郭曉秋 李 武 王莉萍 何 躍

1.江西省中醫(yī)院藥劑科，南昌 330006；2.江西省撫州市第一人民醫(yī)院藥劑科，江西撫州 344000

烏藥水提取物抗心律失常作用的研究

郭曉秋1李 武2王莉萍2何 躍2

1.江西省中醫(yī)院藥劑科，南昌 330006；2.江西省撫州市第一人民醫(yī)院藥劑科，江西撫州 344000

目的 研究烏藥水提取物的抗心律失常作用。 方法 采用常規(guī)抗心律失常方法，將三氯甲烷誘發(fā)小鼠室顫試驗(yàn)和氯化鈣誘發(fā)大鼠室顫試驗(yàn)分為生理鹽水組、維拉帕米組、10.0 mg/kg烏藥水提取物組和30.0 mg/kg烏藥水提取物組；將腎上腺素誘發(fā)家兔心律失常試驗(yàn)分為給藥前后組；蟾蜍離體坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位試驗(yàn)分為任氏液組、1.0%鹽酸普魯卡因溶液組、0.5 g/ml和1.0 g/ml烏藥水提取物組。 結(jié)果 烏藥水提取物對(duì)三氯甲烷誘發(fā)的小鼠室顫具有明顯的治療作用（P＜0.05），對(duì)氯化鈣誘發(fā)的大鼠室顫具有明顯的預(yù)防效果（P＜0.05），能明顯對(duì)抗腎上腺素誘發(fā)的家兔心律失常（P＜0.01），可明顯降低蟾蜍離體坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位振幅（P＜0.05）。 結(jié)論 烏藥水提取物具有明顯的抗試驗(yàn)性心律失常作用，能對(duì)抗由三氯甲烷、氯化鈣、腎上腺素等誘發(fā)的心律失常，其抗心律失常作用可能與其抑制Na+內(nèi)流及與阻斷β-腎上腺素受體有關(guān)。

烏藥；水提取物；心律失常

心血管疾病是一類嚴(yán)重威脅人類健康的常見病和多發(fā)病，其發(fā)病率和死亡率在各類疾病中占首位，嚴(yán)重心律失常已經(jīng)成為導(dǎo)致人類死亡的主要原因之一。近年來(lái)，對(duì)于心律失常的非藥物治療已取得了不少進(jìn)展，雖然非藥物治療可以解決一部分心律失常患者的治療問題，但是大部分心律失常患者還需用藥物治療，因此，藥物治療仍是心律失常疾病的主要治療方法。烏藥又名銅錢樹、土木香，是樟科山胡椒屬植物烏 藥[Lindera Aggregata（Sims） Kosterm.（LAK）]的 塊根，主產(chǎn)于江西、浙江、安徽、江蘇、陜西等地。味辛，性溫，歸肺、脾、腎、膀胱經(jīng)，具有行氣止痛、溫腎散寒等功效，臨床主要用于胃寒氣滯、胸悶脘痛、呃逆、痛經(jīng)等癥[1-2]。烏藥各部位含有糖類、酚類、鞣質(zhì)、氨基酸、蛋白質(zhì)、生物堿、皂苷、黃酮、蒽醌、香豆素、內(nèi)酯、甾體等成分，但是各成分在不同器官中的含量有差異，如氨基酸在塊根中含量較高，生物堿在直根和塊根中含量較高。烏藥主要由揮發(fā)油、異喹啉類生物堿及呋喃倍半萜三大類成分組成[3-5]，同時(shí)烏藥中還含有烏藥醚內(nèi)酯、異烏藥內(nèi)酯、烏藥內(nèi)酯和去甲異波爾定等[6]。有報(bào)道烏藥提取物有明顯的鎮(zhèn)痛、抗炎作用[7-8]，烏藥葉總黃酮具有降脂作用、抗氧化作用及肝損傷的保護(hù)作用[9-10]，烏藥提取物還具有抗疲勞作用[11]。本次研究主要分析烏藥水提取物抗心律失常的作用。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

烏藥水提取物的制備：取干燥烏藥全草（從撫州市醫(yī)藥公司購(gòu)置）300 g，加雙蒸水過液面2 cm，煮沸3次。30 min/次，合并濾液，濾液濃縮至300 ml。濃縮液加3倍量95%的乙醇混勻，冰箱靜置過夜，次日減壓蒸留，回收乙醇，得300 ml無(wú)醇味的烏藥提取物。提取物相當(dāng)于1 g/ml的烏藥。用0.5%NaHCO3溶液調(diào)整pH為7.0，置冰箱中備用。

維拉帕米（上海禾豐制藥有限公司，批號(hào)：20120234），三氯甲烷（上海試劑總廠，批號(hào)：20110820），腎上腺素（上海禾豐制藥有限公司，批號(hào)：20120234），鹽酸普魯卡因（天津世紀(jì)藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20120402），氯化鈣（天津金耀氨基酸有限公司，批號(hào)：20100904）。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與儀器

動(dòng)物：家兔、SD大鼠和昆明種小鼠購(gòu)自江西中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（級(jí)別：清潔級(jí)），蟾蜍由贛南醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供。

儀器：SBR-1示波器（汕頭電子儀器廠），XDH-3心電圖機(jī)（上海醫(yī)療電子儀器廠）。

1.3 方法

1.3.1 烏藥水提取物對(duì)三氯甲烷誘發(fā)小鼠室顫影響試驗(yàn) 昆明種小鼠80只，雌雄兼用，體重（22.3±1.8）g，隨機(jī)分為4組。分別腹腔注射10.0 mg/kg烏藥水提取物、30.0 mg/kg烏藥水提取物、5.0 mg/kg維拉帕米和等容積的生理鹽水，25 min后將小鼠移入含有10 ml三氯甲烷藥棉的燒杯中，至小鼠呼吸停止后，立即剖胸觀察，以確定是否發(fā)生心室纖顫。

1.3.2 烏藥水提取物對(duì)氯化鈣誘發(fā)大鼠室顫影響試驗(yàn)取SD大鼠24只，雌雄兼用，體重(190±20)g，隨機(jī)分為4組，腹腔注射烏拉坦1.2g/kg，麻醉，記錄Ⅱ?qū)?lián)ECG，分別腹腔注射10.0 mg/kg烏藥水提取物、30.0 mg/kg烏藥水提取物、5.0 mg/kg的維拉帕米和等容積的生理鹽水，5 min 后快速（10 s內(nèi)）靜脈注射 CaCl2，140 mg/kg，記錄大鼠發(fā)生心室纖顫的只數(shù)和發(fā)生率。

1.3.3 烏藥水提取物對(duì)腎上腺素誘發(fā)家兔心律失常影響試驗(yàn) 取家兔 16只，體重（2.0±0.5）kg。 首次快速（1 min內(nèi)注完）靜脈注射0.025%腎上腺素75 μg/kg，記錄出現(xiàn)室性心律失常的時(shí)間以及心律失常的持續(xù)時(shí)間。45 min后，靜脈注射20.0 mg/kg的烏藥提取物，5 min后再次快速靜脈注射等量的腎上腺素。采用自身對(duì)照方法，比較給藥前后開始出現(xiàn)室性心律失常的時(shí)間和心律失常持續(xù)時(shí)間。

1.3.4 烏藥水提取物對(duì)蟾蜍離體坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位影響試驗(yàn) 制備蟾蜍離體坐骨神經(jīng)標(biāo)本，標(biāo)本于任氏液中穩(wěn)定0.5 h，坐骨神經(jīng)近心端用0.25 ms、2 Hz、2倍閾電壓強(qiáng)度的方波刺激，遠(yuǎn)心端通過引導(dǎo)電極與SBR雙線示波器連接，觀察坐骨神經(jīng)正常動(dòng)作電位。在位于刺激電極與引導(dǎo)電極之間的神經(jīng)干上，分別放置浸濕試藥的小棉球，觀察用藥前后動(dòng)作電位的振幅。標(biāo)本分別給予任氏液、1.0%的鹽酸普魯卡因溶液、0.5 g/ml和1.0 g/ml的烏藥水提取物，以給藥前后動(dòng)作電位振幅為100%，分別計(jì)算給藥后不同時(shí)間動(dòng)作電位振幅的相應(yīng)百分率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 14.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以±s表示，組間兩兩比較用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 烏藥水提取物對(duì)三氯甲烷誘發(fā)小鼠室顫的影響

本研究提示，10.0、30.0 mg/kg的烏藥水提取物能使小鼠室顫發(fā)生率顯著下降（P＜0.05）（表1）。

表1 烏藥水提取物對(duì)三氯甲烷誘發(fā)小鼠室顫的影響（±s）

與生理鹽水組比較，*P＜0.05；#P＜0.01

組別 n 劑量（mg/kg）小鼠室顫只數(shù)（n）室顫發(fā)生率（%）生理鹽水組維拉帕米組烏藥水提取物A組烏藥水提取物B組20 20 20 20-5.0 10.0 30.0 20 4 10 7 100.0 20.0#50.0*35.0#

2.2 烏藥水提取物對(duì)氯化鈣誘發(fā)大鼠室顫的影響

10.0 mg/kg、30.0 mg/kg的烏藥水提取物能顯著降低大鼠室顫的發(fā)生率（P＜0.05）（表2）。

表2 烏藥水提取物對(duì)CaCl2誘發(fā)大鼠室顫的影響（±s）

表2 烏藥水提取物對(duì)CaCl2誘發(fā)大鼠室顫的影響（±s）

與生理鹽水組比較，*P＜0.05；#P＜0.01

組別 n 劑量（mg/kg）小鼠室顫只數(shù)（n）室顫發(fā)生率（%）生理鹽水組維拉帕米組烏藥水提取物A組烏藥水提取物B組6666-5.0 10.0 30.0 5132 100.0 16.6#50.0*33.3#

2.3 烏藥水提取物對(duì)腎上腺素誘發(fā)家兔心律失常的影響

20.0 mg/kg的烏藥水提取物能顯著延長(zhǎng)腎上腺素誘發(fā)家兔開始出現(xiàn)心律失常的時(shí)間和心律失常持續(xù)時(shí)間（P＜0.05）（表3）。

2.4 烏藥水提取液對(duì)蟾蜍離體坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位的影響

0.5 g/ml和1.0 g/ml的烏藥水提取液能顯著降低蟾蜍離體坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位振幅（P＜0.05）（表4）。

表3 烏藥水提取物對(duì)腎上腺素誘發(fā)家兔心律失常的影響（s，±s）

表3 烏藥水提取物對(duì)腎上腺素誘發(fā)家兔心律失常的影響（s，±s）

與給藥前比較，*P＜0.01

時(shí)間 n 開始出現(xiàn)心律失常的時(shí)間 心律失常持續(xù)時(shí)間給藥前給藥后88 1.9±1.1 18.1±8.6*198±30.3 56.2±25.6*

表4 烏藥水提取液對(duì)蟾蜍離體坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位振幅的影響（%，±s）

表4 烏藥水提取液對(duì)蟾蜍離體坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位振幅的影響（%，±s）

與任氏液組比較，*P ＜0.05；**P ＜0.01

藥物名稱 n 給藥前給藥后6 min 12 min 18 min 24 min任氏液普魯卡因?yàn)跛幩崛∫海?.5 g/ml）烏藥水提取液（1.0 g/ml）10 10 10 10 100 100 100 100 99.5±4.6 31.6±18.7*58.1±22.3*42.4±17.9*99.1±3.6 3.3±2.5#27.3±5.6#22.6±3.1#100.5±4.7 0#10.8±2.6#6.7±3.1#99.8±2.7 0#2.3±1.8#0#

3 討論

一定劑量的三氯甲烷可提高心肌的自律性，導(dǎo)致室性期前收縮、室性心動(dòng)過速，甚至室性顫動(dòng)。本次研究中生理鹽水組小鼠室顫發(fā)生率為100.0%，而低劑量（10.0 mg/kg）和高劑量（30.0 mg/kg）的烏藥水提取物使小鼠室顫率分別降低為50.0%、35.0%，提示烏藥水提取物可降低三氯甲烷誘發(fā)的室顫發(fā)生率，且具有劑量依賴性。

腎上腺素為腎上腺素受體（α、β）激動(dòng)劑，通過激動(dòng)心臟的β1-腎上腺素受體對(duì)心臟產(chǎn)生較強(qiáng)的興奮作用，并且腎上腺素受體興奮后可開放Ca2+通道，促進(jìn)Ca2+內(nèi)流，提高心肌細(xì)胞的興奮性和自律性，但也可引起后去極及自發(fā)活動(dòng)。同時(shí)β1-受體興奮還可激活K+通道，促進(jìn)K+外流，降低心肌細(xì)胞的最大舒張電位，增加膜反應(yīng)性，使傳導(dǎo)加快，故腎上腺素過量又可導(dǎo)致心律失常的發(fā)生。給予10.0、30.0 mg/kg的烏藥水提取物后，腎上腺素誘發(fā)心律失常的時(shí)間較給藥前明顯延長(zhǎng)，且心律失常持續(xù)時(shí)間也明顯縮短。說明烏藥水提取物可能通過阻斷心臟的β1-腎上腺素受體，降低心肌細(xì)胞的興奮性和自律性，達(dá)到對(duì)抗腎上腺素誘發(fā)的心律失常。

蟾蜍離體坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位振幅主要系Na+內(nèi)流所致，0.5、1.0 g/ml的烏藥水提取物能明顯降低蟾蜍離體坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位的振幅，表明烏藥水提取物對(duì)Na+內(nèi)流有抑制作用。

綜上所述，烏藥水提取物具有抗心律失常作用，且其抗心律失常作用可能與抑制Na+內(nèi)流及抗β-腎上腺素受體有關(guān)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：53.

[2]吳征鎰.新華本草綱要（第一卷）[M].上海：上海科技出版社，1988：8.

[3]董巖，劉洪玲，王新芳.烏藥揮發(fā)油化學(xué)成分的微波-蒸餾 GC-MS 分析[J].山東中醫(yī)雜志，2005，24（6）：370-372.

[4]陳敏珠.藥理學(xué)進(jìn)展（抗炎免疫藥理分冊(cè)）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1982：176.

[5]蔡立紅，王崢濤，李永國(guó)，等.高效液相色譜法測(cè)定烏藥中烏藥醚內(nèi)酯的含量[J].中國(guó)中藥雜志，2004，29（7）：657-659.

[6]閆利利，王金芳，李秋月，等.烏藥的化學(xué)成分研究[J].中國(guó)藥業(yè)，2013，22（2）：16-17.

[7]侴桂新，李慶林，王崢濤，等.烏藥活性組分LEF的化學(xué)成分及抗風(fēng)濕作用[J].植物資源與環(huán)境，1999，8（4）：1-6.

[8]李慶林，侴桂新，竇昌貴，等.烏藥提取物的鎮(zhèn)痛、抗炎作用研究[J].中藥材，1997，20（12）：629-631.

[9]曹寧，郭文潔，唐佳喻，等.烏藥葉總黃酮對(duì)高脂血癥脂肪肝小鼠模型的降脂作用[J].中藥新藥與臨床藥理，2011，22（2）：149-153.

[10]顧莉蘊(yùn)，羅瓊，肖梅，等.烏藥葉總黃酮的抗氧化作用及對(duì)四氯化碳致小鼠肝損傷的保護(hù)作用[J].中藥新藥與臨床藥理，2008，19（6）：447-450.

[11]陳宇，吳人照，戴關(guān)海，等.烏藥緩解體力疲勞作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].浙江中醫(yī)雜志，2010，45（1）：64-65.

Study of antiarrhythmic effect ofLindera aggregataaqueous extract

GUO Xiao-qiu1LI Wu2WANG Li-ping2HE Yue2
1.Department of Pharmacy,Hospital of Traditional Chinese Medicine of Jiangxi Province,Nanchang 330006,China;2.Department of Pharmacy,the First People′s Hospital of Fuzhou City in Jiangxi Province,Fuzhou 344000,China

ObjectiveTo study the antiarrhythmic effect of aqueous extract of Lindera aggregata.MethodsThe conventional anti-arrhythmic methods was selected,two conventional antiarrhythmic models were employed by establishing the chloroform-induced mice ventricular fibrillation model and calcium-induced rat ventricular fibrillation model,the experimental animals were divided into saline group,verapamil group,10.0 mg/kg and 30 mg/kg Lindera aggregata aqueous extract treating groups.In the adrenaline-induced arrhythmias rabbits experiment,animals were grouped as before administration and after administration.In the in vitro toad sciatic nerve action potential experiment,the toads were randomly divided into ringer solution group,1.0%procaine hydrochloride group,0.5 g/ml and 1.0 g/ml Lindera aggregata aqueous extract groups.ResultsThe aqueous extract of Lindera aggregata showed obvious treating effect on mice ventricular fibrillation(VF)induced by chloroform(P＜0.05),and also for preventive effect of rat VF induced by calcium chloride(P＜0.01),it reduced the potential amplitude of toad sciatic nerve action significantly(P＜0.05).ConclusionThe aqueous extract of Lindera aggregata has obvious antiarrhythmic effect against arrhythmia induced by chloroform,calcium chloride and adrenaline.The mechanism may be related to the inhibition of Na+influx and blocking β-adrenergic receptor.

Lindera Aggregata(Sims)Kosterm;Aqueous extract;Arrhythmia

R965.1

A

1674-4721（2014）04（a）-0016-03

江西省衛(wèi)生廳科技計(jì)劃項(xiàng)目（20133229）

郭曉秋（1972-），女，本科學(xué)歷，副主任藥師，主要從事臨床藥學(xué)研究

2014-01-27 本文編輯：袁 成）