文麗麗，張立升，呂文軍

(1.黑龍江省黑河市藥品檢驗(yàn)所，黑龍江黑河164300;2.黑龍江省黑河市第一人民醫(yī)院，黑龍江黑河164300)

雙水楊酯片是消炎鎮(zhèn)痛非甾體抗炎藥，用于緩解各類疼痛，包括頭痛、牙痛、神經(jīng)痛、關(guān)節(jié)痛及軟組織炎癥等中等度疼痛。與阿司匹林結(jié)構(gòu)和作用類似，其在生產(chǎn)中未反應(yīng)的，或在貯存期中(特別是貯存不當(dāng))水解產(chǎn)生的水楊酸，不僅對(duì)人體有毒性，且分子中酚羥基在空氣中逐漸被氧化成一系列醌型有色物質(zhì)，可使雙水楊酯片變色，故藥典規(guī)定雙水楊酯檢查游離水楊酸，但藥典方法為分光光度法，前處理很麻煩，而且所用提取試劑為三氯甲烷，對(duì)人體傷害也很大，本文建立了高效液相色譜法測定水楊酸含量的方法，快速準(zhǔn)確，精密度好。

1 儀器與試藥

Waters e2695高效液相色譜儀(包括自動(dòng)進(jìn)樣器、二元輸液泵、柱溫箱和2998紫外檢測器);水楊酸對(duì)照品(批號(hào):100106-200303，來源:中國藥品生物制品檢定所);冰醋酸，四氫呋喃為化學(xué)純，乙腈、甲醇均為色譜純。

2 色譜條件的選擇

色譜柱:采用 waters C18色譜柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相:乙腈-四氫呋喃-冰醋酸 -水(20∶5∶5∶70)。檢測波長303 nm，柱溫30℃，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量10 μL，理論板數(shù)按水楊酸計(jì)不低于5000，分離度符合要求。

3 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

3.1 溶液的制備

3.1.1 供試品溶液:精密稱取本品細(xì)粉適量(約相當(dāng)于雙水楊酯0.5 g)，置100 mL量瓶中，加1%冰醋酸的甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，用濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。

3.1.2 對(duì)照品溶液:精密稱取水楊酸對(duì)照品適量，加1%冰醋酸的甲醇溶液溶解并稀釋至每1 mL中含15 μg的溶液，即得。

3.1.3 陰性對(duì)照溶液的制備 取1%冰醋酸的甲醇溶液，作為陰性對(duì)照溶液。

3.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn):按上述色譜條件，取對(duì)照品溶液10 μL，進(jìn)樣，記錄色譜圖，見圖1，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使水楊酸色譜峰的峰高約為滿量程的20%，雙水楊酯和水楊酸分離度大于1.5，對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液的色譜圖，見圖2、3，供試品溶液在303 nm檢測波長下色譜圖中如出現(xiàn)與對(duì)照溶液中水楊酸位置相同的色譜峰，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。

3.3 線性關(guān)系考察:精密稱取水楊酸對(duì)照品15 mg，置50 mL量瓶中，加1%冰醋酸的甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量1、2.5、5、7.5、10 mL 分置 100 mL 量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，依照上述色譜條件測定其峰面積，以各對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，濃度為橫坐標(biāo)(X)進(jìn)行線性回歸?；貧w方程:Y=85462C-4257.7，r=0.997.結(jié)果表明，水楊酸在2.97～29.7 μg/mL的濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

3.4 破壞性試驗(yàn)［1］:取本品進(jìn)行酸性、堿性和加熱破壞試驗(yàn)后，按上述色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明，各種破壞條件下產(chǎn)生的雜質(zhì)與水楊酸分離良好，其中加熱水解產(chǎn)生大量的游離水楊酸。

3.5 精密度試驗(yàn):取水楊酸對(duì)照品溶液，按上述測定法測定，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，計(jì)算峰面積的RSD=0.6%，結(jié)果表明儀器的進(jìn)樣精密度良好。

3.6 溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn):取水楊酸對(duì)照品溶液，在室溫下放置，于0，2，5，7，12 h 時(shí)分別進(jìn)樣，測得峰面積 RSD 為 10%，表明水楊酸溶液的穩(wěn)定性非常不好，應(yīng)臨用新制。

3.7 回收率試驗(yàn):取陰性對(duì)照溶液，分別精密加入一定量的水楊酸對(duì)照品溶液，按供試品溶液制備方法制備，按外標(biāo)法測定水楊酸含量，計(jì)算回收率，結(jié)果表明，平均回收率為99.0%，RSD 為 1.0%。

3.8 樣品的測定:取樣品，按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算各批樣品有關(guān)物質(zhì)水楊酸相當(dāng)于雙水楊酯標(biāo)示量的百分含量。結(jié)果見表1。

表1 樣品測定結(jié)果

4 討論

4.1 檢測波長的選擇［2］:《中國藥典》2010年版二部阿司匹林項(xiàng)下游離水楊酸的檢測波長均為303 nm，依法操作，最終確認(rèn)適合本品。

4.2 限量確認(rèn):根據(jù)《中國藥典》2010年版二部阿司匹林項(xiàng)下游離水楊酸的限量規(guī)定，我們確定本品的水楊酸限量規(guī)定為:含水楊酸不得超過雙水楊酯標(biāo)示量的0.3%。

［1］ 馮金元，杜碧瑩.HPLC法測定酚咖片中有關(guān)物質(zhì)對(duì)氨基酚的含量［J］.中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2011，12(1):19-21.

［2］ 國家藥典委員會(huì).中國藥典［S］.2010年版.二部.