來青偉,陳悅,李青云,胡朋,樊紅彬

癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)常見的疾病。據(jù)統(tǒng)計,中國目前約有一千多萬患者,并且每年新增患者約四十萬[1]。有20%～40%的癲癇患者對抗癲癇藥物不敏感,成為耐藥性癲癇[2]。越來越多的研究[3-4]表明癲癇的發(fā)生與自身免疫機制異常有關(guān)。2017年,國際抗癲癇聯(lián)盟(ILAE)將免疫因素列為癲癇的六大病因之一[5]。耐藥性癲癇發(fā)病機制可能與多藥轉(zhuǎn)運體的過量表達、藥物靶點的減少以及藥物敏感性的降低、神經(jīng)細胞凋亡和壞死、神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)重組、能量代謝障礙及免疫因素有關(guān),尤其是神經(jīng)炎癥和免疫反應(yīng)在癲癇的發(fā)生和發(fā)展中的作用受到越來越多的關(guān)注[6-7],但外周淋巴細胞在癲癇中的作用似乎沒有得到足夠的重視。

調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)是一類具有免疫負調(diào)控功能的CD4+T細胞亞群,可通過分泌抑制性細胞因子(IL-10、轉(zhuǎn)化生長因子-β)或抑制細胞間接觸等途徑抑制效應(yīng)T細胞增殖、活化和炎癥細胞因子分泌,維持自身免疫耐受并發(fā)揮抗炎作用[8-9]。Treg可分為天然產(chǎn)生的自然Treg(nTreg)和誘導(dǎo)產(chǎn)生的適應(yīng)性Treg(iTreg),自然Treg主要為CD4+CD25+Treg,占外周血CD4+T細胞的5%～10%。CD4+CD25highTreg、CD4+CD25highCD127lowTreg被認為是調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答,介導(dǎo)免疫耐受的重要Treg表型[10-11]。鑒于Treg的生物學(xué)功能和主要抑制機制,其在移植物排斥的預(yù)防、自身免疫性疾病的治療和癌癥免疫治療方面得到了廣泛研究[12-13]。在生理條件下,Treg是大腦中分布較少的群體,因此CD4+CD25+Foxp3+Tregs在CNS中的作用尚未得到很好的闡述。既往研究[14-18]支持Treg在多發(fā)性硬化癥、帕金森病、Alzheimer’s病肌萎縮性側(cè)索硬化癥、腦卒中等疾病中發(fā)揮有益的作用。有研究[19]表明,Treg的擴增和激活對于IL-33介導(dǎo)缺血性腦損傷的神經(jīng)保護作用至關(guān)重要,涉及抗細胞凋亡過程和細胞因子合成。在急性腦損傷的小鼠中,Treg的缺失可以減少反應(yīng)性星形膠質(zhì)細胞增生、T細胞浸潤和干擾素-γ(IFN-γ)基因表達[20]。此外,Tregs通過IL-10/GSK3β/PTEN軸調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞向M2表型的極化,從而改善腦出血引起的炎癥損傷[21]。

目前,關(guān)于Treg對癲癇的影響知之甚少。Treg可能通過分泌IL-10來抑制Th17、Th1和Th2細胞的作用[22-23]。有研究[24]發(fā)現(xiàn),顳葉癲癇(TLE)患者與對照組外周血中Treg比例相似,但TLE患者循環(huán)的IL-10水平升高 3倍,而且外周血中Treg比例與癲癇發(fā)作年齡呈正相關(guān)。隱源性癲癇患者外周血CD4+CD25highTreg比例降低,并與癲癇患者嚴重程度相關(guān)[25]。另一項研究[26]表明,缺乏Treg會加重癲癇發(fā)作的易感性,而補充Treg則降低癲癇發(fā)作的頻率。具有抗炎的Treg在局灶耐藥性癲癇的作用尚不明確。本研究旨在探討局灶性耐藥性癲癇患者發(fā)作間期外周血Treg及細胞因子的表達變化,從而明確Treg在局灶性癲癇進展中的作用,為耐藥性癲癇尋找潛在的治療靶點。

1 對象與方法

1.1 對象 選取2021年1月至2023年5月于徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院的局灶性癲癇患者140例,其中耐藥性癲癇43例,藥物反應(yīng)性癲癇75例,未用藥癲癇22例。未用藥癲癇定義為患者在入組時從未接受過抗癲癇發(fā)作藥物治療;藥物反應(yīng)性癲癇定義為標準化藥物治療后至少12個月的無癲癇發(fā)作或最長癲癇發(fā)作間隔的3倍;耐藥性癲癇定義為以最佳劑量服用≥2種藥物后過去12個月內(nèi)有任何頻率的癲癇發(fā)作[27]。使用NHS3量表評估癲癇的嚴重程度。140例局灶性癲癇包括局灶性知覺障礙65例,局灶進展為雙側(cè)強直-陣攣發(fā)作67例及局灶性知覺保留8例。男性83例,女性57例;年齡13～79歲,平均(38.2±20.5)歲;病程0.03～360個月,平均(92.5±107.2)個月;發(fā)病的起始年齡(30.6±22.8)歲。納入標準:(1)患者癲癇診斷及發(fā)作類型符合2017年ILAE癲癇的診斷標準[28];(2)完善實驗室檢測、EEG和MRI等檢測,且臨床病歷資料完整;(3)患者本人或監(jiān)護人知情同意。排除標準:(1)在CNS感染的急性期,有自身免疫性腦炎、脫髓鞘疾病、副腫瘤綜合征等;(2)有慢性感染、慢性炎性疾病等;(3)合并其他自身免疫性疾病(系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、干燥綜合征等)及過敏性疾病;(4)先天性疾病、遺傳性疾病所致癲癇患者;(5)72 h內(nèi)有癲癇發(fā)作。另外,選取同期健康體檢者40名作為健康對照組,男性21名,女性19名。本研究獲得徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會批準(XYFY2021-KL281-01),所有研究對象或監(jiān)護人簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 資料采集 收集患者的臨床資料,包括性別、年齡、發(fā)作類型、病程、EEG、MRI結(jié)果等。

1.2.2 流式細胞術(shù)檢測 采用流式細胞術(shù)測定外周血淋巴細胞亞群、CD4+CD25highTreg及CD4+CD25highCD127lowTreg。抽取癲癇患者與健康對照外周血2 ml,EDTA抗凝,取50 μl置于流式檢測管中,加入不同熒光標記的單克隆抗體20 μl,室溫孵育15 min,加入紅細胞裂解液,PBS洗滌2次,1500 r/min離心5 min,棄上清加PBS 500 μl,用流式細胞儀檢測。Diva和Flowjo軟件分析數(shù)據(jù),記錄陽性細胞百分率。各樣本細胞數(shù)至少為1×105個/次。

1.2.3 流式液相多重蛋白定量技術(shù)(CBA)檢測 用CBA檢測癲癇患者外周血IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、IL-17、IFN-α、IFN-γ和TNF-α等細胞因子的水平。按照CBA試劑盒說明進行檢測,課題組前期建立規(guī)范的檢測流程[29],根據(jù)CBA試劑盒說明進行檢測。多重免疫測定的匯總變異系數(shù)(CV)為8.25%。

2 結(jié) 果

2.1 耐藥性癲癇、藥物反應(yīng)性癲癇及未用藥癲癇患者的臨床特征 局灶性耐藥性癲癇患者43例,其中男性22例,女性21例;局灶性知覺障礙25例,局灶進展為雙側(cè)強直-陣攣發(fā)作16例,局灶性知覺保留2例;患者年齡為(35.4±18.3)歲;發(fā)病的起始年齡為(25.1±20.9)歲;病程(123.5±111.5)個月;影像學(xué)異常的患者22例(51.2%);EEG異常36例(83.7%)。藥物反應(yīng)性癲癇患者75例,其中男性48例,女性27例;局灶性知覺障礙28例,局灶進展為雙側(cè)強直-陣攣發(fā)作42例,局灶性知覺保留5例;患者年齡為(41.0±22.5)歲;發(fā)病的起始年齡為(36.0±23.7)歲;病程(61.5±95.0)個月;影像學(xué)異常的患者33例(44.0%);EEG異常51例(68.0%)。未用藥癲癇患者22例,其中男性13例,女性9例;局灶性知覺障礙12例,局灶進展為雙側(cè)強直-陣攣發(fā)作9例,局灶性知覺保留1例;患者年齡為(33.5±15.8)歲;發(fā)病的起始年齡為(23.2±18.5)歲;病程(7.8±10.9)個月;影像學(xué)異常的患者10例(45.5%);EEG異常16例(72.7%)。各組患者性別、年齡、發(fā)作類型等差異無統(tǒng)計學(xué)意義,基線資料具有可比性。

2.2 各組外周血T細胞亞群的比較 見表1。T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞及CD4+T/CD8+T比值在各組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 各組外周血淋巴細胞亞群比較(x±s,%)組別例數(shù)T細胞B細胞NK細胞CD4+T細胞CD8+T細胞CD4+T/CD8+T耐藥性癲癇組4369.0±8.414.2±6.414.8±7.739.6±8.623.9±5.61.8±0.76藥物反應(yīng)性癲癇組7569.8±8.211.9±3.916.4±7.338.6±8.426.8±7.71.6±0.65未用藥癲癇組2269.9±7.312.0±3.116.7±7.539.7±9.126.3±6.91.7±0.69健康對照組4070.9±4.913.1±2.813.6±3.538.8±3.925.2±5.91.8±0.49F值0.571.571.520.161.070.69P值0.640.190.210.920.370.57

2.3 各組外周血CD4+T細胞、CD4+CD25highTreg、CD4+CD25highCD127lowTreg水平的比較 見表2。各組患者外周血CD4+CD25highTreg和CD4+CD25highCD127lowTreg比例差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。兩兩比較結(jié)果顯示,耐藥性癲癇患者CD4+CD25highTreg和CD4+CD25highCD127lowTreg比例明顯低于藥物反應(yīng)性癲癇患者及健康對照組(均P<0.05)。

表2 各組外周血CD4+、CD4+CD25high Treg、CD4+CD25highCD127low Treg比較(x±s,%)組別例數(shù)CD4+T細胞CD4+CD25highCD4+CD25highCD127low耐藥性癲癇組4339.6±8.61.5±0.7ab1.5±0.7ab藥物反應(yīng)性癲癇組7538.6±8.42.3±1.62.3±1.5未用藥癲癇組2239.7±9.12.2±1.42.2±1.4健康對照組4038.8±3.92.5±1.22.5±1.2F值0.163.265.39P值0.920.020.02 注:與健康對照組比較aP<0.05;與藥物反應(yīng)性癲癇組比較bP<0.05。

進一步分析發(fā)作類型相同的耐藥性癲癇患者與藥物反應(yīng)性癲癇患者外周血Treg的差異,結(jié)果顯示局灶進展為雙側(cè)強直-陣攣發(fā)作的癲癇患者,耐藥性癲癇CD4+CD25highTreg、CD4+CD25highCD127lowTreg比例明顯低于藥物反應(yīng)性癲癇(均P<0.05),局灶性知覺保留的癲癇患者,兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(表3～表5)。

表3 局灶性知覺障礙耐藥性癲癇、藥物反應(yīng)性癲癇患者外周血CD4+、CD4+CD25high Treg、CD4+CD25highCD127low Treg比較(x±s,%)組別CD4+T細胞CD4+CD25highCD4+CD25highCD127low耐藥性癲癇組(n=25)37.9±11.61.6±0.81.5±0.8藥物反應(yīng)性癲癇組(n=28)36.4±7.91.8±1.11.8±1.1P值0.690.530.49

表4 局灶進展為雙側(cè)強直-陣攣耐藥性癲癇、藥物反應(yīng)性癲癇患者外周血CD4+、CD4+CD25high Treg、CD4+CD25highCD127low Treg比較(x±s,%)組別CD4+T細胞CD4+CD25highCD4+CD25highCD127low耐藥性癲癇組(n=16)38.7±6.71.5±0.41.5±0.4藥物反應(yīng)性癲癇組(n=42)40.3±8.32.8±1.82.7±1.8P值0.660.0340.034

表5 局灶性知覺保留耐藥性癲癇、藥物反應(yīng)性癲癇患者外周血CD4+、CD4+CD25high Treg、CD4+CD25highCD127low Treg比較(x±s,%)組別CD4+T細胞CD4+CD25highCD4+CD25highCD127low耐藥性癲癇組(n=2)42.1±3.71.0±0.80.9±0.8藥物反應(yīng)性癲癇組(n=5)35.9±3.61.8±0.91.8±1.0P值0.100.320.32

進一步篩選癲癇病程、年齡和性別相匹配的耐藥性癲癇患者與藥物反應(yīng)性癲癇患者進行比較,二者外周血Treg差異無統(tǒng)計學(xué)意義;篩選影像學(xué)結(jié)構(gòu)相匹配的耐藥性癲癇患者與藥物反應(yīng)性癲癇患者進行比較,二者外周血Treg的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

2.4 癲癇患者Treg與癲癇患者年齡、病程、發(fā)病起始年齡、發(fā)作頻率及嚴重程度相關(guān)性分析 癲癇患者中,CD4+CD25highTreg與癲癇發(fā)病起始年齡(r=-0.297,P=0.036)及癲癇嚴重程度(r=-0.299,P=0.035)呈負相關(guān),與年齡、癲癇病程及發(fā)作頻率無相關(guān)性;CD4+CD25highCD127lowTreg與癲癇發(fā)病起始年齡(r=-0.308,P=0.029)及癲癇嚴重程度(r=-0.306,P=0.031)呈負相關(guān),與年齡、癲癇病程及發(fā)作頻率無相關(guān)性。

2.5 各組T細胞因子的比較 見表6。各組患者血清IL-1β、IL-8和IFN-γ水平差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。兩兩比較結(jié)果顯示,耐藥性癲癇患者IL-1β、IL-8和IFN-γ水平明顯高于藥物反應(yīng)性癲癇患者及健康對照組(均P<0.05),未用藥癲癇患者IL-1β和IFN-γ水平高于健康對照組(均P<0.05);血清IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12p70、IL-17、IFN-α及TNF-a水平在各組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。進一步分析發(fā)作類型相同的耐藥性癲癇患者與藥物反應(yīng)性癲癇患者外周血T細胞因子的差異,結(jié)果顯示局灶進展為雙側(cè)強直-陣攣的癲癇患者,耐藥性癲癇患者IL-1β和IFN-γ水平明顯高于藥物反應(yīng)性癲癇(均P<0.05),局灶性知覺障礙或保留的癲癇患者,兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。進一步分析影像學(xué)結(jié)構(gòu)相匹配的耐藥性癲癇患者與藥物反應(yīng)性癲癇患者外周血T細胞因子的差異,結(jié)果顯示耐藥性癲癇患者IL-1β水平顯著高于藥物反應(yīng)性癲癇(P<0.05)。

表6 各組外周血細胞因子水平的比較[M(Q25,Q75)]指標耐藥性癲癇組(n=43)藥物反應(yīng)性癲癇組(n=75)未用藥癲癇組(n=22)健康對照組(n=40)H/χ2值P值IL-1β4.86(1.79,14.01)2.14(0.34,5.37)4.37(1.65,5.93)1.84(1.28,2.24)19.09<0.001IL-21.68(1.24,2.69)1.31(0.51,2.54)1.35(0.71,2.66)1.47(0.92,1.74)4.130.250IL-41.29(0.81,1.58)1.13(0.65,1.48)1.11(0.71,1.42)1.01(0.61,1.12)3.200.362IL-51.85(1.23,3.88)1.56(0.67,3.99)1.47(0.36,4.71)1.17(0.71,2.28)5.920.121IL-62.53(1.41,4.63)3.61(1.23,5.78)3.15(0.78,5.75)2.02(1.15,3.27)5.360.150IL-82.59(1.41,5.83)2.25(0.16,7.55)0.35(0.19,6.32)1.01(0.64,2.36)11.770.008IL-101.22(0.82,2.19)1.28(0.84,1.56)1.16(0.74,1.67)0.91(0.78,1.47)5.790.121IL-12p701.48(1.09,1.89)1.24(0.72,1.69)1.24(0.68,1.63)0.96(0.56,1.52)5.760.122IL-171.90(1.07,3.03)1.44(0.99,2.01)1.45(0.90,1.84)1.32(1.10,1.88)2.690.441IFN-α1.92(1.11,3.46)1.17(0.38,2.21)0.99(0.17,2.05)1.24(1.11,1.53)6.170.103IFN-γ4.88(3.02,9.39)2.50(0.23,5.76)4.74(2.10,8.36)2.49(1.28,3.57)18.21<0.001TNF-α2.17(1.68,3.64)1.67(0.41,3.52)4.03(0.23,7.95)1.84(1.19,2.44)6.230.102

2.6 耐藥性癲癇患者Treg水平與癲癇病程、發(fā)病起始年齡、發(fā)作頻率、嚴重程度及細胞因子的相關(guān)性分析 見表7。耐藥性癲癇患者,CD4+CD25highTreg與IL-10呈正相關(guān)(r=0.574,P=0.003),與癲癇的嚴重程度呈負相關(guān)(r=-0.429,P=0.032),與其他細胞因子及臨床因素無相關(guān)性;CD4+CD25highCD127lowTreg與IL-10呈正相關(guān)(r=0.578,P=0.002),與癲癇的嚴重程度呈負相關(guān)(r=-0.447,P=0.025),與其他細胞因子及臨床因素無相關(guān)性。

表7 耐藥性癲癇患者細胞因子水平與CD4+、CD4+CD25high Treg、CD4+CD25highCD127low Treg的相關(guān)性分析細胞因子CD4+r值P值CD4+CD25high Tregr值P值CD4+CD25highCD127low Tregr值P值IL-1β-0.2560.2170.3710.0680.3730.066IL-2-0.1530.4660.2560.2160.2530.222IL-4-0.0620.7690.3050.1380.3030.142IL-5-0.2470.2340.4000.1480.4030.146IL-60.0560.7910.3600.0780.3590.078IL-8-0.0810.7010.0970.6430.0900.668IL-10-0.0740.7240.5740.0030.5780.002IL-12p70-0.2480.2320.2260.2770.2250.280IL-17-0.1730.4080.3830.0590.3820.059IFN-α-0.1900.3630.3930.0520.3910.053IFN-γ-0.3300.1070.1280.5430.1300.535TNF-α-0.0590.7800.2970.1490.2970.150癲癇病程-0.2740.1840.0840.6910.0740.724發(fā)病起始年齡0.3480.0890.2230.2830.2260.278癲癇發(fā)作頻率0.0720.732-0.3260.112-0.3500.086癲癇嚴重程度0.1090.606-0.4290.032-0.4470.025

3 討 論

Treg是CD4+T輔助細胞的免疫抑制亞群,對于維持免疫穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要。這些細胞在抑制免疫反應(yīng)以維持免疫耐受方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。Treg控制T細胞增殖和促炎細胞因子的產(chǎn)生,從而減少自身免疫和炎癥反應(yīng)。既往研究[14-18]支持Treg在多發(fā)性硬化癥、重癥肌無力、Guillain-Barrés綜合征、帕金森病、Alzheimer’s病以及肌萎縮性側(cè)索硬化癥等疾病中的有益作用。近年來,Treg在癲癇疾病進展中的作用受到越來越多的關(guān)注。增強Treg,減輕外周和神經(jīng)炎癥反應(yīng),可能成為耐藥性癲癇潛在的治療靶點[30]。

局灶性發(fā)作是成人常見的癲癇發(fā)作類型[31]。本研究關(guān)注局灶性耐藥性癲癇患者外周血中淋巴細胞亞群、Treg及細胞因子的表達變化。越來越多的研究證實免疫功能紊亂參與癲癇的發(fā)生與發(fā)展。T細胞亞群是反應(yīng)機體免疫機能的重要指標之一。本研究發(fā)現(xiàn),局灶耐藥性癲癇患者外周血T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD4+T/CD8+T比值與藥物反應(yīng)性癲癇、未用藥癲癇差異無統(tǒng)計學(xué)意義。但既往有研究[32-33]發(fā)現(xiàn),耐藥性癲癇患者外周血促炎CD4+T細胞比例升高,在伴海馬硬化的TLE CSF中表達CD4+T淋巴細胞比例增加,而在GAD65抗體陽性的TLE中,表達CD8+T淋巴細胞的比例增加。T淋巴細胞亞群的差異可能與入組患者癲癇的病因、發(fā)作類型、組織樣本等有關(guān)。

本研究分析了具有抗炎作用的Treg在局灶性耐藥性癲癇、藥物反應(yīng)性癲癇及未用藥癲癇患者外周血表達的變化,結(jié)果顯示,耐藥性癲癇患者CD4+CD25highTreg和CD4+CD25highCD127lowTreg比例明顯低于藥物反應(yīng)性癲癇患者及健康對照組。耐藥性癲癇與藥物反應(yīng)性癲癇外周血Tregs水平變化與局灶性癲癇發(fā)作類型有關(guān),與病程、影像學(xué)結(jié)構(gòu)無關(guān);其中,局灶進展為雙側(cè)強直-陣攣的癲癇患者,耐藥性癲癇CD4+CD25highTreg、CD4+CD25highCD127lowTreg比例明顯低于藥物反應(yīng)性癲癇,而局灶性知覺障礙或保留的癲癇患者,兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。也有研究[34]發(fā)現(xiàn),在兒童耐藥性癲癇患者中,外周血Treg水平和Foxp3、GITR及CTLA-4的表達水平顯著降低,給予生酮飲食可改善。甘氨酸受體抗體(GlyR-Ab)陽性癲癇患者的CD4+CD25highTreg及CD4+CD25highCD127lowTreg比例顯著增加[35]。能夠抑制B細胞的Treg增加可能是防止效應(yīng)B細胞亞群轉(zhuǎn)化的一種代償措施,該研究結(jié)果支持適應(yīng)性免疫參與不明原因的局灶性癲癇。同時本研究還分析了Treg與癲癇患者年齡、病程、發(fā)病起始年齡、發(fā)作頻率及嚴重程度相關(guān)性,結(jié)果顯示CD4+CD25highTreg、CD4+CD25highCD127lowTreg與癲癇發(fā)病起始年齡及癲癇嚴重程度呈負相關(guān),與年齡、癲癇病程及發(fā)作頻率無相關(guān)性。但在成人TLE中,CD4+CD25+Foxp3+細胞的頻率與癲癇發(fā)作時的起始年齡呈正相關(guān)[24]。有研究[26]也發(fā)現(xiàn),在兒童耐藥性癲癇致癲癇病灶中,Treg的數(shù)量與疾病嚴重程度成反比。在海藻酸誘導(dǎo)的癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)模型[26]中,給予Treg改善癲癇發(fā)作,而Treg耗竭則加劇了癲癇發(fā)作的嚴重程度。這提示在局灶性耐藥性癲癇中可能存在免疫細胞的失衡,而Treg在癲癇的進展中發(fā)揮重要作用。

最新研究[36]已證實在癲癇患者和癲癇動物模型的致癇區(qū)中存在大量的Treg。大腦Treg的表達水平與癲癇患者的發(fā)作頻率呈負相關(guān)。進一步研究[36]表明,大腦Treg耗竭促進了SE后海馬中的星形細胞增多、小膠質(zhì)細胞增生、炎性細胞因子的產(chǎn)生、氧化應(yīng)激和神經(jīng)元丟失。此外,大腦Treg的耗竭增加癲癇發(fā)作的頻率,并導(dǎo)致慢性TLE模型的行為障礙。有趣的是,腦室內(nèi)注射CCL20可增加腦組織中Treg的表達,從而抑制癲癇發(fā)作[36]?？傊?該研究強調(diào)了癲癇腦組織中Treg的治療潛力。

本研究結(jié)果進一步證實,耐藥性癲癇外周血細胞因子IL-1β、IL-8和IFN-γ水平顯著高于藥物反應(yīng)性癲癇與健康對照組,未用藥癲癇患者IL-1β和IFN-γ水平顯著高于健康對照組。耐藥性癲癇與藥物反應(yīng)性癲癇外周血IL-1β水平變化與局灶性癲癇發(fā)作類型及影像學(xué)結(jié)構(gòu)有關(guān)。雖然CD4+T細胞比例在耐藥性癲癇與藥物反應(yīng)性癲癇中無明顯變化,但耐藥性癲癇患者體內(nèi)與Th17極化相關(guān)的促炎因子IL-1β、Th1極化相關(guān)促炎細胞因子IFN-γ及IL-8水平升高,提示CD4+T細胞可能傾向于促炎表型。既往研究[37-39]報道,難治性TLE或耐藥性癲癇患者外周血中Th17相關(guān)IL-1β表達上調(diào)。此外,血清IL-1β水平與癲癇預(yù)后相關(guān)[40]。有研究[41]證實,IL-1細胞因子系統(tǒng)、IL-6和IL-8參與兒童發(fā)熱性SE,且IL-1RA/IL-6比率可作為為兒童發(fā)熱性SE后急性海馬損傷的潛在生物標志物。最近的研究[42]也證實,耐藥性癲癇患者CD4+T淋巴細胞和NK細胞的IFN-γ水平顯著升高。此外,CD14+單核細胞的IL-1β水平與癲癇的發(fā)作頻率有關(guān),提示外周免疫細胞可能參與了耐藥性癲癇的發(fā)病機制[42]。由效應(yīng)T細胞介導(dǎo)的異常免疫反應(yīng)引起的慢性和過度炎癥最終會導(dǎo)致組織損傷和神經(jīng)元細胞死亡,為了抵消外周和神經(jīng)炎癥反應(yīng),增強Treg有可能成為難治性癲癇的治療靶點。在耐藥性癲癇患者,CD4+CD25highTreg、CD4+CD25highCD127lowTreg與IL-10呈正相關(guān),與癲癇的嚴重程度呈負相關(guān),與其他細胞因子及臨床因素無相關(guān)性。既往研究[43]認為IL-10具有抗氧化及神經(jīng)保護作用,對癲癇發(fā)作可能具有抑制作用。耐藥性癲癇患者血清IL-10水平顯著降低[44],利用前列腺素E2-IL-10軸并靶向轉(zhuǎn)化生長因子-β信號傳導(dǎo)以增強Treg誘導(dǎo)可能為炎癥性癲癇提供重要的治療策略[45]。本研究提示,IL-10在Treg失衡所致的癲癇進展中發(fā)揮重要作用?？傊?耐藥性癲癇Treg比例明顯降低,免疫抑制功能減弱,可能促進具有促炎作用的Th1或Th17細胞功能增強,產(chǎn)生大量的促炎因子,參與了癲癇的進展。因此增強Treg,減輕外周和神經(jīng)炎癥反應(yīng),可能成為耐藥性癲癇潛在的治療靶點。

本研究的局限之一是缺乏耐藥性癲癇CSF樣本,無法根據(jù)外周血中的發(fā)現(xiàn)補充對CNS CSF中T淋巴細胞亞群和細胞因子改變的分析。此外,本研究缺乏一組發(fā)作性疾病非癲癇對照患者(如偏頭痛),并分析與耐藥性癲癇相關(guān)的Treg和細胞因子特征的特異性。

綜上所述,耐藥性癲癇Treg比例明顯降低,并且與癲癇的嚴重程度呈負相關(guān),IL-10參與Treg免疫失衡。耐藥性癲癇患者外周血存在免疫細胞失衡和慢性炎性反應(yīng),而外周免疫失衡可能進一步參與局灶性癲癇的進展,抑制外周免疫炎性反應(yīng)可能是治療耐藥性癲癇潛在的作用靶點。