李蘭 劉慧

【摘要】 目的 探討不同梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法對(duì)臨床梅毒診斷的價(jià)值差異。方法 選取2020年3月—2022年3月安?？h人民醫(yī)院臨床確診的150例梅毒患者的血清標(biāo)本和110例非梅毒癥患者血清作為研究對(duì)象，采用5種不同方法進(jìn)行檢測(cè)，包括甲苯胺紅不加熱血清實(shí)驗(yàn)（tolulized red unheated serum test，TRUST）、梅毒螺旋體血球凝集實(shí)驗(yàn)（trepomema pallidum hemagglutination?assay，TPHA）、梅毒螺旋體明膠顆粒凝集實(shí)驗(yàn)（treponema pallidum particle agglutination，TPPA）、梅毒酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA）和膠體金法，比較不同方法的檢測(cè)靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值。結(jié)果TPPA、ELISA診斷靈敏度和陰性預(yù)測(cè)值顯著高于TRUST、TPHA、膠體金法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；TRUST診斷特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值顯著低于TPHA、TPPA、ELISA、膠體金法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 采用TPPA法和ELISA法對(duì)梅毒進(jìn)行篩查，一般采用ELISA法和TRUST法進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)，可進(jìn)一步提高陽(yáng)性檢出率。

【關(guān)鍵詞】 梅毒；血清學(xué)檢測(cè)；甲苯胺紅不加熱血清實(shí)驗(yàn)；酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)

文章編號(hào)：1672-1721（2024）16-0064-03? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A? ? ?中國(guó)圖書(shū)分類號(hào)：R446.61

梅毒是由蒼白密螺旋體蒼白亞種所引發(fā)的性傳染疾病。近年來(lái)，我國(guó)梅毒疾病發(fā)病率逐漸上升，嚴(yán)重影響人們健康[1]。當(dāng)前臨床診斷梅毒螺旋體感染的主要方法是檢測(cè)感染者中的梅毒抗體。梅毒抗體檢測(cè)可用于患者診斷，并作為手術(shù)前常規(guī)檢查和輸液前檢查的重要參考。目前臨床一般采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)、間接凝集實(shí)驗(yàn)和甲苯胺紅不加熱血清實(shí)驗(yàn)3種方法檢測(cè)梅毒抗體。由于不同方法及檢測(cè)的靈敏度、特異度和實(shí)驗(yàn)條件存在差異，梅毒感染過(guò)程中形成的非特異性抗體以及特異性抗體含量也存在差異，不同檢測(cè)結(jié)果之間存在差異，給檢驗(yàn)人員帶來(lái)一定難度。為確保臨床檢驗(yàn)的準(zhǔn)確度，防止出現(xiàn)假陰性或假陽(yáng)性結(jié)果，要求檢驗(yàn)人員選擇全面、敏感、準(zhǔn)確的聯(lián)合檢測(cè)法用于梅毒臨床預(yù)防以及診療過(guò)程中。對(duì)于梅毒檢測(cè)，血清學(xué)檢驗(yàn)是臨床診斷依據(jù)，也是當(dāng)前使用較多的方法。本研究采用5種不同的血清學(xué)檢驗(yàn)方法對(duì)260例患者血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，比較不同方法檢測(cè)靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值，報(bào)告如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2020年3月—2022年3月安?？h人民醫(yī)院臨床確診的150例梅毒患者的血清標(biāo)本和110例非梅毒癥患者的血清標(biāo)本作為研究對(duì)象，標(biāo)本均來(lái)源于醫(yī)院性病科門診且診斷符合國(guó)標(biāo)梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)以及相關(guān)處理原則。150例梅毒患者中，46例為一期癥狀，104例為二期癥狀。110例非梅毒患者中，16例為系統(tǒng)性紅斑狼瘡癥狀，30例為肝炎患者，15例為腫瘤患者，8例為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者，11例為孕婦，10例為腦血栓，20人為健康人群。

1.2 方法

所有受檢人員在空腹?fàn)顟B(tài)下抽取肘部靜脈血3～

5 mL置入抗凝管，以3 000 r/min速度分離血清，將血清置于-20 ℃保存。TRUST試劑由上海榮盛生物公司提供，TPHA試劑由日本富士株式會(huì)社提供以，TPPA試劑由廈門新創(chuàng)科技公司提供，膠體金試劑由杭州艾康生物技術(shù)有限公司所提供。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作、檢驗(yàn)。本次實(shí)驗(yàn)使用的儀器設(shè)備包括酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、離心機(jī)、隔水式電熱恒溫箱、梅毒震蕩儀。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 5種檢測(cè)方法的結(jié)果

TRUST檢測(cè)，真陽(yáng)性患者129例，假陽(yáng)性患者15例，假陰性患者21例，真陰性患者95例。用TPHA檢測(cè)，真陽(yáng)性患者137例，假陽(yáng)性患者4例，假陰性患者13例，真陰性患者106例。TPPA檢測(cè)，真陽(yáng)性患者146例，假陽(yáng)性患者2例，假陰性患者4例，真陰性患者108例。ELISA檢測(cè)，真陽(yáng)性患者149例，假陽(yáng)性患者2例，假陰性患者1例，真陰性患者108例。膠體金法檢測(cè)，真陽(yáng)性患者134例，假陽(yáng)性患者3例，假陰性患者16例，真陰性患者107例。

2.2 5種檢測(cè)方法的效能分析

靈敏度=真陽(yáng)性例數(shù)/（真陽(yáng)性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù)）×100%。TRUST診斷靈敏度為86.0%，TPHA診斷靈敏度為91.3%，TPPA診斷靈敏度為97.3%%，ELISA診斷靈敏度為99.3%，膠體金法診斷靈敏度為89.3%。

特異度=真陰性例數(shù)/（假陽(yáng)性例數(shù)+ 真陰性例數(shù)）×100%。TRUST診斷特異度為85.5%，TPHA診斷特異度為96.4%，TPPA診斷特異度為98.2%，ELISA診斷特異度為98.2%%，膠體金法診斷特異度為97.3%。

TPPA、ELISA診斷靈敏度和陰性預(yù)測(cè)值顯著高于TRUST、TPHA、膠體金法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；TRUST診斷特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值顯著低于TPHA、TPPA、ELISA、膠體金法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。

3 討論

機(jī)體感染梅毒螺旋體后，能夠形成特異性抗螺旋體抗體以及非特異性抗類脂質(zhì)抗體。相對(duì)來(lái)說(shuō)，TRUST是一種非特異性血清學(xué)檢測(cè)方法，該方法采用牛心提取膽固醇、心磷脂、卵磷脂構(gòu)成的抗原，將抗原懸在含有一定甲苯胺紅溶液中用于檢測(cè)血清或者血漿反應(yīng)素，是非特異性梅毒篩查的重要實(shí)驗(yàn)方法。一般條件下，TRUST可于4周檢出病毒，對(duì)于一期梅毒檢測(cè)率比較低[2]。本研究中，TRUST對(duì)于梅毒檢出率可達(dá)86%，部分抗體為非梅毒患者特有，腫瘤、肝炎、腦血栓、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等患者均會(huì)存在TRUST檢測(cè)假陽(yáng)性，甚至在正常人群中也會(huì)出現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果假陽(yáng)性。在本研究中采用TRUST方法進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，假陽(yáng)性達(dá)13.6%。采用TRUST檢測(cè)時(shí)，特異度低于TPHA、ELISA和膠體金法。檢驗(yàn)人員入眼判斷很容易受個(gè)人主觀因素影響，很容易出現(xiàn)結(jié)果的誤判和漏檢。將該方法作為梅毒初篩檢驗(yàn)時(shí)，需考慮該方法的局限性，不能作為梅毒螺旋體感染的唯一篩檢實(shí)驗(yàn)方法。通常篩檢實(shí)驗(yàn)中允許結(jié)果存在假陽(yáng)性，但要求結(jié)果中盡可能無(wú)假陰性。因此，需結(jié)合TP特異性抗體實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)。TRUST檢測(cè)操作相對(duì)便捷，無(wú)需借助其他設(shè)備，具有廣泛推廣應(yīng)用價(jià)值，是臨床疑似患者和血站獻(xiàn)血員篩檢時(shí)所使用的主要方法，可用于梅毒過(guò)篩檢查以及療效滴度分析。

梅毒膠體金法采用免疫膠體金方法和免疫層析法，利用硝酸纖維素中包被特異性梅毒基因重組抗原，進(jìn)一步檢測(cè)標(biāo)本中的特異性抗體，具有直觀、簡(jiǎn)單、快速等特點(diǎn)，但最終檢測(cè)結(jié)果仍面臨假陽(yáng)性和假陰性的問(wèn)題。在本研究中，相對(duì)TRUST來(lái)說(shuō)，采用膠體金試法進(jìn)行檢測(cè)特異度較高，可在5～15 min完成全部標(biāo)本的檢測(cè)，無(wú)需配合其他試劑使用，每條試紙均設(shè)置自身陽(yáng)性質(zhì)控樣，具有特異度較高、靈敏度高等特點(diǎn)。當(dāng)血清樣本中特異性梅毒螺旋體抗體濃度較低時(shí)，采用膠體金法進(jìn)行檢測(cè)會(huì)導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)假陰性。膠體金法檢測(cè)靈敏度較低，為89%。膠體金試劑法檢測(cè)成本較高，無(wú)法適用于大規(guī)模檢測(cè)。

TPPA與TPHA采用梅毒螺旋體毒株制備抗原，用于檢測(cè)患者血清標(biāo)本中梅毒瘤癬體特異性抗體[3]。對(duì)于感染梅毒螺旋體病毒或在臨床治療中，該抗體會(huì)長(zhǎng)時(shí)間在患者體內(nèi)存在甚至終身保留，檢測(cè)結(jié)果不會(huì)隨患者病情發(fā)生顯著變化，對(duì)于不同階段梅毒檢測(cè)結(jié)果具有良好的穩(wěn)定性，因此，可作為梅毒確診的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)于一期梅毒患者診斷時(shí)采用TPPA試劑的靈敏度比TPHA高。TPPA梅毒螺旋體抗原能夠經(jīng)過(guò)高度轉(zhuǎn)化減少兔睪丸提取物以及兔血清吸收，減少抗原損耗，將抗原提取之后，相同包被面積凝膠顆粒相比紅細(xì)胞包被具有較多抗原。TPPA檢測(cè)方法靈敏度較高，但經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)血球自溶，導(dǎo)致結(jié)果存在假陰性的問(wèn)題。TPPA明膠顆粒經(jīng)過(guò)活化之后，可置于4 ℃冰箱保存1個(gè)月，相對(duì)TPHA等試劑來(lái)說(shuō)，保存時(shí)間較長(zhǎng)，能夠避免試劑被浪費(fèi)。采用TPPA檢測(cè)時(shí)，操作中無(wú)需進(jìn)行血清吸收等待，無(wú)需借助其他的設(shè)備，檢測(cè)人員可在2 h獲取檢測(cè)結(jié)果，但檢測(cè)結(jié)果需要依靠檢測(cè)人員判斷，存在一定的主觀性。對(duì)于弱陽(yáng)性標(biāo)本來(lái)說(shuō)，可能存在漏檢問(wèn)題。該方法檢測(cè)無(wú)法保存原有數(shù)據(jù)，檢測(cè)時(shí)需要將樣本進(jìn)行梯度稀釋，不適合大批量樣本篩查。

ELISA采用基因重組工程進(jìn)行抗原合成，檢測(cè)患者血清標(biāo)本中梅毒特異性抗體的存在，對(duì)于梅毒不同階段均存在較高特異度和靈敏度，可達(dá)到99%[4]，與本研究結(jié)果一致。本研究采用ELISA進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí)出現(xiàn)1例假陰性，主要是因?yàn)榛颊邽槊范靖腥驹缙冢颊哐鍢?biāo)本中梅毒螺旋體特異性抗體含量明顯低于檢測(cè)限制，影響最終檢驗(yàn)檢出率。該病例采用其他方法進(jìn)行檢測(cè)時(shí)均為陰性，經(jīng)過(guò)2周跟蹤復(fù)查之后轉(zhuǎn)為陽(yáng)性。相對(duì)來(lái)說(shuō)，ELISA可用于大規(guī)模梅毒血清學(xué)檢測(cè)篩查以及臨床診斷中，操作方法相對(duì)簡(jiǎn)單，成本低，結(jié)果準(zhǔn)確，也可用于全自動(dòng)化酶免系統(tǒng)檢測(cè)中，易于保存原始資料。該方法可用于大批量梅毒血清學(xué)檢測(cè)以及質(zhì)控實(shí)驗(yàn)，可將其與血站自動(dòng)化檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行有效連接，保存相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，符合自動(dòng)化微機(jī)管理相關(guān)需要。

進(jìn)行梅毒血清學(xué)檢測(cè)時(shí)，如果抗體濃度較高，采用ELISA檢測(cè)會(huì)出現(xiàn)不良反應(yīng)。采用TRUST進(jìn)行檢測(cè)時(shí)結(jié)果為陽(yáng)性，而采用ELISA進(jìn)行檢測(cè)時(shí)需稀釋標(biāo)本重新測(cè)定。在這一過(guò)程中，由于患者自身原因以及多種試劑因素，在梅毒血清血液實(shí)驗(yàn)中會(huì)存在一定的假陽(yáng)性。尤其對(duì)于老齡患者來(lái)說(shuō)，假陽(yáng)性概率較高。對(duì)于陽(yáng)性結(jié)果，需綜合分析患者的病史以及臨床癥狀。在梅毒血清反應(yīng)過(guò)程中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性，主要是技術(shù)性假陽(yáng)性（抗原具有較高敏感性、血性標(biāo)本弄錯(cuò)或者出現(xiàn)細(xì)菌感染、溶血、檢驗(yàn)人員技術(shù)不熟練等）、生物學(xué)假陽(yáng)性。通常非螺旋體抗原血清實(shí)驗(yàn)結(jié)果的假陽(yáng)性會(huì)高于螺旋體抗原血清實(shí)驗(yàn)，主要由于前者所檢測(cè)的是患者的反應(yīng)素，后者檢測(cè)抗梅毒螺旋體抗體，由于非螺旋體實(shí)驗(yàn)抗原存在于其他組織，疾病也會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)的反應(yīng)素，對(duì)于梅毒來(lái)說(shuō)被稱為是假陽(yáng)性反應(yīng)。對(duì)于梅毒血清反應(yīng)的假陰性，一期階段梅毒硬下疳，通常假陰性疳出現(xiàn)在患者梅毒發(fā)生的2～3周，患者機(jī)體會(huì)出現(xiàn)反應(yīng)素，早期血清呈陰性，感染梅毒之后需立即開(kāi)展治療，由于血清中反應(yīng)素濃度較低，會(huì)出現(xiàn)陰性。二期階段梅毒患者血清未稀釋時(shí)仍呈弱陽(yáng)性或陰性，而高度稀釋之后結(jié)果呈陽(yáng)性，也被稱為前帶現(xiàn)象，主要由于血清中含有較多的抗心磷脂抗體，抑制陽(yáng)性反應(yīng)。

郭妍等[5]對(duì)梅毒酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)，即ELISAe、甲TRUST和TPPA 3種方法進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，采用TP-ELISA進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，對(duì)于早期梅毒患者的陽(yáng)性率達(dá)83%，其中一期、二期、三期梅毒陽(yáng)性率分別為100%、100%、100%，合計(jì)陽(yáng)性率達(dá)96.8%，檢測(cè)靈敏度為96.8%；采用TPPA進(jìn)行早期梅毒檢測(cè)時(shí)，陽(yáng)性率達(dá)91.7%，其中一期、二期、三期梅毒陽(yáng)性率分別為100%、100%和100%，合計(jì)陽(yáng)性率達(dá)98.4%，檢測(cè)靈敏度為98.4%。采用TRUST進(jìn)行早期梅毒檢測(cè)時(shí)，陽(yáng)性率為58.3%，其中一期、二期、三期梅毒陽(yáng)性率分別為71.4%、95%和77.8%，合計(jì)陽(yáng)性率達(dá)77.4%，檢測(cè)靈敏度為77.4%。結(jié)合該項(xiàng)研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，采用TRUST進(jìn)行測(cè)試對(duì)早期梅毒、一期梅毒陽(yáng)性檢出率明顯低于TPPA和TP-ELISA的檢出率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；對(duì)梅毒檢測(cè)陽(yáng)性率較高的是TPPA；3種方法對(duì)二期梅毒陽(yáng)性檢出率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

人體在感染梅毒螺旋體之后會(huì)形成多異性以及非特異性抗體。相對(duì)特異性抗體來(lái)說(shuō)，非特異性抗體出現(xiàn)時(shí)間較晚。TRUST檢測(cè)的是類脂質(zhì)抗體，也就是反應(yīng)速度。非特異性抗體對(duì)于梅毒感染不同時(shí)間檢出率或存在較大差異。在初期梅毒感染的4周內(nèi)，患者機(jī)體形成的反應(yīng)素不足，采用TRUST進(jìn)行檢測(cè)通常結(jié)果為陰性?；颊咴诟腥?周之后，其陽(yáng)性率會(huì)逐漸提高至10%～30%；患者在感染6～8周后，感染率達(dá)到100%；經(jīng)過(guò)治療之后，三期梅毒反應(yīng)素有一定程度降低，有25%會(huì)轉(zhuǎn)為陰性；二期梅毒患者血清反應(yīng)素效價(jià)比較高，二期梅毒患者檢測(cè)的血清陽(yáng)性率較高。TRUST可用于二期梅毒血清學(xué)檢測(cè)。TRUST在檢測(cè)時(shí)特異度和靈敏度明顯低于ELISA，很容易導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)假陰性，影響醫(yī)護(hù)人員的判斷，延誤臨床治療。單獨(dú)采用該方法容易導(dǎo)致患者出現(xiàn)漏診和誤診。研究發(fā)現(xiàn)，TPPA與ELISA檢測(cè)梅毒特異性抗體，對(duì)于不同階段梅毒具有較高特異度和靈敏度，抗梅毒螺旋體抗體經(jīng)過(guò)抗病毒治療之后仍會(huì)顯示結(jié)果陽(yáng)性，甚至在患者體內(nèi)長(zhǎng)期存在。ELISA陽(yáng)性檢出率達(dá)99.3%，檢測(cè)速度較快，結(jié)果靈敏度高，可用于大批量梅毒檢測(cè)中。臨床進(jìn)行梅毒螺旋體感染確診時(shí)，可采用ELISA進(jìn)行陽(yáng)性標(biāo)本檢測(cè)，之后采用TPPA進(jìn)行結(jié)果確認(rèn)，能夠排除結(jié)果假陰性和假陰性的問(wèn)題。結(jié)合現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)，感染梅毒螺旋體之后，患者機(jī)體會(huì)產(chǎn)生不同抗體，其中一期、二期、三期梅毒抗體分別為IgM型 、IgM型以及IgG型，采用TPPA進(jìn)行檢測(cè)是比較合適的。

綜上所述，采用TRUST方法進(jìn)行檢測(cè)，主要針對(duì)梅毒非特異性抗體，該方法無(wú)法適用于梅毒臨床診斷治療，可用于梅毒篩查以及二期梅毒檢測(cè)患者病情判斷，可作為抗梅毒治療效果分析預(yù)后判斷。TPPA與ELISA檢測(cè)梅毒特異性抗體，無(wú)法進(jìn)行梅毒病情判斷，可作為患者確診實(shí)驗(yàn)判斷，對(duì)不同階段梅毒檢出率較高，尤其對(duì)于晩期和潛伏期梅毒患者來(lái)說(shuō)，具有較高的靈敏度。由于梅毒抗體檢測(cè)方法實(shí)驗(yàn)條件、特異度和靈敏度不同，需選擇非特異性抗體與特異性抗體聯(lián)合方法進(jìn)行檢測(cè)，以判斷酶毒不同階段的抗體以及對(duì)應(yīng)的效價(jià)，有利于梅毒臨床診斷以及患者病情觀察，進(jìn)一步提高陽(yáng)性結(jié)果檢測(cè)率。臨床醫(yī)護(hù)人員在患者病情診斷過(guò)程中，除需要考慮檢測(cè)結(jié)果之外，還需要綜合患者的癥狀病史以及體征指標(biāo)進(jìn)行判斷。

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