陳連梅

摘?要：建立了利用固相萃取-高效液相色譜法同時測定肉制品中4種合成色素的檢測方法。樣品經(jīng)乙醇、氨水和水溶液(7:2:1，m/m)提取后，固相萃取凈化，經(jīng)C18柱分離，用紫外檢測器檢測。結果表明：4種合成色素分離良好，加標平均回收率為66.7%～99.7%，相對標準偏差1.9%～3.6%。該方法準確度和精密度較高，可應用于測定肉制品中的合成色素。

關鍵詞：合成色素；固相萃?。环聪喔咝б合嗌V法

中圖分類號：TS251.1 文獻標志碼：A 文章編號：1001-8123(2013)10-0026-03

合成色素一般以苯、甲醛、萘等為原料，經(jīng)磺化、鹵化、偶氮化等加工而成，有一定毒性和致癌性，但因其成本低廉、色澤鮮艷、著色力強等優(yōu)點，被廣泛使用。GB 2760—2011《食品安全國家標準：食品添加劑使用標準》對常見合成色素的使用進行嚴格限制。目前現(xiàn)行有效的檢測方法[1-3]未涉及肉制品中合成色素的檢測，肉制品中胭脂紅的檢測[4]存在操作繁瑣，凈化效果差，回收率不穩(wěn)定等缺點。本實驗參考相關文獻[5-20]，建立了一套具有前處理簡單、凈化效果好、回收率穩(wěn)定等優(yōu)點的檢測方法。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅均購自國家標準物質中心；甲醇(色譜純)、乙酸銨(色譜純)均購自Fisher公司；其他試劑均為分析純；固相萃取柱：P-WAX(60mg/3mL)。

1200高效液相色譜儀 美國Aglient公司；T10均質器 德國IKA公司；VX-Ⅲ平行多管振蕩器 北京Targin公司；N1001旋轉蒸發(fā)儀 日本Eyela公司；V-700真空泵 瑞士Büchi公司；GL-21M高速冷凍離心機 長沙相儀公司；KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司。

1.2 色譜條件

色譜柱：ZORBAX XDB-C18柱(4.6mm×150mm，5?m)；流動相：甲醇-乙酸銨(0.02mol/L)，梯度洗脫(表1)，流速1.0mL/min，檢測波長為480nm。柱溫30℃；進樣量20?L。

1.3 方法

1.3.1 樣品提取

稱取經(jīng)處理均勻后的樣品2.50g于50mL具塞離心管中，加入10mL乙醇、氨水和水溶液(7:2:1，m/m)溶液，10000r/min均質2min后經(jīng)平行多管振蕩器提取30min，4000r/min離心1min，上清液轉移至另一50mL離心管中，殘渣用10mL乙醇、氨水和水溶液(7:2:1，m/m)溶液重復提取一次，合并提取液。提取液中加入10mL水飽和正己烷，濃縮至2～3mL，用檸檬酸溶液調pH值至6～7，備用。

1.3.2 樣品凈化

P-WAX固相萃取柱經(jīng)3mL甲醇溶液、3mL水活化后，將1.3.1節(jié)中的全部樣液過柱，依次用3mL純凈水、3mL甲醇溶液淋洗，抽干。用5mL 2%氨水甲醇溶液洗脫，洗脫液轉移至旋轉蒸發(fā)瓶中，40℃蒸干，用1mL純凈水定容后超聲溶解，經(jīng)0.45μm水系微孔濾膜過濾，濾液供高效液相色譜儀測定。

2 結果與分析

2.1 樣品預處理方法選擇

本試驗比較水、乙醇、乙醇氨水作為提取液提取樣品中的色素，結果表明乙醇氨水的提取效果最好，在經(jīng)固相萃取柱凈化前須將乙醇揮去，并用檸檬酸溶液調pH值至6～7，否則會降低樣品的回收率。

2.2 樣品凈化選擇

GB/T 5009.35—2003《食品中合成色素的測定》中樣品的凈化存在操作繁瑣、回收率不穩(wěn)定的問題。本實驗考慮到合成色素分子結構中均含有磺酸根，選擇弱陰離子固相萃取柱凈化樣品，經(jīng)試驗，Strata-X-AW和Cleanert P-WAX均能達到良好的凈化效果。

2.3 流動相選擇

分別對甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.02mol/L乙酸銨水溶液、甲醇-0.02mol/L乙酸銨水溶液體系進行試驗，目標物在甲醇-水、乙腈-水體系中峰形很差，乙腈-0.02mol/L乙酸銨水溶液、甲醇-0.02mol/L乙酸銨水溶液對目標物的分離效果比較理想，考慮到環(huán)保與檢測成本，終選擇甲醇-0.02mol/L乙酸銨水溶液作為流動相?？紤]到將4種物質完全分離，且盡可能地縮短洗脫時間，同時兼顧分離效果和色譜峰形，流動相洗脫程序見表1所示，分離效果如圖1所示。

2.4 回歸方程、線性范圍和檢出限

準確吸取一定量的莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅標準儲備液，用水配制成混合標準溶液，按1.2節(jié)中色譜條件進樣，以質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線。采用陰性樣品中添加目標化合物的方法，按1.3節(jié)中的方法進行前處理，以10倍信噪比為定量限，各組分的回歸方程、相關系數(shù)、線性范圍及定量限列于表2。

2.5 方法的回收率和精密度

分別加入一定量的4種組分標準品，按1.3節(jié)中方法進行前處理，1.2節(jié)中色譜條件進樣，考察方法的回收率和精密度，每組作6組平行實驗，樣品量為2.50g。從表3中看出，各組分的回收率在66.7%～99.7%之間，相對標準偏差在1.9%～3.6%之間。

3 結?論

本實驗建立了同時測定樣品中4種合成色素的固相萃取-反相高效液相色譜檢測方法。4種組分的檢出限為0.06～0.08mg/kg，回收率在66.7%～99.7%之間，相對標準偏差在1.9%～3.6%之間，方法的回收率和精密度均能滿足檢測需求。通過大量測試樣品的檢測證實，此方法切實可行，可應用于樣品中合成色素的檢測。

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