徐柯楠,劉 靜,夏 麗,周 平,楊海龍

衡水市人民醫(yī)院胸外科,河北衡水 053000

非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)是導(dǎo)致肺癌的主要危險(xiǎn)因素,數(shù)據(jù)顯示其發(fā)病率為80%至85%,是全球癌癥相關(guān)死亡的主要原因之一[1]。手術(shù)、化療、放療是NSCLC治療的常規(guī)方式。由于耐藥和腫瘤轉(zhuǎn)移,NSCLC患者的5年生存率仍然很低,尤其是晚期患者[2-3]。雖然NSCLC的診斷和治療取得了很大進(jìn)展,但預(yù)后仍然較差。因此,需要確定有效的生物標(biāo)志物來預(yù)測(cè)NSCLC的進(jìn)展和預(yù)后,從而推動(dòng)其他靶向治療的進(jìn)展。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA)是一種長(zhǎng)度超過200 nt的非編碼RNA。lncRNA在癌癥的發(fā)展過程中充當(dāng)腫瘤誘導(dǎo)劑或抑制劑,已發(fā)現(xiàn)LINC_00355在膀胱移行細(xì)胞癌中高表達(dá)[4],LINC_00355參與競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源性RNA(ceRNA)網(wǎng)絡(luò)的調(diào)控,并在結(jié)直腸癌的多個(gè)病理階段差異表達(dá),先前的研究結(jié)果表明LINC_00355在癌癥發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用[5]。然而,LINC_00355是否在肺癌的發(fā)展中發(fā)揮作用仍然未知。lncRNA可以通過競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合microRNA(miRNA)來調(diào)控靶基因的表達(dá),研究發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)LINC_00355在肝癌中高表達(dá),LINC_00355通過與miR-195競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖和集落形成,抑制細(xì)胞周期停滯和凋亡[6-7];LINC_00355作為miR-195海綿通過增加同源框A10表達(dá)來增強(qiáng)頭頸部鱗狀細(xì)胞癌(HNSCC)細(xì)胞的活力、侵襲、遷移和抑制細(xì)胞凋亡[8]。本研究擬探討lncRNALINC_00355在肺癌中的作用,探索LINC_00355通過調(diào)節(jié)miRNA/mRNA軸參與肺癌的發(fā)展的機(jī)制,以期為肺癌的發(fā)病機(jī)制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1細(xì)胞來源 人NSCLC細(xì)胞系A(chǔ)549購(gòu)自美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)。

1.2儀器與試劑 MTT溶液(默克公司),Annexin V-FITC,碘化丙啶(BioLegend公司),PYr-MirTarget螢光素酶載體(Ambion公司),小鼠單克隆抗人PHF19(1∶1 000,Santa Cruz公司),小鼠單克隆抗人GAPDH(1∶5 000,Santa Cruz公司),HRP綴合的山羊抗小鼠IgG(1∶5 000,Santa Cruz公司),轉(zhuǎn)染試劑HiPerFect Transfection Reagent(Qiagen公司),實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)檢測(cè)試劑購(gòu)自BioRad公司。由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司設(shè)計(jì)和合成引物。FACScan流式細(xì)胞儀(美國(guó)BD公司),Eclipse Ti-U倒置顯微鏡(日本奧林巴斯公司),NanoDrop紫外分光光度計(jì)(Thermo Scientific公司),Realplex4 Mastercycler PCR儀(Eppendorf公司),BioRad成像系統(tǒng)(BioRad公司)。

1.3.1細(xì)胞培養(yǎng) 所有細(xì)胞均在添加了10%胎牛血清(FBS)的Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基中培養(yǎng),培養(yǎng)環(huán)境為37 ℃、5%CO2,根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)速度,使用胰蛋白酶-EDTA進(jìn)行細(xì)胞消化后傳代。

1.3.2細(xì)胞分組及處理 將細(xì)胞分為A549肺癌細(xì)胞組、lncRNA-NC組、LINC_00355 mimics組、LINC_00355 inhibitor組,進(jìn)行不同處理后用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。A549肺癌細(xì)胞組:不進(jìn)行任何處理;lncRNA-NC組:加入空白載體;LINC_00355 mimics組:加入LINC_00355過表達(dá)載體;LINC_00355 inhibitor組:加入LINC_00355低表達(dá)載體。A549細(xì)胞用于轉(zhuǎn)染時(shí),按照試劑說明書使用轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。使用qPCR評(píng)估轉(zhuǎn)染效率,轉(zhuǎn)染72 h后采用qPCR檢測(cè)LINC_00355表達(dá),各組設(shè)6個(gè)平行檢測(cè)標(biāo)本,培養(yǎng)72 h。

1.3.3肺癌細(xì)胞A549細(xì)胞活力的MTT法檢測(cè)及癌細(xì)胞單克隆形成數(shù)檢測(cè) 轉(zhuǎn)染72 h后使用MTT分析細(xì)胞細(xì)胞活力。將細(xì)胞以每孔3 000個(gè)細(xì)胞的密度接種在96孔板中。維持72 h后,每孔加入20 μL MTT,37 ℃ 孵育4 h。然后,去除培養(yǎng)基,每孔加入150 μL二甲基亞砜(DMSO),搖勻后,使用多孔板讀數(shù)器在490 nm處測(cè)量吸光度(A)值。每個(gè)實(shí)驗(yàn)一式3份進(jìn)行5次重復(fù),并計(jì)算平均值作為最終結(jié)果。測(cè)量每個(gè)孔的A值。將各組肺癌細(xì)胞A549用0.25%胰蛋白酶消化成單細(xì)胞,并以4×105細(xì)胞個(gè)細(xì)胞/孔的密度接種到6孔培養(yǎng)板中,24 h后,將50個(gè)細(xì)胞接種于6孔組織培養(yǎng)板中,繼續(xù)培養(yǎng)2周。然后將細(xì)胞用結(jié)晶紫-福爾馬林溶液染色10 min并計(jì)數(shù)。

1.3.4肺癌細(xì)胞A549凋亡率測(cè)定 轉(zhuǎn)染72 h后收獲細(xì)胞,將細(xì)胞置于6孔板中,密度為4×105個(gè)細(xì)胞/孔,AnnexinV-FITC(5 μL)和碘化丙啶(PI,10 μL) 處理,采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè),計(jì)算凋亡細(xì)胞的百分率。

1.3.5肺癌細(xì)胞A549侵襲遷移水平測(cè)定 使用包含聚碳酸酯膜的Boyden室進(jìn)行侵襲測(cè)定。培養(yǎng)結(jié)束細(xì)胞重懸于無血清培養(yǎng)基中,在6孔板(5×104)中孵育24 h(孵育后細(xì)胞第2天用一層培養(yǎng)板覆蓋)。在室溫下孵育24 h后,用200 μL無菌移液器吸頭刮擦細(xì)胞并用PBS洗滌3次。觀察細(xì)胞遷移,并使用光學(xué)顯微鏡拍攝圖像。

1.3.6螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè) 通過生物信息學(xué)網(wǎng)站(www.Targetscan.org)檢索,初步確定LINC_00355與miR-15a-5p,miR-15a-5p與PHF19是否有潛在的結(jié)合位點(diǎn)。為了構(gòu)建螢光素酶報(bào)告載體,通過PCR擴(kuò)增含有預(yù)測(cè)的潛在LINC_00355結(jié)合位點(diǎn)的miR-15a-5p cDNA片段的3′-UTR,并亞克隆到PYr-MirTarget螢光素酶載體中的螢光素酶基因的下游。螢光素酶活性測(cè)定:A549細(xì)胞在24孔板中培養(yǎng),與50 ng含有螢火蟲螢光素酶的相應(yīng)載體以及25 ng LINC_00355或?qū)φ展厕D(zhuǎn)染。使用Lipofectamine?2000試劑進(jìn)行轉(zhuǎn)染。在轉(zhuǎn)染后48 h,使用雙螢光素酶報(bào)告分析系統(tǒng)計(jì)算螢光素酶相對(duì)活性。

1.3.7雙螢光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)驗(yàn)證靶向調(diào)節(jié)作用 使用在線StarBase軟件(http://starbase.sysu.edu.cn/)預(yù)測(cè)PHF19的miR-15a-5p 3′UTR區(qū)域的結(jié)合位點(diǎn)。使用Lipofectamine 2000試劑將上述載體共轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染24 h后,使用雙螢光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)螢光素酶活性,以驗(yàn)證PHF19和miR-15a-5p 3′UTR區(qū)域的結(jié)合位點(diǎn)。

1.3.8肺癌細(xì)胞A549 LINC_00355、miR-15a-5p、PHF19 mRNA表達(dá)水平檢測(cè) 使用TRIzol試劑分離總RNA,進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。使用SYBR?Green Ⅰ Supermix在20 μL的最終反應(yīng)體積中進(jìn)行qPCR。所有檢測(cè)均在iCycler IQ多色檢測(cè)系統(tǒng)上運(yùn)行3次,循環(huán)參數(shù)如下:95 ℃ 10 s,然后94 ℃ 15 s,55 ℃ 30 s,最后70 ℃ 延伸30 s,40個(gè)循環(huán)。PCR反應(yīng)體系:5 μL SsoFast EvaGreen Supermix、0.5 μL正向引物(10 μmol/L)、0.5 μL 反向引物(10 μmol/L)和4 μL cDNA。所有定量都以人GAPDH為內(nèi)參。采用2-ΔΔCt法計(jì)算相對(duì)表達(dá)水平。

在冬小麥的全生育期間，平均氣溫偏高一點(diǎn)，其降水量也比較多，雨水的分布比較集中。在冬小麥的種植期間，其平均氣溫為8.3℃，比常年高0.5℃；降水量為243.4 mm，比常年多3.8 mm；日照的時(shí)間為2531 h，比去年少126 h。在這期間其極端最高氣溫為35.7℃，出現(xiàn)在7月19日，極端最低氣溫為-15.7℃，出現(xiàn)在12月31日。

1.3.9肺癌細(xì)胞A549 PHF19蛋白表達(dá)水平檢測(cè) 使用含有蛋白酶抑制劑的RIPA裂解緩沖液從細(xì)胞中提取蛋白質(zhì),使用BCA蛋白質(zhì)測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白質(zhì)濃度,使用10% SDS-PAGE凝膠分離等量的蛋白質(zhì)裂解物(每條泳道20 μg),然后電印跡轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上,用含有0.1% Tween-20的Tris緩沖鹽水中的5%脫脂奶粉封閉膜2 h,并與以下一抗在4 ℃下孵育過夜:小鼠單克隆抗人PHF19抗體(1∶1 000)、小鼠單克隆抗人GAPDH抗體(1∶5 000)。GAPDH用作蛋白質(zhì)上樣的內(nèi)部對(duì)照,將膜與HRP結(jié)合的山羊抗小鼠IgG(1∶5 000)在室溫下進(jìn)一步孵育1 h,通過ECL試劑盒檢測(cè)免疫復(fù)合物,條帶的整合密度由 Quantity One 軟件 (Bio-Rad) 量化。

2 結(jié) 果

2.1各組細(xì)胞A值、存活率比較 與A549肺癌細(xì)胞組、lncRNA-NC組比較,LINC_00355 mimics組A值、存活率升高(P<0.05),LINC_00355 inhibitor組A值、存活率降低(P<0.05);與LINC_00355 mimics組比較,LINC_00355 inhibitor組A值、存活率降低(P<0.05)。見表1。

表1 各組細(xì)胞A值、存活率比較

2.2各組細(xì)胞單克隆形成數(shù)的比較 與A549肺癌細(xì)胞組、lncRNA-NC組比較,LINC_00355 mimics組單克隆形成數(shù)增加(P<0.05),LINC_00355 inhibitor組單克隆形成數(shù)減少(P<0.05);與LINC_00355 mimics組比較,LINC_00355 inhibitor組單克隆形成數(shù)減少(P<0.05)。見表2。

表2 各組細(xì)胞單克隆形成數(shù)的比較個(gè))

2.3各組細(xì)胞凋亡率比較 與A549肺癌細(xì)胞組、lncRNA-NC組比較,LINC_00355 mimics組細(xì)胞凋亡率降低(P<0.05),LINC_00355 inhibitor組細(xì)胞凋亡率升高(P<0.05);與LINC_00355 mimics組比較,LINC_00355 inhibitor組細(xì)胞凋亡率升高(P<0.05)。見表3、圖1。

表3 各組細(xì)胞凋亡率比較

注:A為A549肺癌細(xì)胞組;B為lncRNA-NC組;C為L(zhǎng)INC_00355 mimics組;D為L(zhǎng)INC_00355 inhibitor組。

2.4各組細(xì)胞侵襲能力比較 與A549肺癌細(xì)胞組、lncRNA-NC組比較,LINC_00355 mimics組穿膜數(shù)增加(P<0.05),LINC_00355 inhibitor組穿膜數(shù)減少(P<0.05);與LINC_00355 mimics組比較,LINC_00355 inhibitor組穿膜數(shù)減少(P<0.05)。見表4、圖2。

表4 各組A549肺癌細(xì)胞穿膜數(shù)的比較個(gè))

注:A為A549肺癌細(xì)胞組;B為lncRNA-NC組;C為L(zhǎng)INC_00355 mimics組;D為L(zhǎng)INC_00355 inhibitor組。

2.5各組細(xì)胞遷移能力比較 與A549肺癌細(xì)胞組、lncRNA-NC組比較,LINC_00355 mimics組遷移距離增加(P<0.05),LINC_00355 inhibitor組遷移距離縮短(P<0.05);與LINC_00355 mimics組比較,LINC_00355 inhibitor組遷移距離縮短(P<0.05)。見表5、圖3。

表5 各組A549肺癌細(xì)胞遷移能力的比較

注:A為A549肺癌細(xì)胞組;B為lncRNA-NC組;C為L(zhǎng)INC_00355 mimics組;D為L(zhǎng)INC_00355 inhibitor組。

2.6LINC_00355對(duì)miR-15a-5p的靶向調(diào)節(jié)作用 通過生物信息學(xué)網(wǎng)站(www.Targetscan.org)檢索發(fā)現(xiàn),LINC_00355與miR-15a-5p有潛在的結(jié)合位點(diǎn);螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)顯示,LINC_00355過表達(dá)可降低miR-15a-5p-wt(wt表示野生型)的熒光素酶活性(P<0.05),LINC_00355低表達(dá)可提高miR-15a-5p-wt的熒光素酶活性(P<0.05);LINC_00355過表達(dá)或低表達(dá)對(duì)miR-15a-5p-mut(mut表示突變型)均無有影響,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。表明LINC_00355與miR-15a-5p存在靶向調(diào)節(jié)作用。見表6、圖4。

表6 螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證LINC_00355對(duì)miR-15a-5p的靶向調(diào)節(jié)作用

圖4 Targetscan網(wǎng)站預(yù)測(cè)LINC_00355與miR-15a-5p的互補(bǔ)配對(duì)序列

2.7miR-15a-5p對(duì)PHF19的靶向調(diào)節(jié)作用 通過生物信息學(xué)網(wǎng)站(www.Targetscan.org)檢索發(fā)現(xiàn),miR-15a-5p與PHF19有潛在的結(jié)合位點(diǎn);螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)顯示,miR-15a-5p過表達(dá)可降低PHF19-wt的熒光素酶活性(P<0.05),miR-15a-5p低表達(dá)可明顯提升PHF19-wt的熒光素酶活性(P<0.05);miR-15a-5p過表達(dá)或低表達(dá)對(duì)PHF19-mut沒有影響,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。表明miR-27a-3p與PHF19存在靶向調(diào)節(jié)作用。見表7、圖5。

表7 螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證miR-15a-5p對(duì)PHF19的靶向調(diào)節(jié)作用

圖5 Targetscan預(yù)測(cè)miR-15a-5p與PHF19 mRNA>的互補(bǔ)配對(duì)系列

2.8各組A549肺癌細(xì)胞LINC_00355、miR-15a-5p、PHF19表達(dá)水平比較 與A549肺癌細(xì)胞組、lncRNA-NC組比較,LINC_00355 mimics組細(xì)胞LINC_00355、PHF19 mRNA表達(dá)上調(diào)(P<0.05),miR-15a-5p表達(dá)降低(P<0.05),LINC_00355 inhibitor組細(xì)胞LINC_00355、PHF19 mRNA表達(dá)降低(P<0.05),miR-15a-5p表達(dá)升高(P<0.05);與LINC_00355 mimics組比較,LINC_00355 inhibitor組細(xì)胞LINC_00355、PHF19 mRNA表達(dá)降低(P<0.05),miR-15a-5p表達(dá)升高(P<0.05)。見表8。

表8 各組細(xì)胞LINC_00355、miR-15a-5p mRNA相對(duì)表達(dá)水平比較

2.9各組細(xì)胞PHF19蛋白表達(dá)水平比較 與A549肺癌細(xì)胞組、lncRNA-NC組比較,LINC_00355 mimics組細(xì)胞PHF19蛋白表達(dá)上調(diào)(P<0.05),LINC_00355 inhibitor組細(xì)胞PHF19蛋白表達(dá)降低(P<0.05);與LINC_00355 mimics組比較,LINC_00355 inhibitor組細(xì)胞PHF19蛋白表達(dá)降低(P<0.05)。見表9、圖6。

表9 各組細(xì)胞PHF19蛋白表達(dá)水平比較

注:A為A549肺癌細(xì)胞組;B為lncRNA-NC組;C為L(zhǎng)INC_00355 mimics組;D為L(zhǎng)INC_00355 inhibitor組。

3 討 論

本研究首次探討了LINC_00355在肺癌發(fā)展中的作用及其潛在機(jī)制,證明了LINC_00355過表達(dá)促進(jìn)肺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,敲低LINC_00355則出現(xiàn)相反的效果;LINC_00355通過競(jìng)爭(zhēng)性抑制miR-15a-5p的結(jié)合來增加PHF19的表達(dá),PHF19被確定為肺癌發(fā)展的促進(jìn)者。因此,本研究表明LINC_00355可能通過抑制miR-15a-5p表達(dá)進(jìn)而誘導(dǎo)PHF19表達(dá)來促進(jìn)肺癌的發(fā)展。

研究表明,lncRNA在調(diào)節(jié)細(xì)胞過程中起著至關(guān)重要的作用,包括細(xì)胞周期、生長(zhǎng)和細(xì)胞凋亡。lncRNA在轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄后水平的變化直接或間接導(dǎo)致不受控制的腫瘤生長(zhǎng)。臨床研究顯示,LINC_00355與結(jié)直腸癌的臨床特征相關(guān),與生存率呈負(fù)相關(guān)[9];此外,LINC_00355在前列腺癌中高表達(dá),并且與癌癥患者的存活率相關(guān);在胃癌組織和細(xì)胞中也觀察到高表達(dá)的LINC_00355,表明LINC_00355可能在胃癌的發(fā)生發(fā)展中起到促進(jìn)作用[10-11]。本研究結(jié)果表明,與A549肺癌細(xì)胞組、lncRNA-NC組比較,LINC_00355 mimics組A值、細(xì)胞活力、單克隆形成數(shù)、穿膜數(shù)、遷移距離增加,凋亡率降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);LINC_00355 inhibitor組A值、細(xì)胞活力、單克隆形成數(shù)、穿膜數(shù)、遷移距離減少,凋亡率升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與LINC_00355 mimics組比較,LINC_00355 inhibitor組A值、細(xì)胞活力、單克隆形成數(shù)、穿膜數(shù)、遷移距離減少,凋亡率升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這表明,LINC_00355過表達(dá)促進(jìn)肺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,敲低LINC_00355則出現(xiàn)相反的效果。相關(guān)研究顯示,LINC_00355抑制還可改善其他癌癥的惡性表型,例如,LINC_00355敲低抑制了膀胱癌細(xì)胞的增殖和侵襲;LINC_00355的下調(diào)抑制了HNSCC中癌癥干細(xì)胞的活力、侵襲、遷移和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化,并促進(jìn)了腫瘤干細(xì)胞的凋亡[12]。這些研究與本研究結(jié)果一致。

miR-15a-5p在多種癌癥的發(fā)展中發(fā)揮負(fù)調(diào)節(jié)作用,包括胃癌、膀胱癌和宮頸癌。具體而言,miR-15a-5p在胃癌中的表達(dá)患者顯著減少,miR-15a-5p過表達(dá)抑制了胃癌細(xì)胞增殖和腫瘤侵襲;證明miR-15a-5p下調(diào)與晚期腫瘤分級(jí)和轉(zhuǎn)移有關(guān)[13-14]。生物信息學(xué)分析表明LINC_00355與miR-15a-5p之間存在結(jié)合位點(diǎn),雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)證實(shí)了這一點(diǎn)。單個(gè)lncRNA通常通過吸收多個(gè)miRNA在癌癥中發(fā)揮作用。例如,LINC_00355通過結(jié)合miR-195促進(jìn)HNSCC進(jìn)展;在肝細(xì)胞癌(HCC)中,LINC_00355作為ceRNA海綿化miR-6777-3p并進(jìn)一步促進(jìn)HCC進(jìn)展[15];這些發(fā)現(xiàn)表明LINC_00355通過多種途徑調(diào)節(jié)癌癥發(fā)展并突出了LINC_00355在癌癥進(jìn)展中的重要作用。本研究證明LINC_00355通過負(fù)調(diào)控miR-15a-5p促進(jìn)肺癌進(jìn)展,表明LINC_00355/miR-15a-5p軸可能是LINC_00355調(diào)控肺癌發(fā)展的方式之一。

PHF19是多梳狀蛋白的成員,可以調(diào)節(jié)多梳抑制復(fù)合物2(PRC2)的酶活性和募集。PHF19表達(dá)的失調(diào)與多種癌癥的發(fā)展有關(guān)。先前的研究發(fā)現(xiàn)PHF19表達(dá)與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤進(jìn)展呈正相關(guān);PHF19沉默減少了卵巢癌細(xì)胞的增殖,并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期停滯;此外,PHF19的過表達(dá)與胃癌患者的紫杉醇耐藥性相關(guān)[16-17];此外,最近的一項(xiàng)研究表明,PHF19的下調(diào)可以抑制胃癌細(xì)胞的增殖和遷移[18]。這些該研究結(jié)果突出了PHF19在癌癥發(fā)展中的正向調(diào)節(jié)作用。本研究結(jié)果顯示:與A549肺癌細(xì)胞組、lncRNA-NC組比較,LINC_00355 mimics組細(xì)胞LINC_00355、PHF19 mRNA升高,miR-15a-5p降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),LINC_00355 inhibitor組細(xì)胞LINC_00355、PHF19 mRNA和蛋白降低,miR-15a-5p升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與LINC_00355 mimics組比較,LINC_00355 inhibitor組單細(xì)胞LINC_00355 mRNA、PHF19 mRNA和蛋白降低,miR-15a-5p升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這說明LINC_00355負(fù)調(diào)控miR-15a-5p上調(diào)肺癌細(xì)胞中PHF19的表達(dá)。

綜上所述,LINC_00355過表達(dá)促進(jìn)肺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,敲低LINC_00355則出現(xiàn)相反的效果;其機(jī)制可能與LINC_00355負(fù)調(diào)控miR-15a-5p進(jìn)而上調(diào)肺癌細(xì)胞中PHF19的表達(dá)有關(guān)。