湯永峰，馮曉敏，謝莉莉

（1.南通體臣衛(wèi)生學(xué)校，江蘇南通 226007；2.南京市婦幼保健院病理科，江蘇南京 210004）

浸潤(rùn)性乳腺癌PTEN、p53、EGFR與ER、PR及HER-2表達(dá)的關(guān)系

湯永峰1，馮曉敏1，謝莉莉2

（1.南通體臣衛(wèi)生學(xué)校，江蘇南通 226007；2.南京市婦幼保健院病理科，江蘇南京 210004）

目的研究乳腺癌中雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、表皮生長(zhǎng)因子受體2(HER-2)與丟失性磷酸酶-張力蛋白基因(PTEN)、蛋白p53、表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)的關(guān)系。方法采用免疫組織化學(xué)S-P法檢測(cè)ER、PR、HER-2、PTEN、p53和EGFR在68例乳腺浸潤(rùn)性癌和10例乳腺纖維腺瘤組織標(biāo)本中的表達(dá)。結(jié)果ER、PR、HER-2、PTEN、p53和EGFR的表達(dá)分別是44.1%、47.1%、54.4%、45.6%、51.5%、58.8%，PTEN蛋白表達(dá)與ER呈正相關(guān)；p53蛋白表達(dá)與ER、PR表達(dá)呈負(fù)相關(guān)；EGFR的表達(dá)與ER呈負(fù)相關(guān)、與HER-2呈正相關(guān)。結(jié)論聯(lián)合檢測(cè)ER、PR、HER-2、PTEN、p53、EGFR對(duì)臨床上乳腺癌患者判斷預(yù)后和靶向治療有重要臨床意義。

乳腺癌；雌激素受體（ER）；表皮生長(zhǎng)因子受體2；p53；表皮生長(zhǎng)因子受體

乳腺癌是婦女最常見的惡性腫瘤之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球每年有50萬婦女死于乳腺癌，在我國的一些大中城市乳腺癌的發(fā)病已呈上升趨勢(shì)，已成為威脅女性生命健康最常見的疾病。目前有關(guān)乳腺癌基因及一些相關(guān)因子的研究甚多，對(duì)于丟失性磷酸酶-張力蛋白基因(PTEN)、p53和表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)三種標(biāo)志物的生物學(xué)作用的研究也較為廣泛，但是有關(guān)雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、表皮生長(zhǎng)因子受體2(HER-2)、PTEN、p53和EGFR在乳腺癌中共同表達(dá)的研究較少。本研究采用免疫組化S-P法檢測(cè)68例浸潤(rùn)性乳腺癌組織中PTEN、p53和EGFR蛋白的表達(dá)，分析它們與激素受體及癌基因HER-2的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本68例標(biāo)本均由南通大學(xué)附屬醫(yī)院病理科提供的2004-2005年期間乳腺癌術(shù)后存檔石蠟標(biāo)本，病理類型全部為乳腺浸潤(rùn)性癌，所有病例術(shù)前均未進(jìn)行任何放療、化療或激素治療?；颊呔鶠榕?，年齡30～71歲，平均53.2歲；腫瘤直徑＜3 cm者39例，≥3 cm者29例；腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者32例，未見腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者36例；按組織學(xué)分級(jí)：Ⅰ級(jí)20例，Ⅱ級(jí)25例，Ⅲ級(jí)23例。根據(jù)TNM臨床分期Ⅰ期21例，Ⅱ期27例，Ⅲ期20例。其中46例有完整的隨訪資料，39例存活，7例死亡。隨機(jī)選取病理診斷為乳腺纖維腺瘤病理蠟塊10例為正常對(duì)照組，患者年齡19～44歲，平均36.5歲。

1.2 方法全部標(biāo)本常規(guī)10%福爾馬林固定，石蠟包埋切片。所用試劑均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司，免疫組化采用SP法。

1.3 結(jié)果判斷免疫組化結(jié)果均采用參照文獻(xiàn)[1]的標(biāo)準(zhǔn)記分：即根據(jù)陽性細(xì)胞百分比以及陽性細(xì)胞染色強(qiáng)弱判斷免疫組化結(jié)果。(1)按細(xì)胞染色的強(qiáng)弱記分，無陽性反應(yīng)細(xì)胞為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。(2)按陽性細(xì)胞百分比記分，陽性細(xì)胞數(shù)≤10%為0分，陽性細(xì)胞數(shù)11%～25%為1分，陽性細(xì)胞數(shù)26%～50%為2分，陽性細(xì)胞數(shù)＞50%為3分。根據(jù)兩項(xiàng)之和判斷其結(jié)果，如在同一病變中存在多個(gè)不同評(píng)分的視野，則取最大值和最小值的平均值作為免疫組化評(píng)分，＜2分判為陰性，2～6分判為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用STATA7.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用χ2檢驗(yàn)及Spearman相關(guān)性分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ER、PR、HER-2、PTEN、p53和EGFR在乳腺癌中的表達(dá)情況68例乳腺癌組織中ER陽性30例(44.1%)，PR陽性32例(47.1%)，HER-2陽性37例(54.4%)，PTEN陽性31例(45.6%)，p53陽性35例(51.5%)，EGFR陽性40例(58.8%)。10例纖維腺瘤組織中PTEN、p53及EGFR的陽性表達(dá)率分別為100%、0、10%。3種基因蛋白在上述兩組表達(dá)的陽性率之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見表1。

表1 PTEN、p53、EGFR在乳腺癌和乳腺纖維腺瘤中的表達(dá)(例)

2.2 PTEN蛋白表達(dá)與ER、PR、HER-2的關(guān)系PTEN蛋白的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、ER狀態(tài)有關(guān)，而與發(fā)病年齡、腫瘤大小、臨床分期、PR、HER-2無關(guān)。在ER陽性組中，PTEN蛋白的陽性率為60%(18/30)，在ER陰性組中，PTEN蛋白的陽性率為34.2%(13/38)，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表2 PTEN蛋白表達(dá)與ER、PR、HER-2的關(guān)系(例)

2.3 p53蛋白表達(dá)與ER、PR、HER-2的關(guān)系p53蛋白在乳腺癌中的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、ER、PR狀態(tài)有關(guān)，與發(fā)病年齡、腫瘤大小、臨床分期、癌基因HER-2無關(guān)。在ER陰性組中p53蛋白的陽性率為63.2%(24/38)，明顯高于ER陽性組中陽性率[36.7%(11/30)]，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；在PR陰性組的p53蛋白陽性率為66.7%(24/36)，明顯高于PR陽性組中的陽性率[34.4%(11/32)]，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見表3。

表3 p53蛋白表達(dá)與ER、PR、HER-2的關(guān)系(例)

2.4 EGFR蛋白表達(dá)與ER、PR、HER-2的關(guān)系EGFR蛋白的表達(dá)與乳腺癌組織學(xué)分級(jí)、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、ER狀態(tài)、HER-2有關(guān)，而與發(fā)病年齡、腫瘤大小、臨床分期、PR無關(guān)。EGFR在ER陰性組陽性率為71.1%(27/38)，明顯高于ER陽性組的陽性率[43.3%(13/30)]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；在癌基因HER-2陽性組中，EGFR陽性率為70.3%(26/37)，明顯高于陰性組中EGFR陽性率[45.2%(14/31)]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表4。

表4 EGFR蛋白表達(dá)與ER、PR、HER-2的關(guān)系(例)

3 討論

3.1 PTEN在乳腺癌中的表達(dá)與激素受體關(guān)系PTEN又稱MMACI或TEPI，是1997年由美國三個(gè)實(shí)驗(yàn)室先后發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)具有磷酸酶活性的抑癌基因，定位于染色體10q23，全長(zhǎng)約20 kb，含9個(gè)外顯子和8個(gè)內(nèi)含子，其cDNA共有1 209個(gè)核昔酸，編碼403個(gè)氨基酸殘基組成的蛋白[2]。PTEN蛋白在乳腺癌中的表達(dá)缺失率為27.3%～60.0%[3-4]。Depowski等[5]認(rèn)為PTEN蛋白的低表達(dá)是乳腺癌常見的分子事件，而且PTEN蛋白表達(dá)缺失與不利的預(yù)后因素包括雌孕激素受體陰性、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，以及與乳腺癌存活率明顯相關(guān)，即PTEN蛋白表達(dá)缺失常常與乳腺癌預(yù)后不良相聯(lián)系。研究認(rèn)為PTEN蛋白表達(dá)與ER呈正相關(guān)，且PTEN和ER同時(shí)陽性表達(dá)的乳腺癌患者預(yù)后較好[6-7]。Bose等[2]的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PTEN的雜合性丟失與ER表達(dá)的缺失高度相關(guān)，認(rèn)為PTEN蛋白下降表達(dá)與ER失表達(dá)密切相關(guān)，而與PR無關(guān)。Shoman等[7]的研究也表明在ER陽性乳腺癌中PTEN表達(dá)的下調(diào)與抗雌激素抵抗之間有非常密切的聯(lián)系。本研究結(jié)果顯示：ER陽性組PTEN陽性率高于ER陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，提示PTEN表達(dá)與ER呈正相關(guān)，而與PR、HER-2的表達(dá)無關(guān)，與上述報(bào)道一致。我們推測(cè)在乳腺癌的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移過程中，PTEN基因的10q23區(qū)的某種特異基因改變或PTEN蛋白的表達(dá)缺失與雌激素失調(diào)之間存在著一定的相關(guān)性。而最近有研究發(fā)現(xiàn)AKT激活與PTEN基因的缺失或者HER-2過表達(dá)高度正相關(guān)，并且與PR呈負(fù)相關(guān)，認(rèn)為PTEN基因缺失和HER-2過表達(dá)同時(shí)出現(xiàn)加強(qiáng)了AKT活性，可能導(dǎo)致PR陰性表達(dá)[8]。

3.2 p53 在乳腺癌中的表達(dá)與激素受體關(guān)系p53基因是人類腫瘤中最頻繁突變的抑癌基因，人類p53基因定位于17號(hào)染色體短臂1區(qū)3.1帶(17p13.1)，全長(zhǎng)16～20 kb，基因組有11個(gè)外顯子、10個(gè)內(nèi)含子，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA約2.5 kb。Van't Veer等[9]認(rèn)為p53基因突變與表達(dá)在乳腺癌早期階段已發(fā)生。且隨著分級(jí)的提高，突變型p53蛋白的表達(dá)量也增加。國內(nèi)[10]也有研究發(fā)現(xiàn)突變型p53在良性病變未見陽性表達(dá)，隨著癌變動(dòng)態(tài)過程(乳腺正常組織-良性增生-原位癌-早期浸潤(rùn)癌-浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌)突變型p53的表達(dá)在逐漸升高，說明細(xì)胞周期調(diào)控因子p53基因突變參與了乳腺癌的發(fā)生與發(fā)展過程，可能是正常乳腺組織癌變的一個(gè)早期分子事件。本研究結(jié)果顯示：乳腺癌中p53表達(dá)在ER、PR陰性組陽性率明顯高于陽性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，提示p53蛋白表達(dá)與ER、PR表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致，推測(cè)由于雌激素和孕激素通過活化p53基因而減少乳腺癌發(fā)生，p53一旦突變后，雌激素和孕激素則加速乳腺癌發(fā)生。而Bourdon等[12]認(rèn)為野生型p53可通過Scotin-ER途徑完成促細(xì)胞凋亡過程，所以突變型p53過度表達(dá)則意味著ER、PR可能同時(shí)喪失了受體活性，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡過程受抑制并逐步向細(xì)胞惡性增殖演變。我們認(rèn)為乳腺癌是一種激素依賴性腫瘤，雌激素作為刺激乳腺組織分裂增殖的重要因子，在乳腺癌發(fā)生發(fā)展過程中扮演重要角色。因此乳腺癌中p53蛋白與ER、PR的同時(shí)檢測(cè)對(duì)判斷預(yù)后、指導(dǎo)內(nèi)分泌治療具有一定的指導(dǎo)意義。有關(guān)p53表達(dá)與HER-2的關(guān)系，文獻(xiàn)[13-14]報(bào)道兩者在乳腺癌中的表達(dá)呈正相關(guān)，Bull等[13]的實(shí)驗(yàn)觀察同時(shí)有HER-2擴(kuò)增和p53突變時(shí)，乳腺癌患者復(fù)發(fā)和死亡危險(xiǎn)性增高，它們的共同表達(dá)有較高的預(yù)后價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：p53蛋白表達(dá)與HER-2無關(guān)(P＞0.05)，這可能與實(shí)驗(yàn)條件、實(shí)驗(yàn)方法的不同以及判斷陽性標(biāo)準(zhǔn)的不同有關(guān)。

3.3 EGFR在乳腺癌中的表達(dá)與激素受體關(guān)系EGFR是原癌基因C-erbB-1的表達(dá)產(chǎn)物，其基因定位于人類第七號(hào)染色體短臂上(7p13-p12)，它是含有1 186個(gè)氨基酸的跨膜糖蛋白，分子量為170 kD，具有酪氨酸激酶活性，是一種跨膜分布的細(xì)胞表面?zhèn)鞲衅?。其結(jié)構(gòu)由細(xì)胞外區(qū)、跨膜區(qū)和細(xì)胞內(nèi)區(qū)三部分組成：細(xì)胞外區(qū)為受體部位，由621個(gè)氨基酸殘基組成；跨膜區(qū)由23個(gè)氨基酸組成；細(xì)胞內(nèi)區(qū)由542個(gè)氨基酸組成[15]。多數(shù)研究者認(rèn)為EGFR表達(dá)與ER、PR呈負(fù)相關(guān)[16]，與癌基因HER-2表達(dá)呈正相關(guān)[17-18]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：乳腺癌中EGFR陽性率在ER陰性組為71.1%，明顯高于ER陽性組(43.3%)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，顯示EGFR的表達(dá)與ER呈負(fù)相關(guān)，與上述報(bào)道一致。推測(cè)EGFR在癌細(xì)胞內(nèi)的活化參與了對(duì)ER功能狀態(tài)的抑制，最終導(dǎo)致其激素依賴性消失，說明EGFR過度表達(dá)的乳腺癌其發(fā)生、發(fā)展可能不依賴女性性激素，因此對(duì)化療及內(nèi)分泌治療療效差、預(yù)后不佳。實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示EGFR陽性率在HER-2陽性組明顯高于陰性組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，表明兩者表達(dá)呈正相關(guān)。Park等[17]的研究表明在HER-2基因擴(kuò)增的乳腺癌組織中EGFR的蛋白表達(dá)也顯著增加，認(rèn)為EGFR在乳腺癌中的表達(dá)與原癌基因HER-2的表達(dá)高度正相關(guān)。HER-2作為乳腺癌預(yù)后判斷的一項(xiàng)獨(dú)立因子也已經(jīng)基本被公認(rèn)。我們認(rèn)為HER-2基因與EGFR同屬表皮生長(zhǎng)因子家族，它們具有同源性，均編碼具有酪氨酸激酶活性的細(xì)胞膜糖蛋白，因而EGFR和HER-2可能共同參與腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖，兩者在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中起協(xié)同作用。

綜上所述，腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素、多階段的過程，聯(lián)合檢測(cè)ER、PR、HER-2、PTEN、p53、EGFR對(duì)臨床上乳腺癌患者判斷預(yù)后和靶向治療有重要臨床意義。

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Expression of PTEN,p53,EGFR,ER,PR and HER-2 in invasive breast cancer.

TANG Yong-feng1,FENG Xiao-min1,XIE Li-li2.1.Nantong Tichen Health School,Nantong 226007,Jiangsu,CHINA;2.Department of Pathology,Nanjing Maternity and Child Health Care Hospital,Nanjing 210004,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo evaluate the expression and significance of estrogen receptor(ER),progesterone receptor(PR),human epidermal growth factor receptor 2(HER-2),phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten(PTEN),protein 53(p53)and epithelial growth factor receptor(EGFR)in the invasive breast cancer. MethodsS-P immunohistochemistry was used to detect the expression of ER,PR,HER-2,PTEN,p53 and EGFR in 68 cases of breast cancer and 10 cases of breast fibroadenoma.ResultsThe expression rate of ER,PR,HER-2, PTEN,p53 and EGFR were 44.1%,47.1%,54.4%,45.6%,51.5%and 58.8%,respectively.The expression of PTEN was positively correlated with the expression of ER,and the expression of p53 was negatively correlated with the expression of ER and PR.EGFR expression was negatively correlated with ER expression,while positively correlated with HER-2 expression.ConclusionThe combined detection of ER,PR HER-2,PTEN,p53,EGFR could indicate the prognosis of breast cancer,which plays an important role in individual treatment.

Breast cancer;Estrogen receptor(ER);Human epidermal growth factor receptor 2(HER-2);Protein 53(p53);Epithelial growth factor receptor(EGFR)

R737.9

A

1003—6350（2014）05—0630—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.05.0247

2013-08-10)

謝莉莉。E-mail：nantongxielili@sina.com