摘要：采用菌落直徑法測定茶樹炭疽病菌山茶刺盤孢（Colletotrichum camelliae）對10種化學殺菌劑的敏感性，以期為該病原引起的茶炭疽病的田間防控提供參考依據(jù)。結(jié)合試驗數(shù)據(jù)分析表明，75%百菌清和50%甲基硫菌靈在5 μg/mL時抑菌率就達到了100%；10%苯醚甲環(huán)唑和250 g/L丙環(huán)唑在50 μg/mL時抑菌率分別達到了92.88%，100%；250 g/L吡唑醚菌酯、40%腈菌唑、80%代森錳鋅、250 g/L嘧菌酯、25 g/L咯菌腈和80%代森鋅的抑菌效果依次減弱。并對10種化學殺菌劑的抑菌率進行分析，分別計算出毒力回歸方程、相關系數(shù)及半數(shù)有效濃度（EC50）。研究發(fā)現(xiàn)50%甲基硫菌靈、75%百菌清、250 g/L丙環(huán)唑和10%苯醚甲環(huán)唑?qū)Σ铇涮烤揖休^強的毒力。

關鍵詞：茶炭疽??；毒力測定；化學殺菌劑

中圖分類號：S571.1；TQ455 文獻標識碼：A 文章編號：1000－3150（2024）08-35-5

茶炭疽病是茶樹常見的葉部病害之一，該病害的發(fā)生可引起茶樹葉部壞死、影響茶樹的光合作用、嚴重者導致茶樹死亡[1]。在秋季茶炭疽病發(fā)生嚴重的茶園，翌年春茶將減產(chǎn)10%～20%[2]。我國研究者對茶炭疽病的病原分類進行了系統(tǒng)性研究，Liu等[3]從福建和浙江等7個省份的茶炭疽病發(fā)病葉片分離鑒定到了6個炭疽病病原菌種，并認定C. camelliae為茶炭疽病病原菌的優(yōu)勢種。Wang等[4]對中國15個省份的茶炭疽病病葉進行分離，所得到的病原菌包括已知種C. camelliae、C. cliviae、C. fioriniae、C. fructicola、C. karstii、C. siamense、C. aenigma、C. endophytica和C. truncatum，1個新發(fā)現(xiàn)種C. wuxiense，以及1個未鑒定種，通過分離鑒定，同樣認為C. camelliae為茶炭疽病病原菌的優(yōu)勢種。

在眾多的茶炭疽病病原菌種中，山茶刺盤孢（Colletotrichum camelliae）能為害我國大多數(shù)茶樹品種，是引起我國茶樹炭疽病發(fā)生的主要病原菌種[5]。其分生孢子為圓柱形或梭形，兩端鈍圓，中間有1～2個小油滴，部分中間稍有溢縮。附著胞深褐色，近圓形或不規(guī)則形[6]。其主要依靠菌絲體或者分生孢子粘附在茶樹葉片的茸毛上，待環(huán)境適宜后，萌發(fā)產(chǎn)生芽管侵入葉片組織，侵入可在體內(nèi)潛育1～2周，發(fā)病初期出現(xiàn)深綠色水漬狀小病斑，病斑慢慢擴大成褐色，發(fā)病后期病斑部位形成凹陷隆起，并分布密集的小黑點，即為分生孢子盤，這是造成炭疽病反復發(fā)生的侵染源[7]。

由于對茶炭疽病的研究還不夠深入，針對茶樹炭疽病的防治手段仍比較有限。王國君等[8]通過田間防控試驗發(fā)現(xiàn)25%吡唑醚菌酯乳油和10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑對茶炭疽病防控有較好效果。陳俊華等[9]通過菌絲抑制法測定信陽茶炭疽病對化學殺菌劑的敏感性，發(fā)現(xiàn)其對10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑、25%嘧菌酯乳油、25%丙環(huán)唑乳油的敏感性較高。姚秋榮等[10]通過開展殺菌劑阿砣防治茶炭疽病的田間試驗，發(fā)現(xiàn)其對茶炭疽病的防治效果較好。使用化學藥劑防治茶炭疽病仍是當前和以后很長一段時間的主要手段，本試驗采用室內(nèi)菌絲生長速率法，測定C. camelliae對10種常見化學殺菌劑的敏感性，為由病原菌C. camelliae引起的茶炭疽病的化學防控提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株及培養(yǎng)基

茶樹炭疽病病原菌從中國農(nóng)業(yè)科學院茶葉研究所試驗茶園中發(fā)病的茶樹葉片中采用組織分離法得到，經(jīng)過生物學和形態(tài)學鑒定為山茶刺孢盤（C. camelliae）。所用培養(yǎng)基為常規(guī)的PDA培養(yǎng)基（馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂15 g、蒸餾水1 000 mL）。

1.2 供試化學殺菌劑

試驗所用化學殺菌劑如表1所示。其中4種保護劑，4種保護治療劑，2種治療劑。

1.3 試驗方法

先將10種供試化學殺菌劑按照其說明給出的有效成分配置成200 μg/mL的母液，然后依次稀釋至不同梯度。待高溫滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至50 ℃時，用移液器吸取2 mL不同種類的藥液，加入18 mL的培養(yǎng)基中，搖晃均勻，配制成0.5、5.0、10.0、50.0、100.0 μg/mL 5種不同藥劑質(zhì)量濃度的PDA培養(yǎng)基。并以2 mL無菌水加入到18 mL培養(yǎng)中為對照（CK），待平板中的培養(yǎng)基凝固后，用5 mm的打孔器打取活化好的菌餅，用鑷子將菌餅放置于培養(yǎng)基中間。每個處理設置3個重復。放置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)2 d后每天使用十字交叉法測量菌絲直徑，做好記錄。待CK組菌絲長到培養(yǎng)皿2/3時，移至超凈工作臺中拍照，并計算抑菌率。

2 結(jié)果與分析

2.1 10種化學殺菌劑抑菌效果測定

從試驗結(jié)果（表2）可以看出，C. camelliae對這10種化學殺菌劑均具有一定的敏感性。這10種化學殺菌劑的抑菌效果從高到低依次為50%甲基硫菌靈、75%百菌清、250 g/L丙環(huán)唑、10%苯醚甲環(huán)唑、40%腈菌唑、80%代森鋅、250 g/L吡唑醚菌酯、80%代森錳鋅、25 g/L咯菌腈、250 g/L嘧菌酯。在這10種化學殺菌劑中，50%甲基硫菌靈0.5 μg/mL抑菌率為10.93%，在5、10、50、100 μg/mL時均完全抑制了菌絲的生長；75%百菌清的抑菌效果雖然在0.5 μg/mL時抑菌率僅為2.68%，比同質(zhì)量濃度的50%甲基硫菌靈抑菌率稍低，但在5、10、50、100 μg/mL時也完全抑制了病原菌絲的生長。250 g/L丙環(huán)唑在10.0 μg/mL時，抑菌率超過90%，為93.45%；在50、100 μg/mL時，抑菌率均為100%。10%苯醚甲環(huán)唑在質(zhì)量濃度為10.0、50.0 μg/mL時的抑菌率超過80%，分別為81.77%、92.88%；在100 μg/mL時抑菌率為100%。以上4種殺菌劑對C. camelliae的抑菌效果較好（圖1）。另外，40%腈菌唑和80%代森鋅雖然在100 μg/mL時抑菌率達到100%，但低于100 μg/mL質(zhì)量濃度的處理其抑菌率均不理想。其余4種化學殺菌劑所有質(zhì)量濃度處理下都有一定的菌絲長出。

2.2 10種化學殺菌劑毒力回歸方程及半數(shù)有效濃度（EC50）的測定

使用Excel和SPSS軟件對化學殺菌劑濃度的log值（x值）和抑菌率對應的幾率值（y值）進行分析，得出10種化學殺菌劑的毒力回歸方程，以及相關系數(shù)R、EC50值。由表3可見，10種殺菌劑的EC50值相差較明顯，50%甲基硫菌靈的EC50值最小，25 g/L咯菌腈的EC50值最大。10種殺菌劑按照EC50值從小到大的順序依次為50%甲基硫菌靈、75%百菌清、250 g/L丙環(huán)唑、10%苯醚甲環(huán)唑、40%腈菌唑、80%代森鋅、250 g/L吡唑醚菌脂、80%代森錳鋅、250 g/L嘧菌酯、25 g/L咯菌腈。

3 小結(jié)與討論

10種供試化學殺菌劑中，病原菌C. camelliae對50%甲基硫菌靈、75%百菌清、250 g/L丙環(huán)唑、10%苯醚甲環(huán)唑的敏感性較好，這4種化學殺菌劑可作為由C. camelliae引起的茶樹炭疽病的田間防治參考藥劑，而25 g/L咯菌腈、40%腈菌唑、80%代森錳鋅、80%代森鋅、250 g/L嘧菌酯、250 g/L吡唑醚菌酯的抑菌效果不甚理想。在4種抑菌效果較明顯的殺菌劑中，75%百菌清屬于多位點殺菌劑，50%甲基硫菌靈屬于MBC類殺菌劑，250 g/L丙環(huán)唑和10%苯醚甲環(huán)唑?qū)儆贒MI類殺菌劑，同屬于DMI類殺菌劑的40%腈菌唑的抑菌效果雖然低于相同機制的殺菌劑，但明顯優(yōu)于其他類型的殺菌劑。李學俊等[11]對大?？Х炔。–. kahawae）進行了室內(nèi)毒力測定，發(fā)現(xiàn)70%甲基硫菌靈和30%肟菌·戊唑醇可以完全抑制大粒咖啡炭疽病的生長。黃艷花等[12]對紫果西番蓮頂枯病病原菌暹羅炭疽菌（Colletotrichum siamense）進行了室內(nèi)毒力測定，發(fā)現(xiàn)70%甲基硫菌靈對紫果西番蓮頂枯病有較強的毒力。張琳等[13]通過菌絲速率生長法對南瓜炭疽?。–olletotrichum brevisporum）室內(nèi)毒力測定，結(jié)果表明97%多菌靈、97%抑霉唑、96%甲基硫菌靈的毒力較高。結(jié)合本研究的試驗結(jié)果，推斷甲基硫菌靈可能對炭疽菌屬內(nèi)多個種有較好的抑制效果。董金龍[14]對98%甲基硫菌靈、96.5%咪鮮胺、99.8%咯菌腈、95%苯醚甲環(huán)唑、98.1%多菌靈、96%吡唑醚菌酯進行抑菌試驗，發(fā)現(xiàn)99.8%咯菌腈對紅心蓮毀滅炭疽菌（Colletotrichum destructivum）的抑制率最強，而本研究中25 g/L咯菌腈對茶樹炭疽病抑制效果一般，原因可能是咯菌腈對炭疽菌屬內(nèi)不同種的抑制效果有差異[15]。本研究結(jié)果與饒家瑞等[16]的試驗結(jié)果基本一致，70%甲基硫菌靈和10%苯醚甲環(huán)唑在質(zhì)量濃度為100 μg/mL時的抑菌效果均超過了90%。

本研究是在室內(nèi)進行的毒力測定，試驗條件相對可控，然而田間的防治受寄主的生理特性、種植環(huán)境、噴藥時間、天氣、噴藥器材及其他不可預見因素的影響。鑒于此，4種具有較強毒力化學殺菌劑的田間防治效果還需要進一步驗證。

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