袁小多 宋冬梅 謝海珍 袁珊珊 饒海琴
【摘要】 目的 分析對(duì)比膠體層析法與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)篩查人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)抗體在艾滋病中的診斷價(jià)值。方法 選取2019年1月—2022年12月于高安市疾病預(yù)防控制中心行艾滋病篩查的13 777人為研究對(duì)象,采集研究對(duì)象的空腹靜脈血,對(duì)空腹靜脈血均施以膠體層析法、ELISA與免疫印跡法行HIV抗體檢測(cè),以免疫印跡法為檢查的“金標(biāo)準(zhǔn)”,統(tǒng)計(jì)對(duì)比膠體層析法、ELISA在艾滋病中的診斷效能。結(jié)果 13 777名行艾滋病篩查檢測(cè)人員中,免疫印跡法共檢測(cè)出37例HIV抗體陽(yáng)性,ELISA共檢測(cè)出36例HIV抗體陽(yáng)性,膠體層析法共檢查出29例HIV抗體陽(yáng)性;以免疫印跡法為檢查的“金標(biāo)準(zhǔn)”,ELISA檢測(cè)的靈敏度為94.59%(35/37)、準(zhǔn)確度為99.98%[(35+13 739)/13 777]、陰性預(yù)測(cè)值為99.99%(13 739/13 741),高于膠體層析法的72.97%(27/37)、99.91%[(27+13 738)/13 777]、99.93%(13 738/13 748),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);二者的特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。Kappa檢驗(yàn)顯示,ELISA檢查艾滋病的結(jié)果與“金標(biāo)準(zhǔn)”檢查結(jié)果的一致性極好(Kappa值=0.959,P<0.001)。結(jié)論 與膠體層析法相比,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)?zāi)軌蚋行?/p>
地檢查出陽(yáng)性HIV抗體,進(jìn)而提高艾滋病的早期診斷率,臨床應(yīng)用價(jià)值較高,值得推廣應(yīng)用。
【關(guān)鍵詞】 艾滋病;人類免疫缺陷病毒抗體;膠體層析法;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
文章編號(hào):1672-1721(2024)05-0107-03? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A? ? ?中國(guó)圖書分類號(hào):R446
艾滋病是因HIV感染而誘發(fā)的機(jī)體免疫功能缺陷。未經(jīng)治療的患者在疾病晚期易并發(fā)各種嚴(yán)重感染與惡性腫瘤,最終導(dǎo)致死亡[1-2]。艾滋病為臨床常見(jiàn)的傳染病,該病的傳播途徑以性接觸傳播較為多見(jiàn),尤其是男性與男性之間的同性性傳播[3-4]?,F(xiàn)階段,臨床對(duì)于艾滋病尚無(wú)有效的治療措施,病死率較高,嚴(yán)重阻礙人類社會(huì)的發(fā)展。因此,對(duì)高危群體施以及時(shí)篩查,盡早判斷他們是否出現(xiàn)HIV感染,以指導(dǎo)臨床施以個(gè)體化的治療措施,對(duì)于控制艾滋病患者的病情進(jìn)展、延長(zhǎng)其生存周期與控制艾滋病流行態(tài)勢(shì)至關(guān)重要[5]。HIV抗體測(cè)定結(jié)果為艾滋病患者的重要診斷依據(jù),現(xiàn)階段臨床檢測(cè)HIV抗體的措施具有多樣性,如膠體層析法、ELISA等,但何種方法對(duì)HIV抗體檢查診斷效果更好還需進(jìn)一步探究。基于此,本研究以2019年1月—2022年12月于高安市疾病預(yù)防控制中心行艾滋病篩查的13 777人為研究對(duì)象,以免疫印跡法為檢查的“金標(biāo)準(zhǔn)”,分析對(duì)比膠體層析法、ELISA的具體診斷效能,報(bào)告如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料
選取2019年1月—2022年12月于高安市疾病預(yù)防控制中心行艾滋病篩查的13 777人為研究對(duì)象,所有研究對(duì)象中男性7 964人,女性5 813人;年齡31~62歲,平均年齡(48.75±2.49)歲;文化程度,小學(xué)2 789人,中學(xué)8 637人,專科及以上2 351人;體質(zhì)量指數(shù)18.4~27.1 kg/m2,平均體質(zhì)量指數(shù)(25.16±0.48)kg/m2。研究對(duì)象均對(duì)本研究知曉,并自愿簽訂知情同意書。
納入標(biāo)準(zhǔn):娛樂(lè)場(chǎng)所從業(yè)人員;無(wú)肺結(jié)核等其他傳染性疾病;研究對(duì)象均具有較為優(yōu)良的依從性;性伴侶較多。
排除標(biāo)準(zhǔn):存在精神疾病者;合并全身性感染者;伴有凝血功能、免疫系統(tǒng)異常者;存在血液系統(tǒng)疾病者;肝腎等臟器功能重度受損者;意識(shí)障礙,無(wú)法行正常交流者;已在進(jìn)行免疫治療者;合并嚴(yán)重的腦器質(zhì)性疾病者。
1.2 方法
標(biāo)本采集:所有研究對(duì)象入院后,采集研究對(duì)象次日清晨晨起時(shí)的5 mL靜脈血儲(chǔ)存于無(wú)菌試管中,對(duì)血液標(biāo)本行離心處理,速率為3 000 r/min,離心10 min,取得分離血清后,即刻送檢或者放于-80 ℃環(huán)境下待檢。
檢測(cè)方法:(1)ELISA。選擇抗原為HIV1-2抗原包被的96孔微孔板,并對(duì)標(biāo)本行編號(hào)存儲(chǔ)以選取與之相對(duì)的加樣孔開(kāi)展檢測(cè);每份標(biāo)本在復(fù)溶后加樣100 μL;封板后在37 ℃條件下行1 h的孵育;以自動(dòng)洗板機(jī)(深圳市匯松科技有限公司,型號(hào)為P10-960,出廠編號(hào)A22004004)行洗板,連續(xù)開(kāi)展6次,在標(biāo)本干燥后于每個(gè)反應(yīng)孔中放入100 μL底物,行避光反應(yīng)15 min,然后在各反應(yīng)孔中放入50 μL終止液以終止反應(yīng);以自動(dòng)酶標(biāo)儀[安圖實(shí)驗(yàn)儀器(鄭州)有限公司,型號(hào)PHOMO,出廠編號(hào)3011002410]行吸光度檢測(cè),波長(zhǎng)設(shè)定為450 mm。檢測(cè)人員以ELISA相關(guān)參考值作為參照,對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)判。將空白孔數(shù)據(jù)調(diào)節(jié)為0,測(cè)定每孔的吸光度(optical density,OD)值,以O(shè)D值作為抗體水平,OD值>截?cái)嘀怠?判定為陽(yáng)性,相反則為陰性。(2)膠體層析法。將50 μL復(fù)溶后的血液標(biāo)本放入試劑卡加樣處,以免疫層析原理開(kāi)展測(cè)定;加樣之后放置15 min,待標(biāo)本中存在HIV1+2抗體時(shí),鼠膠體-抗原會(huì)同HIV1+2抗體結(jié)合,出現(xiàn)抗原重組情況,且會(huì)被固相包被,以此產(chǎn)生紅線;待1 h后由檢測(cè)醫(yī)師讀取結(jié)果。檢測(cè)區(qū)、對(duì)照區(qū)均存在紫紅色條帶為陽(yáng)性,僅對(duì)照區(qū)存在紫紅色條帶為陰性。(3)免疫印跡法。復(fù)溶后對(duì)血清以1∶100占比行稀釋處理,將稀釋后樣本加入到硝酸纖維素膜上,于37 ℃條件下震蕩。當(dāng)血清與膜條包被的HIV1+2條帶相互結(jié)合時(shí),表明血清內(nèi)具有HIV1+2抗體。此時(shí)檢測(cè)醫(yī)師再加入BCIP/NBT底物,發(fā)生紫褐色產(chǎn)色反應(yīng)。至少2條膜帶與p24帶同時(shí)出現(xiàn)為陽(yáng)性,未見(jiàn)HIV抗體特異性條帶為陰性。全部檢測(cè)操作均嚴(yán)格依據(jù)相應(yīng)說(shuō)明書開(kāi)展,持續(xù)進(jìn)行7次,以保障檢測(cè)結(jié)果的可信度。
1.3 觀察指標(biāo)
分析對(duì)比膠體層析法、ELISA在艾滋病中的診斷效能,以免疫印跡法為檢查“金標(biāo)準(zhǔn)”。陰性預(yù)測(cè)值=真陰性/(假陰性+真陰性)×100%。特異度=真陰性/(真陰性+假陽(yáng)性)×100%。準(zhǔn)確度=(真陽(yáng)性+真陰性)例數(shù)/總例數(shù)×100%。靈敏度=真陽(yáng)性/(真陽(yáng)性+假陰性)×100%。陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=真陽(yáng)性/(真陽(yáng)性+假陽(yáng)性)×100%。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)本次研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,計(jì)數(shù)資料以百分比表示,行χ2檢驗(yàn),計(jì)量資料以x±s表示,行t檢驗(yàn),一致性以Kappa檢驗(yàn)(Kappa值>0.75表明一致性極好,Kappa值0.40~0.75表明一致性較為理想,Kappa值<0.40表明一致性差),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
13 777名研究對(duì)象內(nèi),免疫印跡法共檢測(cè)出37例HIV抗體陽(yáng)性,ELISA共檢測(cè)出36例HIV抗體陽(yáng)性,膠體層析法共檢測(cè)出29例HIV抗體陽(yáng)性;以免疫印跡法為檢查的“金標(biāo)準(zhǔn)”,ELISA檢測(cè)的靈敏度、準(zhǔn)確度、陰性預(yù)測(cè)值高于膠體層析法法,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);二者的特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。Kappa檢驗(yàn)顯示,ELISA檢查艾滋病的結(jié)果與“金標(biāo)準(zhǔn)”檢查結(jié)果的一致性極好(Kappa值=0.959,P<0.001)。膠體層析法、ELISA在艾滋病中的檢出情況和診斷效能見(jiàn)表1、表2。
3 討論
艾滋病為臨床常見(jiàn)的傳染病之一[6]。近年來(lái),因人們性觀念的開(kāi)放,艾滋病的患病人數(shù)呈逐年上升趨勢(shì)。該病的病死率較高,艾滋病是15~49歲人群的主要致死疾病之一[7]。HIV感染是艾滋病的唯一病因。HIV感染者可數(shù)年不出現(xiàn)特異性表現(xiàn),而一旦出現(xiàn)明顯臨床癥狀則極可能已處在伴發(fā)嚴(yán)重感染與腫瘤時(shí)期,進(jìn)而對(duì)患者的生命安全造成威脅[8-9]。因此,對(duì)艾滋病高危人群進(jìn)行定期的HIV抗體檢查,對(duì)于控制患者病情、病毒傳播具有重要作用。
HIV抗體檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確與否與患者的治療和預(yù)后具有緊密聯(lián)系,選取迅速有效的HIV抗體檢測(cè)方法提升HIV抗體的檢出精準(zhǔn)度至關(guān)重要。免疫印跡法為目前臨床檢查HIV抗體的“金標(biāo)準(zhǔn)”,存在較高的檢測(cè)準(zhǔn)確度、靈敏度,但該方法檢查所需費(fèi)用較高,無(wú)法作為大范圍的HIV抗體篩查常規(guī)措施,故臨床運(yùn)用較為受限。因此,尋找一種更為快速、簡(jiǎn)便的檢查措施成為臨床HIV抗體檢測(cè)的重點(diǎn)。膠體層析法為HIV抗體初篩的常用檢測(cè)手段,是一種運(yùn)用HIV抗體與硒膠體-抗原結(jié)合后被合成肽、重組抗原捕捉固定、顯色的原理,以測(cè)定HIV抗體的檢查方法,具有檢查費(fèi)用低、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)勢(shì),然而這種方法對(duì)于脂血、溶血標(biāo)本的測(cè)定會(huì)影響結(jié)果的判讀,故無(wú)法滿足臨床所需。
本研究結(jié)果顯示,13 777名行艾滋病篩查檢測(cè)人員內(nèi),免疫印跡法共檢測(cè)出37例HIV抗體陽(yáng)性,ELISA共檢測(cè)出36例HIV抗體陽(yáng)性,膠體層析法共檢查出29例HIV抗體陽(yáng)性。以免疫印跡法為檢查的“金標(biāo)準(zhǔn)”,ELISA檢測(cè)的靈敏度為94.59%(35/37)、準(zhǔn)確度為99.98%[(35+13 739)/13 777]、陰性預(yù)測(cè)值為99.99%(13 739/13 741),高于膠體層析法法的72.97%(27/37)、99.91%[(27+13 738)/13 777]、99.93%(13 738/13 748)。Kappa檢驗(yàn)顯示,ELISA檢查艾滋病的結(jié)果與“金標(biāo)準(zhǔn)”檢查結(jié)果的一致性極好(Kappa值=0.959,P<0.001),提示ELISA在HIV抗體篩查中效果顯著,可提高疾病的檢出準(zhǔn)確度。分析原因?yàn)镋LISA可通過(guò)酶催化底物反應(yīng)的放大效應(yīng)提高抗原抗體反應(yīng)的靈敏度,進(jìn)而提升HIV抗體陽(yáng)性檢出精準(zhǔn)性[10-11]。ELISA具有優(yōu)良的穩(wěn)定性,不受標(biāo)本的脂血、溶血等干擾,無(wú)需采取特殊設(shè)備開(kāi)展檢查,于室溫下即可操作,且一次性能夠測(cè)定多份樣本,并經(jīng)酶標(biāo)儀讀取數(shù)據(jù),盡可能減小溫度、標(biāo)本處理等對(duì)檢查結(jié)果的影響。ELISA不僅可用于少量的HIV抗體檢查,還可運(yùn)用于批量樣本檢查,其檢查結(jié)果更為客觀、準(zhǔn)確[12]。ELISA檢查的窗口期較短,有助于臨床及時(shí)發(fā)現(xiàn)HIV早期感染。
綜上所述,相較于膠體層析法,ELISA在HIV抗體的篩查中效果更為顯著,可有效提高HIV抗體陽(yáng)性檢出率,有利于指導(dǎo)臨床及時(shí)制定針對(duì)性的治療措施,繼而更有效控制艾滋病進(jìn)程,抑制疾病的傳播,臨床應(yīng)用價(jià)值較高。
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(編輯:肖宇琦)
作者簡(jiǎn)介:袁小多,女,本科,主管技師。