理鹽水1.0 mL腹腔注射[4]。于實(shí)驗(yàn)第8天即第2次致敏的同一天開始，A2組隔天胃飼金水六君煎加減方20 g/（kg·d）；A3組隔天胃飼六味地黃顆粒20 g/（kg·d）；M組隔天胃飼白三烯受體拮抗劑[孟魯司特鈉4 mg/片，1 mg/（kg·d）]；B組大鼠隔天霧吸布地奈德[0.64 mL/（kg·d）]并予等量生理鹽水胃飼，其余各組以生理鹽水胃飼代替。

于實(shí)驗(yàn)第22天開始除Z組外各組均霧化（百瑞壓縮霧化吸入機(jī)（ARI-1205型），德國(guó)百瑞有限公司生產(chǎn)）吸入1%OVA抗原溶液30 min以誘發(fā)哮喘，隔天1次，連續(xù)激發(fā)8周。

每次激發(fā)前2 h，A2組胃飼金水六君煎加減20 g/（kg·d）；A3組胃飼六味地黃顆粒20 g/（kg·d）；M組予孟魯司特鈉片1 mg/（kg·d）灌胃給藥；B組霧化吸入布地奈德溶液（0.64 mL/kg）并予等量生理鹽水胃飼，其余各組予等量生理鹽水胃飼。

每次霧化后1 h內(nèi)A1組、A2組、A3組大鼠均予麻杏二陳湯[20g/（kg·d）]灌胃；M組、B組予霧化吸入沙丁胺醇霧化液（0.32 mg/mL）并予等量生理鹽水胃飼；其余各組予等量生理鹽水胃飼。

在每次霧化后的第2天，A2組、A3組均胃飼金水六君煎加減方20 g/（kg·d）；M組予孟魯司特片1 mg/（kg·d）灌胃給藥；B組大鼠予霧化吸入布地奈德溶液（0.64 mL/kg）并予等量生理鹽水胃飼，其余各組予生理鹽水代替灌胃給藥。

各組除施加以上藥物干預(yù)因素外，給予常規(guī)同樣方法進(jìn)行飼養(yǎng)。

1.4 標(biāo)本的采集

每組實(shí)驗(yàn)大鼠最后1次激發(fā)后24 h，稱體重，20%烏拉坦5 mL/kg麻醉下，打開腹腔，用抗凝管采集腹股溝靜脈血2 mL備用；打開胸腔取右肺下葉，均分為兩份標(biāo)本，一份以10%甲醛溶液固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，HE染色，用于光鏡下大鼠氣道組織病理觀察；另一份以37%～40%甲醛溶液固定，用于羥脯氨酸含量測(cè)定。

1.4.1 支氣管病理學(xué)觀察[5]在光學(xué)顯微鏡放大200倍下選取完整的支氣管橫切面（內(nèi)周長(zhǎng)Pi為1500～2000 μm，中氣道），最大內(nèi)徑與最小內(nèi)徑之比等于或大于2者（被認(rèn)為是斜切的氣道）除外。采用圖像分析系統(tǒng)（pathological image analysis system）測(cè)定。分別測(cè)量支氣管壁內(nèi)周長(zhǎng)（Pi）、氣道平滑肌層面積（WAm=Amo-Am）、內(nèi)管壁面積（WAi = Amo-Ai）、上皮層面積（WAc）；WAm，WAc，WAi與Pi的比值作為標(biāo)化測(cè)量值，分別代表平滑肌層厚度（WAm/Pi）、支氣管上皮層厚度（WAc/Pi）、支氣管內(nèi)壁厚度（WAi/Pi）。

1.4.2 肺組織羥脯氨酸含量測(cè)定試劑由南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，實(shí)驗(yàn)步驟按照試劑盒上標(biāo)明的實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行。將肺組織樣品80～100 g剪碎，置于磨口試管中用保鮮膜封蓋在保鮮膜上用針刺上小孔；放入水浴箱95℃水解5 h；水解液調(diào)pH值在6.0～6.8，加入蒸餾水至10 mL，混勻后；取3～4 mL稀釋的檢測(cè)液加入適量活性炭（20～30 mg），以上清液離心后澄清無色為準(zhǔn)，混勻，3500 r/min離心（上海手術(shù)器械廠80-2型離心機(jī)）10 min，小心取上清1 mL，向各樣品管中加入試劑一0.5 mL，混勻靜置10 min；再加入試劑二0.5 mL，混勻靜置5 min；在向各管中加入試劑三0.5 mL，混勻；放入60℃水浴箱水浴15 min，冷卻后，3500 r/min離心10 min；取上清用756分光光度計(jì)（上海菁華儀器廠）在550 nm波比長(zhǎng)色，1 cm光徑，蒸餾水調(diào)零，測(cè)個(gè)管吸光度A值。用下列公式計(jì)算羥脯氨酸（HP）含量：肺組織HP含量（mg/g）=（0.5×A樣/A標(biāo)）/m，其中，A樣為樣品管吸光度，A標(biāo)為標(biāo)準(zhǔn)管吸光度，m為肺重。

1.4.3 全血白細(xì)胞總數(shù)和嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)采用自動(dòng)化血液分析儀做血常規(guī)檢驗(yàn)，取血樣后送廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科行血液學(xué)分析。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 17.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用方差分析，采用q檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠行為學(xué)表現(xiàn)

觀察發(fā)現(xiàn)X組大鼠進(jìn)行激發(fā)前漸現(xiàn)明顯過敏反應(yīng)（如頭部瘙癢、抓鼻、躁動(dòng)不安）；激發(fā)1周后，每次激發(fā)后各治療組逐漸出現(xiàn)躁動(dòng)不安、打噴嚏、呼吸加快或俯臥少動(dòng)、飲水增多、毛發(fā)漸漸發(fā)黃；激發(fā)后第2天到激發(fā)前各治療組大鼠呼吸平順，未見明顯喘促，但A1、X組中多數(shù)大鼠可聞及明顯痰鳴聲；激發(fā)兩周后X組大鼠出現(xiàn)精神萎靡、反應(yīng)遲鈍、弓背、前肢縮抬、節(jié)律性收腹樣喘促，可聞哮鳴音及痰鳴音，甚至出現(xiàn)雙耳及口唇發(fā)紺，更有甚者喘促至死，毛發(fā)漸漸枯槁發(fā)黃而無光澤，取出大鼠后，霧化箱內(nèi)遺留屎尿較多。其他各治療組與X組比較，過敏反應(yīng)輕微，弓背、噴嚏等癥狀表現(xiàn)均較X組大鼠輕微，呼吸稍有增快，但未見明顯喘促，毛色較白，取出大鼠后，霧化箱內(nèi)遺留屎尿較多，A1組可聞及明顯痰鳴聲，激發(fā)后第2天偶見出現(xiàn)明顯喘促，可聞及明顯哮鳴音，A2、A3、B、M組未聞及明顯哮鳴音和痰鳴音，各治療組中A3組毛發(fā)均較白，皮毛有光澤，體重均較重；激發(fā)8周后，X組表現(xiàn)同上，各治療組大鼠偶見頭面部瘙癢，呼吸加快加深不明顯，安靜少動(dòng)，基本保持常態(tài)，取出大鼠后，霧化箱內(nèi)遺留屎尿較少，毛色白有光澤；正常對(duì)照組（Z組）大鼠行動(dòng)敏捷，呼吸平穩(wěn)，精神狀態(tài)良好，皮毛有光澤。

2.2 支氣管病理學(xué)觀察

2.2.1 X組大鼠肺組織HE染色可見支氣管上皮細(xì)胞脫落、增厚，黏膜下層亦有顯著增厚；支氣管平滑肌細(xì)胞增生活躍，平滑肌管腔狹窄；上皮下及平滑肌周圍有大量的膠原沉積。支氣管壁周圍、管腔內(nèi)及血管周圍有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，氣道壁及氣道；各個(gè)治療組與X組相比較，炎性反應(yīng)較輕，支氣管及肺泡炎性浸潤(rùn)也不明顯，肺泡間隔僅有部分?jǐn)嗔?，黏膜結(jié)構(gòu)也較為完整。膠原沉積和氣道壁各層厚度也較X組輕。而Z組HE染色切片支氣管完整，組織結(jié)構(gòu)正常。肺泡大小較一致，肺泡壁薄，肺泡腔無滲出，管腔內(nèi)無滲出物，無出血、充血，周圍無明顯炎性反應(yīng)。見圖1～7。

2.2.2 各組大鼠氣道病理組織學(xué)改變圖像分析采用DC300病理圖像采集系統(tǒng)（Leica，德國(guó)）分析，結(jié)果顯示，X組大鼠平滑肌層厚度、支氣管上皮層厚度、 支氣管內(nèi)壁厚度較Z組比較有增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）（表1）。各治療組平滑肌層厚度、支氣管上皮層厚度、支氣管內(nèi)壁厚度均較X組減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）（表1），其中中藥序貫治療3組（A3組）比中藥序貫治療1組，中藥序貫治療2組薄，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；與M組、B組療效相當(dāng)，除平滑肌厚度比M組薄，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05）外，其余差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。

2.3 全血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果

全血白細(xì)胞（WBC）總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞（EOS）計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果如下，X組大鼠全血WBC計(jì)數(shù)、EOS細(xì)胞計(jì)數(shù)均較Z組比較有增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）（表2）；各治療組血液白細(xì)胞計(jì)數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞均較X組減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）（表2）。

2.4 肺組織HP含量結(jié)果

肺組織HP含量結(jié)果分析如下，X組大鼠HP含量較Z組比較有增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）（表3）；各治療組HP含量均較X組減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）（表3）。

表3 各組肺組織羥脯氨酸含量分析結(jié)果比較（mg/g，x±s）

注：與哮喘組比較，☆P ＜ 0.05

3 討論

大量的實(shí)驗(yàn)研究證明，支氣管哮喘不僅存在氣道炎癥，而且還發(fā)生氣道結(jié)構(gòu)的改變，即氣道重構(gòu)。氣道重構(gòu)是由各種炎性刺激、活化的炎癥細(xì)胞產(chǎn)生并釋放的多種炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子及生長(zhǎng)因子等相互促進(jìn)、相互制約，進(jìn)行性發(fā)展而形成的。吸入性糖皮質(zhì)激素是哮喘治療的一線藥物，早期預(yù)防性應(yīng)用糖皮質(zhì)激素吸入可有效預(yù)防氣道炎癥及氣道重塑的發(fā)生，延遲應(yīng)用可抑制氣道炎性反應(yīng)，但僅能部分逆轉(zhuǎn)氣道重塑的發(fā)生[6-7]。治療哮喘的最終目標(biāo)不僅僅是控制氣道的炎癥，而是防止氣道結(jié)構(gòu)改變。吸入性糖皮質(zhì)激素能抑制氣道平滑肌層增厚， 但這種作用是不完全的[8]。

中醫(yī)認(rèn)為“哮易止，根難除，故治哮必防哮，防哮必固本”，筆者遵照中醫(yī)辨證論治的原則，依據(jù)小兒的生理病理特點(diǎn)與哮喘發(fā)病的機(jī)制及其病理演變的證候規(guī)律，經(jīng)過多年治療小兒哮喘的臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，提出了哮喘分期序貫治療思路。急性發(fā)作期（發(fā)作期）辨明誘發(fā)原因，合理?yè)穹竭x藥，宜溫肺化痰，選用小青龍湯化裁成的麻杏二陳湯為主方；慢性持續(xù)期（緩解期）分清標(biāo)本虛實(shí)，重在扶正固本，宜化痰養(yǎng)陰，選用金水六君煎為主方；緩解期（穩(wěn)定期）分辨體質(zhì)偏頗，科學(xué)因人施養(yǎng)，宜滋陰補(bǔ)腎，選用六味地黃丸為主方。在前期的實(shí)驗(yàn)研究中，驗(yàn)證了滋陰補(bǔ)腎的代表方六味地黃丸具有改善哮喘動(dòng)物氣道反應(yīng)性及嗜酸性粒細(xì)胞炎癥的作用[9]。

支氣管哮喘是氣道的慢性炎癥性疾病，這種氣道炎癥是由嗜酸性粒細(xì)胞等炎癥細(xì)胞參與形成的非特異性炎癥，劉曉麗等[10]系統(tǒng)性回顧了31例哮喘兒童全血炎癥細(xì)胞變化水平，數(shù)據(jù)顯示，支氣管哮喘和感染后哮喘組嗜酸性粒細(xì)胞百分比水平升高，故檢測(cè)血嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)能間接反映氣道炎癥及其反應(yīng)性的高低。實(shí)驗(yàn)中同時(shí)觀察了中藥分三期序貫治療和西藥抗炎平喘對(duì)SD哮喘大鼠全血嗜酸性粒細(xì)胞的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，哮喘模型組大鼠支氣管病理切片中表現(xiàn)出明顯的氣道炎癥，大鼠血液常規(guī)結(jié)果也提示，模型組大鼠白細(xì)胞總數(shù)比各治療組高，差異有顯著性，而各治療組間療效相當(dāng)；對(duì)血液中嗜酸性粒細(xì)胞的影響，結(jié)果顯示各治療組均比哮喘模型對(duì)照組低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；各治療組間，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明經(jīng)治療后哮喘大鼠氣道炎癥得到改善，中藥序貫治療確實(shí)可以改善哮喘大鼠氣道炎癥的發(fā)生發(fā)展，與西藥組抑制哮喘大鼠氣道炎癥的療效一致。

哮喘時(shí)氣道重構(gòu)的主要病理學(xué)改變?yōu)闅獾辣诘脑龊?。近年來很多?duì)氣道重構(gòu)機(jī)制的影響研究中使用肺組織羥脯氨酸含量的高低可作為評(píng)斷某個(gè)實(shí)驗(yàn)處理手段對(duì)哮喘氣道重構(gòu)影響是否有意義，是否能顯著抑制氣道壁平滑肌的增厚、膠原沉積。HP是機(jī)體膠原蛋白主要成分之一，不同組織中HP含量可作為衡量其膠原組織代謝的重要指標(biāo)，Szoltysik等[11]曾提出肺組織羥脯氨酸含量的測(cè)定也許可以作為哮喘的輔助檢測(cè)指標(biāo)。在本實(shí)驗(yàn)中，筆者在哮喘大鼠模型中研究中醫(yī)溫肺化痰-化痰養(yǎng)陰-滋陰補(bǔ)腎法分三期序貫治療對(duì)哮喘支氣管肺組織病理學(xué)改變情況及肺組織羥脯氨酸含量的影響。本實(shí)驗(yàn)選用了國(guó)內(nèi)較常用的SD大鼠，大鼠致敏參考遲磊等[4]的方法，成功地誘發(fā)了氣道過敏性炎癥；隔天激發(fā)8周后，支氣管病理圖像分析結(jié)果顯示，哮喘模型組大鼠平滑肌層厚度、支氣管上皮層厚度、 支氣管內(nèi)壁厚度均較正常對(duì)照組增加，有顯著性差異（P < 0.05），即哮喘大鼠支氣管平滑肌層、支氣管上皮層、內(nèi)管壁均較對(duì)照組明顯增厚，表明哮喘時(shí)存在氣道重構(gòu)[5]，結(jié)果分析顯示各治療組均比哮喘模型對(duì)照組低，差異具有顯著性意義，其中中藥序貫治療組從厚到薄均為A1>A2>A3，組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。林兩楷等[12]在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上采用霧化吸入布地奈德聯(lián)合口服孟魯司特治療支氣管哮喘的方法療效佳，有效率達(dá)92.5%，而本研究采用的中藥序貫治療3組（A3組）與M、B組療效一致（P > 0.05），序貫治療3組（A3組）能達(dá)到單純使用布地奈德或布地奈德和孟魯司特鈉同用的相同療效。同時(shí)實(shí)驗(yàn)還觀察了哮喘大鼠肺組織羥脯氨酸含量，結(jié)果顯示各治療組均比哮喘模型對(duì)照組低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明中藥序貫治療和常規(guī)西藥抗炎平喘治療均可抑制氣道壁平滑肌的增厚、膠原沉積，某種程度上來說可延緩或阻止氣道重構(gòu)的進(jìn)程。

[參考文獻(xiàn)]

[1]中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)哮喘學(xué)組.支氣管哮喘防治指南[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2008，31（3）：177-185.

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[3]周一平.用Excel軟件進(jìn)行藥物毒理實(shí)驗(yàn)的隨機(jī)分組[J].藥學(xué)進(jìn)展，2005，（29）：425-427.

[4]遲磊，符州，戴繼宏，等.過敏性哮喘大鼠模型的建立[J].重慶醫(yī)學(xué)，2003，32（4）：429.

[5]高偉良，邱晨，袁慶莉.哮喘大鼠模型氣道重構(gòu)的病理形態(tài)學(xué)改變[J].廣東醫(yī)學(xué)，2006，27（2）：176-178.

[6]陳強(qiáng)，劉建梅，李莉，等.吸入性糖皮質(zhì)激素對(duì)支氣管哮喘患兒氣道重塑的影響[J].中華哮喘雜志：電子版，2009，3（2）：95-100.

[7]朱燦紅，季偉，周衛(wèi)芳.吸入性糖皮質(zhì)激素對(duì)哮喘氣道重塑模型平滑肌的影響[J].江蘇醫(yī)藥，2006，32（1）：50-51.

[8]李淼，尚云曉，魏兵.布地奈德吸入對(duì)哮喘氣道重塑大鼠氣道平滑肌細(xì)胞MMP-9及TIMP-1表達(dá)的影響[J].中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志，2012，21（2）：142-145.

[9]王力寧，劉含，黃小琪，等.六味地黃顆粒協(xié)同輔舒酮吸入對(duì)哮喘大鼠氣道炎癥的抑制作用[J].遼寧中醫(yī)雜志，2006，33（1）：117-118.

[10]劉曉麗，王春靖，穆德毅，等.哮喘兒童外周血中炎癥細(xì)胞變化及其相關(guān)因素分析[J].中國(guó)婦幼保健，2013，28（10）：1598-1599.

[11]Szoltysik E，Kueharz EJ. Serum markers of collagen metab olism in patients with diseases of the respiratory system[J].Rom J Intern Med，1993，31（2）：119-122.

[12]林兩楷，謝海雙，巫映霞.布地奈德聯(lián)合孟魯司特治療支氣管哮喘的療效觀察[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2012，10（8）：425-426.

（收稿日期：2014-01-20本文編輯：衛(wèi)軻）

[基金項(xiàng)目] 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（編號(hào)81160448）。

2.2 支氣管病理學(xué)觀察

2.2.1 X組大鼠肺組織HE染色可見支氣管上皮細(xì)胞脫落、增厚，黏膜下層亦有顯著增厚；支氣管平滑肌細(xì)胞增生活躍，平滑肌管腔狹窄；上皮下及平滑肌周圍有大量的膠原沉積。支氣管壁周圍、管腔內(nèi)及血管周圍有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，氣道壁及氣道；各個(gè)治療組與X組相比較，炎性反應(yīng)較輕，支氣管及肺泡炎性浸潤(rùn)也不明顯，肺泡間隔僅有部分?jǐn)嗔?，黏膜結(jié)構(gòu)也較為完整。膠原沉積和氣道壁各層厚度也較X組輕。而Z組HE染色切片支氣管完整，組織結(jié)構(gòu)正常。肺泡大小較一致，肺泡壁薄，肺泡腔無滲出，管腔內(nèi)無滲出物，無出血、充血，周圍無明顯炎性反應(yīng)。見圖1～7。

2.2.2 各組大鼠氣道病理組織學(xué)改變圖像分析采用DC300病理圖像采集系統(tǒng)（Leica，德國(guó)）分析，結(jié)果顯示，X組大鼠平滑肌層厚度、支氣管上皮層厚度、 支氣管內(nèi)壁厚度較Z組比較有增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）（表1）。各治療組平滑肌層厚度、支氣管上皮層厚度、支氣管內(nèi)壁厚度均較X組減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）（表1），其中中藥序貫治療3組（A3組）比中藥序貫治療1組，中藥序貫治療2組薄，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；與M組、B組療效相當(dāng)，除平滑肌厚度比M組薄，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05）外，其余差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。

2.3 全血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果

全血白細(xì)胞（WBC）總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞（EOS）計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果如下，X組大鼠全血WBC計(jì)數(shù)、EOS細(xì)胞計(jì)數(shù)均較Z組比較有增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）（表2）；各治療組血液白細(xì)胞計(jì)數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞均較X組減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）（表2）。

2.4 肺組織HP含量結(jié)果

肺組織HP含量結(jié)果分析如下，X組大鼠HP含量較Z組比較有增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）（表3）；各治療組HP含量均較X組減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）（表3）。

表3 各組肺組織羥脯氨酸含量分析結(jié)果比較（mg/g，x±s）

注：與哮喘組比較，☆P ＜ 0.05

3 討論

大量的實(shí)驗(yàn)研究證明，支氣管哮喘不僅存在氣道炎癥，而且還發(fā)生氣道結(jié)構(gòu)的改變，即氣道重構(gòu)。氣道重構(gòu)是由各種炎性刺激、活化的炎癥細(xì)胞產(chǎn)生并釋放的多種炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子及生長(zhǎng)因子等相互促進(jìn)、相互制約，進(jìn)行性發(fā)展而形成的。吸入性糖皮質(zhì)激素是哮喘治療的一線藥物，早期預(yù)防性應(yīng)用糖皮質(zhì)激素吸入可有效預(yù)防氣道炎癥及氣道重塑的發(fā)生，延遲應(yīng)用可抑制氣道炎性反應(yīng)，但僅能部分逆轉(zhuǎn)氣道重塑的發(fā)生[6-7]。治療哮喘的最終目標(biāo)不僅僅是控制氣道的炎癥，而是防止氣道結(jié)構(gòu)改變。吸入性糖皮質(zhì)激素能抑制氣道平滑肌層增厚， 但這種作用是不完全的[8]。

中醫(yī)認(rèn)為“哮易止，根難除，故治哮必防哮，防哮必固本”，筆者遵照中醫(yī)辨證論治的原則，依據(jù)小兒的生理病理特點(diǎn)與哮喘發(fā)病的機(jī)制及其病理演變的證候規(guī)律，經(jīng)過多年治療小兒哮喘的臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，提出了哮喘分期序貫治療思路。急性發(fā)作期（發(fā)作期）辨明誘發(fā)原因，合理?yè)穹竭x藥，宜溫肺化痰，選用小青龍湯化裁成的麻杏二陳湯為主方；慢性持續(xù)期（緩解期）分清標(biāo)本虛實(shí)，重在扶正固本，宜化痰養(yǎng)陰，選用金水六君煎為主方；緩解期（穩(wěn)定期）分辨體質(zhì)偏頗，科學(xué)因人施養(yǎng)，宜滋陰補(bǔ)腎，選用六味地黃丸為主方。在前期的實(shí)驗(yàn)研究中，驗(yàn)證了滋陰補(bǔ)腎的代表方六味地黃丸具有改善哮喘動(dòng)物氣道反應(yīng)性及嗜酸性粒細(xì)胞炎癥的作用[9]。

支氣管哮喘是氣道的慢性炎癥性疾病，這種氣道炎癥是由嗜酸性粒細(xì)胞等炎癥細(xì)胞參與形成的非特異性炎癥，劉曉麗等[10]系統(tǒng)性回顧了31例哮喘兒童全血炎癥細(xì)胞變化水平，數(shù)據(jù)顯示，支氣管哮喘和感染后哮喘組嗜酸性粒細(xì)胞百分比水平升高，故檢測(cè)血嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)能間接反映氣道炎癥及其反應(yīng)性的高低。實(shí)驗(yàn)中同時(shí)觀察了中藥分三期序貫治療和西藥抗炎平喘對(duì)SD哮喘大鼠全血嗜酸性粒細(xì)胞的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，哮喘模型組大鼠支氣管病理切片中表現(xiàn)出明顯的氣道炎癥，大鼠血液常規(guī)結(jié)果也提示，模型組大鼠白細(xì)胞總數(shù)比各治療組高，差異有顯著性，而各治療組間療效相當(dāng)；對(duì)血液中嗜酸性粒細(xì)胞的影響，結(jié)果顯示各治療組均比哮喘模型對(duì)照組低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；各治療組間，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明經(jīng)治療后哮喘大鼠氣道炎癥得到改善，中藥序貫治療確實(shí)可以改善哮喘大鼠氣道炎癥的發(fā)生發(fā)展，與西藥組抑制哮喘大鼠氣道炎癥的療效一致。

哮喘時(shí)氣道重構(gòu)的主要病理學(xué)改變?yōu)闅獾辣诘脑龊?。近年來很多?duì)氣道重構(gòu)機(jī)制的影響研究中使用肺組織羥脯氨酸含量的高低可作為評(píng)斷某個(gè)實(shí)驗(yàn)處理手段對(duì)哮喘氣道重構(gòu)影響是否有意義，是否能顯著抑制氣道壁平滑肌的增厚、膠原沉積。HP是機(jī)體膠原蛋白主要成分之一，不同組織中HP含量可作為衡量其膠原組織代謝的重要指標(biāo)，Szoltysik等[11]曾提出肺組織羥脯氨酸含量的測(cè)定也許可以作為哮喘的輔助檢測(cè)指標(biāo)。在本實(shí)驗(yàn)中，筆者在哮喘大鼠模型中研究中醫(yī)溫肺化痰-化痰養(yǎng)陰-滋陰補(bǔ)腎法分三期序貫治療對(duì)哮喘支氣管肺組織病理學(xué)改變情況及肺組織羥脯氨酸含量的影響。本實(shí)驗(yàn)選用了國(guó)內(nèi)較常用的SD大鼠，大鼠致敏參考遲磊等[4]的方法，成功地誘發(fā)了氣道過敏性炎癥；隔天激發(fā)8周后，支氣管病理圖像分析結(jié)果顯示，哮喘模型組大鼠平滑肌層厚度、支氣管上皮層厚度、 支氣管內(nèi)壁厚度均較正常對(duì)照組增加，有顯著性差異（P < 0.05），即哮喘大鼠支氣管平滑肌層、支氣管上皮層、內(nèi)管壁均較對(duì)照組明顯增厚，表明哮喘時(shí)存在氣道重構(gòu)[5]，結(jié)果分析顯示各治療組均比哮喘模型對(duì)照組低，差異具有顯著性意義，其中中藥序貫治療組從厚到薄均為A1>A2>A3，組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。林兩楷等[12]在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上采用霧化吸入布地奈德聯(lián)合口服孟魯司特治療支氣管哮喘的方法療效佳，有效率達(dá)92.5%，而本研究采用的中藥序貫治療3組（A3組）與M、B組療效一致（P > 0.05），序貫治療3組（A3組）能達(dá)到單純使用布地奈德或布地奈德和孟魯司特鈉同用的相同療效。同時(shí)實(shí)驗(yàn)還觀察了哮喘大鼠肺組織羥脯氨酸含量，結(jié)果顯示各治療組均比哮喘模型對(duì)照組低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明中藥序貫治療和常規(guī)西藥抗炎平喘治療均可抑制氣道壁平滑肌的增厚、膠原沉積，某種程度上來說可延緩或阻止氣道重構(gòu)的進(jìn)程。

[參考文獻(xiàn)]

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[4]遲磊，符州，戴繼宏，等.過敏性哮喘大鼠模型的建立[J].重慶醫(yī)學(xué)，2003，32（4）：429.

[5]高偉良，邱晨，袁慶莉.哮喘大鼠模型氣道重構(gòu)的病理形態(tài)學(xué)改變[J].廣東醫(yī)學(xué)，2006，27（2）：176-178.

[6]陳強(qiáng)，劉建梅，李莉，等.吸入性糖皮質(zhì)激素對(duì)支氣管哮喘患兒氣道重塑的影響[J].中華哮喘雜志：電子版，2009，3（2）：95-100.

[7]朱燦紅，季偉，周衛(wèi)芳.吸入性糖皮質(zhì)激素對(duì)哮喘氣道重塑模型平滑肌的影響[J].江蘇醫(yī)藥，2006，32（1）：50-51.

[8]李淼，尚云曉，魏兵.布地奈德吸入對(duì)哮喘氣道重塑大鼠氣道平滑肌細(xì)胞MMP-9及TIMP-1表達(dá)的影響[J].中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志，2012，21（2）：142-145.

[9]王力寧，劉含，黃小琪，等.六味地黃顆粒協(xié)同輔舒酮吸入對(duì)哮喘大鼠氣道炎癥的抑制作用[J].遼寧中醫(yī)雜志，2006，33（1）：117-118.

[10]劉曉麗，王春靖，穆德毅，等.哮喘兒童外周血中炎癥細(xì)胞變化及其相關(guān)因素分析[J].中國(guó)婦幼保健，2013，28（10）：1598-1599.

[11]Szoltysik E，Kueharz EJ. Serum markers of collagen metab olism in patients with diseases of the respiratory system[J].Rom J Intern Med，1993，31（2）：119-122.

[12]林兩楷，謝海雙，巫映霞.布地奈德聯(lián)合孟魯司特治療支氣管哮喘的療效觀察[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2012，10（8）：425-426.

（收稿日期：2014-01-20本文編輯：衛(wèi)軻）

[基金項(xiàng)目] 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（編號(hào)81160448）。

2.2 支氣管病理學(xué)觀察

2.2.1 X組大鼠肺組織HE染色可見支氣管上皮細(xì)胞脫落、增厚，黏膜下層亦有顯著增厚；支氣管平滑肌細(xì)胞增生活躍，平滑肌管腔狹窄；上皮下及平滑肌周圍有大量的膠原沉積。支氣管壁周圍、管腔內(nèi)及血管周圍有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，氣道壁及氣道；各個(gè)治療組與X組相比較，炎性反應(yīng)較輕，支氣管及肺泡炎性浸潤(rùn)也不明顯，肺泡間隔僅有部分?jǐn)嗔?，黏膜結(jié)構(gòu)也較為完整。膠原沉積和氣道壁各層厚度也較X組輕。而Z組HE染色切片支氣管完整，組織結(jié)構(gòu)正常。肺泡大小較一致，肺泡壁薄，肺泡腔無滲出，管腔內(nèi)無滲出物，無出血、充血，周圍無明顯炎性反應(yīng)。見圖1～7。

2.2.2 各組大鼠氣道病理組織學(xué)改變圖像分析采用DC300病理圖像采集系統(tǒng)（Leica，德國(guó)）分析，結(jié)果顯示，X組大鼠平滑肌層厚度、支氣管上皮層厚度、 支氣管內(nèi)壁厚度較Z組比較有增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）（表1）。各治療組平滑肌層厚度、支氣管上皮層厚度、支氣管內(nèi)壁厚度均較X組減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）（表1），其中中藥序貫治療3組（A3組）比中藥序貫治療1組，中藥序貫治療2組薄，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；與M組、B組療效相當(dāng)，除平滑肌厚度比M組薄，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05）外，其余差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。

2.3 全血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果

全血白細(xì)胞（WBC）總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞（EOS）計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果如下，X組大鼠全血WBC計(jì)數(shù)、EOS細(xì)胞計(jì)數(shù)均較Z組比較有增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）（表2）；各治療組血液白細(xì)胞計(jì)數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞均較X組減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）（表2）。

2.4 肺組織HP含量結(jié)果

肺組織HP含量結(jié)果分析如下，X組大鼠HP含量較Z組比較有增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）（表3）；各治療組HP含量均較X組減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）（表3）。

表3 各組肺組織羥脯氨酸含量分析結(jié)果比較（mg/g，x±s）

注：與哮喘組比較，☆P ＜ 0.05

3 討論

大量的實(shí)驗(yàn)研究證明，支氣管哮喘不僅存在氣道炎癥，而且還發(fā)生氣道結(jié)構(gòu)的改變，即氣道重構(gòu)。氣道重構(gòu)是由各種炎性刺激、活化的炎癥細(xì)胞產(chǎn)生并釋放的多種炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子及生長(zhǎng)因子等相互促進(jìn)、相互制約，進(jìn)行性發(fā)展而形成的。吸入性糖皮質(zhì)激素是哮喘治療的一線藥物，早期預(yù)防性應(yīng)用糖皮質(zhì)激素吸入可有效預(yù)防氣道炎癥及氣道重塑的發(fā)生，延遲應(yīng)用可抑制氣道炎性反應(yīng)，但僅能部分逆轉(zhuǎn)氣道重塑的發(fā)生[6-7]。治療哮喘的最終目標(biāo)不僅僅是控制氣道的炎癥，而是防止氣道結(jié)構(gòu)改變。吸入性糖皮質(zhì)激素能抑制氣道平滑肌層增厚， 但這種作用是不完全的[8]。

中醫(yī)認(rèn)為“哮易止，根難除，故治哮必防哮，防哮必固本”，筆者遵照中醫(yī)辨證論治的原則，依據(jù)小兒的生理病理特點(diǎn)與哮喘發(fā)病的機(jī)制及其病理演變的證候規(guī)律，經(jīng)過多年治療小兒哮喘的臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，提出了哮喘分期序貫治療思路。急性發(fā)作期（發(fā)作期）辨明誘發(fā)原因，合理?yè)穹竭x藥，宜溫肺化痰，選用小青龍湯化裁成的麻杏二陳湯為主方；慢性持續(xù)期（緩解期）分清標(biāo)本虛實(shí)，重在扶正固本，宜化痰養(yǎng)陰，選用金水六君煎為主方；緩解期（穩(wěn)定期）分辨體質(zhì)偏頗，科學(xué)因人施養(yǎng)，宜滋陰補(bǔ)腎，選用六味地黃丸為主方。在前期的實(shí)驗(yàn)研究中，驗(yàn)證了滋陰補(bǔ)腎的代表方六味地黃丸具有改善哮喘動(dòng)物氣道反應(yīng)性及嗜酸性粒細(xì)胞炎癥的作用[9]。

支氣管哮喘是氣道的慢性炎癥性疾病，這種氣道炎癥是由嗜酸性粒細(xì)胞等炎癥細(xì)胞參與形成的非特異性炎癥，劉曉麗等[10]系統(tǒng)性回顧了31例哮喘兒童全血炎癥細(xì)胞變化水平，數(shù)據(jù)顯示，支氣管哮喘和感染后哮喘組嗜酸性粒細(xì)胞百分比水平升高，故檢測(cè)血嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)能間接反映氣道炎癥及其反應(yīng)性的高低。實(shí)驗(yàn)中同時(shí)觀察了中藥分三期序貫治療和西藥抗炎平喘對(duì)SD哮喘大鼠全血嗜酸性粒細(xì)胞的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，哮喘模型組大鼠支氣管病理切片中表現(xiàn)出明顯的氣道炎癥，大鼠血液常規(guī)結(jié)果也提示，模型組大鼠白細(xì)胞總數(shù)比各治療組高，差異有顯著性，而各治療組間療效相當(dāng)；對(duì)血液中嗜酸性粒細(xì)胞的影響，結(jié)果顯示各治療組均比哮喘模型對(duì)照組低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；各治療組間，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明經(jīng)治療后哮喘大鼠氣道炎癥得到改善，中藥序貫治療確實(shí)可以改善哮喘大鼠氣道炎癥的發(fā)生發(fā)展，與西藥組抑制哮喘大鼠氣道炎癥的療效一致。

哮喘時(shí)氣道重構(gòu)的主要病理學(xué)改變?yōu)闅獾辣诘脑龊瘛＝陙砗芏鄬?duì)氣道重構(gòu)機(jī)制的影響研究中使用肺組織羥脯氨酸含量的高低可作為評(píng)斷某個(gè)實(shí)驗(yàn)處理手段對(duì)哮喘氣道重構(gòu)影響是否有意義，是否能顯著抑制氣道壁平滑肌的增厚、膠原沉積。HP是機(jī)體膠原蛋白主要成分之一，不同組織中HP含量可作為衡量其膠原組織代謝的重要指標(biāo)，Szoltysik等[11]曾提出肺組織羥脯氨酸含量的測(cè)定也許可以作為哮喘的輔助檢測(cè)指標(biāo)。在本實(shí)驗(yàn)中，筆者在哮喘大鼠模型中研究中醫(yī)溫肺化痰-化痰養(yǎng)陰-滋陰補(bǔ)腎法分三期序貫治療對(duì)哮喘支氣管肺組織病理學(xué)改變情況及肺組織羥脯氨酸含量的影響。本實(shí)驗(yàn)選用了國(guó)內(nèi)較常用的SD大鼠，大鼠致敏參考遲磊等[4]的方法，成功地誘發(fā)了氣道過敏性炎癥；隔天激發(fā)8周后，支氣管病理圖像分析結(jié)果顯示，哮喘模型組大鼠平滑肌層厚度、支氣管上皮層厚度、 支氣管內(nèi)壁厚度均較正常對(duì)照組增加，有顯著性差異（P < 0.05），即哮喘大鼠支氣管平滑肌層、支氣管上皮層、內(nèi)管壁均較對(duì)照組明顯增厚，表明哮喘時(shí)存在氣道重構(gòu)[5]，結(jié)果分析顯示各治療組均比哮喘模型對(duì)照組低，差異具有顯著性意義，其中中藥序貫治療組從厚到薄均為A1>A2>A3，組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。林兩楷等[12]在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上采用霧化吸入布地奈德聯(lián)合口服孟魯司特治療支氣管哮喘的方法療效佳，有效率達(dá)92.5%，而本研究采用的中藥序貫治療3組（A3組）與M、B組療效一致（P > 0.05），序貫治療3組（A3組）能達(dá)到單純使用布地奈德或布地奈德和孟魯司特鈉同用的相同療效。同時(shí)實(shí)驗(yàn)還觀察了哮喘大鼠肺組織羥脯氨酸含量，結(jié)果顯示各治療組均比哮喘模型對(duì)照組低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明中藥序貫治療和常規(guī)西藥抗炎平喘治療均可抑制氣道壁平滑肌的增厚、膠原沉積，某種程度上來說可延緩或阻止氣道重構(gòu)的進(jìn)程。

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（收稿日期：2014-01-20本文編輯：衛(wèi)軻）

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