戴隆妹 楊力寶

【摘要】? 目的? ? 探討長鏈非編碼RNA LOC146880是否可作為評(píng)估晚期非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）患者接受腫瘤免疫治療的臨床預(yù)后生物標(biāo)志物。方法? ? 納入接受腫瘤免疫治療的42例晚期NSCLC患者作為試驗(yàn)組，根據(jù)ROC最佳截?cái)嘀祵⒒€Inc RNA LOC146880表達(dá)分為高、低表達(dá)組，另外選擇同期42例肺部良性疾病患者作為對(duì)照組。研究終點(diǎn)是根據(jù)RECIST標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估晚期NSCLC患者的緩解率（RR）、無進(jìn)展生存期 （PFS） 和總生存期（OS）。結(jié)果? ? 試驗(yàn)組的Inc RNA LOC146880表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組；在臨床相關(guān)性分析中，Inc RNA LOC146880表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移部位的數(shù)量顯著相關(guān)；在納入的42例晚期NSCLC患者中，總體RR為39.2%；在20.5個(gè)月的中位隨訪之后，相較于Inc RNA LOC146880高表達(dá)組，Inc RNA LOC146880低表達(dá)組的RR顯著增高，PFS顯著增長，OS也顯著增長。結(jié)論? ? 接受腫瘤免疫治療的晚期NSCLC患者，Inc RNA LOC146880低表達(dá)預(yù)示著較好的臨床預(yù)后。血漿長鏈非編碼RNA LOC146880可作為預(yù)測晚期NSCLC免疫治療療效的生物標(biāo)志物。

【關(guān)鍵詞】? 非小細(xì)胞肺癌； lnc RNA； 免疫治療

中圖分類號(hào)：R392；R734.2? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1672-1721（2023）26-0044-03

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.26.014

腫瘤免疫治療是非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）治療中最重要的突破之一，目前迫切需要篩選能預(yù)測NSCLC患者的腫瘤免疫治療療效的生物標(biāo)志物。高突變的腫瘤負(fù)荷（TMB）曾被報(bào)告為潛在的預(yù)測免疫治療療效的生物標(biāo)志物之一[1]。然而，缺乏標(biāo)準(zhǔn)化的檢測和評(píng)估手段限制了TMB作為常規(guī)臨床標(biāo)志物的應(yīng)用[2]。最近，由中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比值（NLR）和乳酸脫氫酶（LDH）的聯(lián)合應(yīng)用推出的肺免疫預(yù)后指數(shù)（LIPI）評(píng)分被提議作為免疫治療療效的血液生物標(biāo)志物之一，但由于來自多中心的回顧性研究[3]和RCT研究[4]得出的相反結(jié)果，因此該評(píng)分仍存在爭議。在本研究中長鏈非編碼RNA （Inc RNA）評(píng)估了晚期NSCLC患者在接受免疫治療前血液LOC146880的表達(dá)水平與臨床獲益之間的關(guān)聯(lián)，旨在研究Inc RNA LOC146880是否可作為預(yù)測晚期NSCLC患者免疫治療療效的生物標(biāo)志物。

1? ? 研究對(duì)象與研究方法

1.1? ? 研究對(duì)象和研究終點(diǎn)? ? 連續(xù)收集2018年12月—2021年12月期間就診于三明市第二人民醫(yī)院的腫瘤科且接受腫瘤免疫治療的NSCLC 晚期患者（n=42），作為試驗(yàn)組，納入同期42例肺部良性疾病患者作為對(duì)照組。收集2組人群的外周血血漿樣本，以上84名研究對(duì)象均簽署知情同意書，本研究通過該院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批。研究終點(diǎn)：主要終點(diǎn)為緩解率（response rate，RR），根據(jù)實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)新標(biāo)準(zhǔn)RECIST評(píng)估RR；次要終點(diǎn)為無進(jìn)展生存期（progression-free survival， PFS）和總生存期（overall survival，OS）。

1.2? ? 試驗(yàn)方法 試驗(yàn)方法具體如下。

1.2.1? ? 血漿RNA提取 將2組研究對(duì)象的凍存血漿于4 ℃冰上自然融化，通過離心機(jī)（4 ℃，12 000 xg）離心沉淀血漿雜質(zhì)；750 μL TRIzol LS裂解液裂解后，靜置5 min，依據(jù)血漿RNA 提取試劑TRIzol LS （Life公司）的說明書，抽取10 μL RNA。

1.2.2? ? 引物合成? ? 通過在線數(shù)據(jù)庫NCBI（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）查詢Inc RNA LOC146880和GAPDH的序列，然后根據(jù)所獲得的序列在Primer 6.0中生成引物。Inc RNA LOC146880引物序列的正向?yàn)?'-AACTAAGGCACGGTCAACTATCA-3'，反向?yàn)?'-GGAAACTTTGGCTTTAAAACGA-3'；內(nèi)參基因?yàn)镚APDH，引物序列的正向?yàn)?'-GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT-3'，反向?yàn)?'-GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG-3'，以上引物均由上海生工生物公司合成。

1.2.3? ? 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）檢測? ? Inc RNA LOC146880表達(dá)水平參照使用SuperScript Ⅱ逆轉(zhuǎn)錄酶試劑盒 （Invitrogen）說明書將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，以cDNA為模板進(jìn)行qRT-PCR擴(kuò)增反應(yīng)，使用SYBR Green方法在ABI 7500序列檢測系統(tǒng)（Applied Biosystems）上測量通過qRT-PCR確定的相對(duì)RNA水平。

1.3? ? 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法? ? 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)，Mann-Whitney 檢驗(yàn)或Fisher 精確檢驗(yàn)，計(jì)量資料以x±s表示，采用t檢驗(yàn)，多因素分析采用COX回歸分析， P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? ? 結(jié)果

2.1? ? 患者的基線特征? ? 連續(xù)入組42例接受腫瘤免疫治療的晚期NSCLC患者基本資料見表1?；颊吣挲g35～86歲，中位年齡70.5歲，其中24例患者（57%）≥65歲，18例患者（43%）<65歲；28例患者 （67%） 為男性，14例患者（33%）為女性；16例患者（38%）病理類型為鱗癌，26例患者（62%）病理類型為腺癌；22例患者（52%）出現(xiàn)1～2個(gè)肺外轉(zhuǎn)移部位，20例患者（48%）出現(xiàn)≥3個(gè)肺外轉(zhuǎn)移部位；27例患者（64%）有既往胸部放療史，15例患者（36%）無既往胸部放療史，見表1。

2.2? ? 血漿Inc RNA LOC146880的表達(dá)及與患者臨床病理特征的相關(guān)性分析? ? 與對(duì)照組比較，試驗(yàn)組血漿Inc RNA LOC146880表達(dá)水平較高（P<0.05），見表2。進(jìn)一步研究表明Inc RNA LOC146880表達(dá)僅與腫瘤轉(zhuǎn)移部位的數(shù)量有關(guān)（P<0.05），與年齡、性別、吸煙史、病理類型、BMI 、合并癥、腦轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移、胸腔積液、胸部放療史、類固醇使用史均無關(guān)（P>0.05），見表3。

2.3? ? 總體療效及不良反應(yīng)、緩解率（RR）、無進(jìn)展生存期（PFS）、總生存期（OS）? ? 研究發(fā)現(xiàn)，42例晚期NSCLC患者總體RR為39.2%，18個(gè)患者出現(xiàn)緩解（15個(gè)PD和3個(gè)CD）和7個(gè)患者出現(xiàn)SD。在47%（20/42）患者中觀察到免疫相關(guān)不良事件，其中常見的是肺炎（n=5，11.9%）、甲狀腺功能障礙（n=3，7.14%）、虛弱（n=3，7.14%）。在短期停止免疫治療和大劑量類固醇治療后，所有肺炎均治愈，但是出現(xiàn)1例3級(jí)肝炎與疾病進(jìn)展同時(shí)發(fā)生，因此停止治療并給予類固醇直至消退。與Inc RNA LOC146880高表達(dá)組相比，Inc RNA LOC146880低表達(dá)組患者顯示出更高的RR，更長的PFS，更長的OS（P<0.05）。

3? ? 討論

肺癌是世界上最常見的癌癥（占總病例數(shù)的?11.6%），也是癌癥死亡的主要原因（占癌癥死亡總數(shù)的18.4%）[5]。NSCLC屬于肺癌的常見類型之一，近1/3肺癌患者為非小細(xì)胞肺癌[6]，對(duì)患者身心健康和家庭負(fù)擔(dān)影響較大，且由于臨床上尚缺乏有效的篩查手段和早診治的方法， 絕大多數(shù)患者確診時(shí)已是晚期[7]。20世紀(jì)90年代以來，隨著腫瘤免疫學(xué)和分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，研究者發(fā)現(xiàn)肺癌的發(fā)生發(fā)展與腫瘤組織的基因突變以及患者的免疫失衡有著密切的聯(lián)系[8]。同時(shí)，腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞之間存在復(fù)雜“博弈”關(guān)系。肺癌的免疫治療成為肺癌多學(xué)科治療中新的研究方向和應(yīng)用熱點(diǎn)，日益受到重視，值得進(jìn)一步探索。然而，對(duì)于臨床上接受腫瘤免疫治療的患者，目前仍缺少有效的臨床療效預(yù)測生物標(biāo)志物。因此需通過研究肺癌的免疫微環(huán)境，進(jìn)而找到可靠的生物標(biāo)志物，指導(dǎo)臨床上有效地篩選肺癌免疫治療適宜患者。lnc RNA是一類具有 200 個(gè)或更多核苷酸的非編碼轉(zhuǎn)錄物。lnc RNA作為一種新興的腫瘤標(biāo)志物，在腫瘤的診斷和治療中具有重要價(jià)值。隨著高通量測序技術(shù)的發(fā)展，lnc RNA在人類腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用逐漸引起關(guān)注[9]。目前已有研究表明lnc RNA參與腫瘤發(fā)生發(fā)展的一系列病理生理過程，包括細(xì)胞增殖、凋亡、細(xì)胞遷移侵襲、細(xì)胞周期等，有望作為腫瘤免疫治療新的有效生物標(biāo)志物[10]。對(duì)于肺癌的研究，越來越多的證據(jù)也表明，lncRNA作為癌基因或抑癌基因表達(dá)的標(biāo)志物而參與了肺癌的發(fā)生[11]。之前的研究表明，Inc RNA LOC146880作為染色體17q24.3上的一個(gè)lnc RNA，在腫瘤組織中的表達(dá)高于在鄰近正常組織中，高表達(dá)與NSCLC的預(yù)后不良有關(guān)[12]。有學(xué)者進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)NSCLC中Inc RNA LOC146880的表達(dá)與患者生存結(jié)果相關(guān)，機(jī)制可能與Inc RNA LOC146880在肺腫瘤細(xì)胞中的高表達(dá)導(dǎo)致KPNA2下調(diào)以及細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的抑制有關(guān)；此外Inc RNA LOC146880的轉(zhuǎn)錄活性也受啟動(dòng)子甲基化的影響[13]。本研究發(fā)現(xiàn)，晚期NSCLC患者血漿LOC146880表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移部位的數(shù)量相關(guān)（P<0.05），說明Inc RNA LOC146880高表達(dá)參與晚期NSCLC癌變進(jìn)展及轉(zhuǎn)移；Inc RNA LOC146880較低表達(dá)的NSCLC患者的腫瘤免疫治療效果較好，RR更高且有更長的PFS和OS。當(dāng)Inc RNA LOC146880作為免疫治療有效的生物標(biāo)志物評(píng)估時(shí)，相比于其他侵入性檢查如PD-L1和TMB，可能具有更好的臨床預(yù)測價(jià)值，因?yàn)閮H通過簡單的血液樣本就可以篩選出腫瘤免疫治療中可能獲益更多的部分患者。

綜上所述，血漿Inc RNA LOC146880表達(dá)與NSCLC的發(fā)生密切相關(guān)，治療前檢測Inc RNA LOC146880表達(dá)水平有助于指導(dǎo)免疫治療NSCLC，從而為臨床治療提供一定參考。目前臨床對(duì)Inc RNA LOC146880在NSCLC發(fā)生發(fā)展中的分子機(jī)制仍然缺乏了解，今后需要對(duì)Inc RNA LOC146880在NSCLC進(jìn)展過程中的分子機(jī)制進(jìn)行深入探究，以支持抗Inc RNA LOC146880單克隆抗體的研發(fā)。另外，本研究樣本量較少，需要大范圍進(jìn)行驗(yàn)證，同時(shí)需要進(jìn)行大樣本、多中心的臨床研究，以進(jìn)一步證實(shí)本結(jié)論。

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