孫紅艷，高 雋

（咸陽(yáng)市第一人民醫(yī)院婦科，陜西 咸陽(yáng) 712000）

子宮內(nèi)膜癌（Endometrial carcinoma, EC）約占女性生殖道惡性腫瘤的20%～30%，多見(jiàn)于圍絕經(jīng)期和絕經(jīng)后期女性，近年來(lái)有年輕化趨勢(shì)［1］。EC 惡性程度高，易發(fā)生轉(zhuǎn)移，確診時(shí)已為晚期，預(yù)后差，因此及時(shí)診斷、治療具有重要臨床意義。病理評(píng)估結(jié)合影像學(xué)可為診斷EC 肌層浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管生成等提供依據(jù)，尋找與腫瘤發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的生物標(biāo)志物可改善預(yù)后［2］。近年有研究［3］指出，EC進(jìn)展與微RNA（miRNA）有關(guān)。既往研究［4］發(fā)現(xiàn)，miR-205-5p 對(duì)腫瘤抑癌基因有抑制作用，可促進(jìn)多種腫瘤的發(fā)展；而miR-219a-5p 參與了骨肉瘤、乳腺癌等的發(fā)生、轉(zhuǎn)移，可用于腫瘤患者的診斷及預(yù)后評(píng)估。但目前miR-205-5p、miR-219-5p二者對(duì)EC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究擬探討血清miR-205-5p、miR-219-5p 診斷子宮內(nèi)膜癌及預(yù)判淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2019 年2 月到2022 年2 月我院收治的120例EC 患者為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)宮腔鏡、診斷性刮宮檢查符合《子宮內(nèi)膜癌篩查和早期診斷專家共識(shí)》中EC 診斷標(biāo)準(zhǔn)：下腹疼痛、白帶增多、陰道不規(guī)則出血等［5］；②患者及其家屬簽署檢驗(yàn)同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①嚴(yán)重心肝肺腎疾病者；②惡性腫瘤、感染、血液性疾病、自身免疫性疾病者；③術(shù)前行放化療、其他抗腫瘤治療者；④既往子宮手術(shù)史、EC復(fù)發(fā)者。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)同意批準(zhǔn)。

另選取我院同期體檢健康女性100 例為對(duì)照組，納入標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)生殖系統(tǒng)疾病、腫瘤者。

1.2 方法

1.2.1 血清miRNA 檢測(cè)EC組術(shù)前、對(duì)照組體檢時(shí)抽取空腹靜脈血5 mL，3 500 r·min-1離心10 min，取上層血清，放置在-80 ℃凍存。實(shí)時(shí)熒光定量qRT-PCR 檢測(cè)miR-205-5p、miR-219-5p，嚴(yán)格按照Trizol 試劑盒說(shuō)明書(shū)提取細(xì)胞總RNA（美國(guó)Invitrogen 公司）。取2 μL 總RNA 采用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA 濃度、純度。應(yīng)用Prime ScriptTM RT試劑盒（日本Takara公司）行逆轉(zhuǎn)錄，采用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)引物。引物序列miR-205-5p：上游：5′-TCCACCGGAGTCTGTCTCATA-3'；下 游 ：5′-GCTGTCAACGATACGCTACG-3'。miR-219-5p引物序列：上游：5′-ACACTCCAGCTGGGTGATTGTAC-3'，下游：5′-TGGTGTCGTGGAGTCGAACGC-3'，以U6為內(nèi)參：上游：5'-TGGCGGAGGCTAGCTAGTCAGTCG-3'；下游：5'-TGGGGCTAGCTGATCGTAGCTA-3'。均做3個(gè)復(fù)孔，反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性2 min，95 ℃ 20 s，58 ℃ 40 s，共40個(gè)循環(huán)。根據(jù)2-ΔΔCt法量化miR-205-5p、miR-219-5p相對(duì)表達(dá)。

1.2.2 臨床資料收集收集患者年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、病理類型（腺鱗癌/腺癌）、組織學(xué)分級(jí)（G1/G2/G3）、FIGO 分期（Ⅰ～Ⅱ、Ⅲ～Ⅳ）、肌層浸潤(rùn)（≤1/2、＞1/2）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。

1.2.3 血清人附睪分泌蛋白4（HE4）、成分糖類抗原125（CA125）檢測(cè)抽取空腹靜脈血5 mL，4 ℃2 000 r·min-1離心15 min，取上清，-80 ℃凍存。采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CA125、HE4，試劑盒購(gòu)自瑞典康乃格診斷公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)采用SPSS 24.0 進(jìn)行分析，病理類型、組織學(xué)分級(jí)、FIGO 分期、肌層浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比描述，年齡、CA125、HE4、血清miR-205-5p 和miR-219-5p 水平等以表示的定量數(shù)據(jù)采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)比較，血清miR-205-5p 和miR-219-5p 水平對(duì)EC 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)價(jià)值采用受試者工作特征（ROC）曲線評(píng)估，EC 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)因素采用多因素Logistic回歸分析探討。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

2 結(jié)果

2.1 兩組血清miR-205-5p、miR-219-5p、CA125、HE4 水平比較觀察組miR-205-5p、CA125、HE4 水平均高于對(duì)照組，miR-219-5p 低于對(duì)照組（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組血清miR-205-5p、miR-219-5p水平比較/

表1 兩組血清miR-205-5p、miR-219-5p水平比較/

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2.2 血清miR-205-5p、miR-219-5p 水平與子宮內(nèi)膜癌患者病理特征的關(guān)系EC患者血清miR-205-5p、miR-219-5p 水平與病理類型、FIGO 分期、組織學(xué)分級(jí)、肌層浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 血清miR-205-5p、miR-219-5p水平與子宮內(nèi)膜癌患者病理特征的關(guān)系/

表2 血清miR-205-5p、miR-219-5p水平與子宮內(nèi)膜癌患者病理特征的關(guān)系/

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2.3 血清miR-205-5p、miR-219-5p診斷子宮內(nèi)膜癌及預(yù)判淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的臨床價(jià)值血清miR-205-5p、miR-219-5p 診斷EC 的AUC 為0.732、0.746，當(dāng)miR-205-5p＞1.53、miR-219-5p＜0.92時(shí)，敏感度和特異性最高；血清miR-205-5p、miR-219-5p預(yù)判淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的AUC 為0.753、0.787，當(dāng)miR-205-5p＞1.65、miR-219-5p＜0.66 時(shí)，敏感度和特異性最高，見(jiàn)表3。

表3 血清miR-205-5p、miR-219-5p診斷子宮內(nèi)膜癌及預(yù)判淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的臨床價(jià)值

2.4 子宮內(nèi)膜癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移影響因素的多因素Logistic 回歸分析將EC 是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移作為因變量（1=淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，0=無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移），并將年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、病理類型、組織學(xué)分級(jí)、FIGO 分期、肌層浸潤(rùn)、血清miR-205-5p、miR-219-5p、CA125、HE4 等變量作為自變量。多因素Logistics 回歸分析顯示，血清miR-205-5p 高表達(dá)（OR=2.44）、miR-219-5p 低表達(dá)（OR=4.89）為EC 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)因素（P＜0.05），見(jiàn)表4。

表4 子宮內(nèi)膜癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移影響因素的多因素Logistic回歸分析

3 討論

EC 為常見(jiàn)腫瘤類型，起病隱匿、進(jìn)展迅速。近年來(lái)肥胖、高血壓、糖尿病等EC 高危人群數(shù)量升高，故EC 發(fā)病率遞增，防治工作嚴(yán)峻。根據(jù)國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)合會(huì)定義，Ⅲ級(jí)、Ⅳ級(jí)腫瘤會(huì)擴(kuò)散或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，預(yù)后生存率較低［6］。所以完善EC 臨床特征評(píng)估指標(biāo)至關(guān)重要，目前針對(duì)EC 患者主要采用超聲、MRI、血清標(biāo)志物診斷［7］。既往CA125、HE4 聯(lián)合應(yīng)用可診斷EC，但部分子宮良性疾病患者血清CA 125 異常，影響診斷結(jié)果；HE4 的敏感度較低，且受年齡影響［8］。miRNA 為內(nèi)源性非編碼小RNA，轉(zhuǎn)錄后抑制mRNA 翻譯或促進(jìn)mRNA 降解，降低靶基因表達(dá)［9］。既往研究［10］證實(shí)，miRNA與腫瘤細(xì)胞代謝、增殖、凋亡有關(guān)，且在血清等體液中狀態(tài)穩(wěn)定。血清miRNA 取樣簡(jiǎn)便、可重復(fù)檢測(cè)，所以其在腫瘤分期、腫瘤結(jié)局評(píng)估中具有一定的探索價(jià)值。

既往有研究［11］檢測(cè)EC 組織、癌旁組織，發(fā)現(xiàn)miR-103a-3p在EC中呈高表達(dá)，與患者分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤(rùn)深度有關(guān)。miR-219a-5p為新型抑癌基因，可與靶基因特異性結(jié)合，發(fā)揮基因調(diào)控功能［12］。既往有研究［13］發(fā)現(xiàn)，骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移者外周血miR-219-5p 明顯上調(diào)，miR-219-5p 參與肺轉(zhuǎn)移的病理進(jìn)程，其可作為腫瘤診斷與預(yù)后判斷的潛在指標(biāo)。同時(shí)有研究［14］發(fā)現(xiàn)，miR-205-5p 高表達(dá)可作用于抑癌基因上游靶位點(diǎn)，可抑制抑癌基因水平，發(fā)揮腫瘤細(xì)胞分化、增殖、轉(zhuǎn)移調(diào)控作用。但目前二者與子宮內(nèi)膜癌的關(guān)聯(lián)性尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，觀察組血清miR-205-5p 水平高于對(duì)照組，miR-219-5p 低于對(duì)照組（P＜0.05），提示血清miR-205-5p 水平升高、miR-219-5p 水平降低與子宮內(nèi)膜癌發(fā)病有關(guān)。

本研究結(jié)果表明，EC 患者血清miR-205-5p、miR-219-5p 水平與病理類型、FIGO 分期、組織學(xué)分級(jí)、肌層浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），提示miR-205-5p、miR-219-5p 參與EC 發(fā)生發(fā)展。分析其可能機(jī)制：①第10號(hào)染色體缺失性磷酸酶和張力蛋白同源物基因（PTEN）為抑癌基因，起到調(diào)控PI3K/AKT通路、抑制細(xì)胞增殖和遷移的作用。miR-205-5p 可負(fù)調(diào)控PTEN 水平，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖［15］。ESRRG為雌性激素相關(guān)受體，抑制子宮內(nèi)膜細(xì)胞侵襲、增殖，miR-205-5p 可抑制ESRRG 的抑癌作用，發(fā)揮促癌作用［16］。②miR-219-5p 可抑制腫瘤細(xì)胞786-O 增殖、遷移及降低MMP-2 蛋白水平，同時(shí)促進(jìn)P21 蛋白表達(dá)。NIMA 相關(guān)激酶6（NEK6）已被證實(shí)在卵巢癌、肝癌中上調(diào)表達(dá)，NEK6 為miR-219-5p 下游靶基因，miR-219-5p 直接靶向調(diào)控NEK6 表達(dá)，影響EC細(xì)胞增殖、遷移、侵襲［17］。

本研究發(fā)現(xiàn)，血清miR-205-5p、miR-219-5p診斷EC 的AUC 為0.732、0.746，預(yù)判淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的AUC為0.753、0.787，提示血清miR-205-5p、miR-219-5p對(duì)EC 早期診斷、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移預(yù)測(cè)的價(jià)值較高。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移影響手術(shù)病理分期、EC 患者預(yù)后，需行術(shù)前預(yù)測(cè)［18］。而EC 發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，需多指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)提高診斷準(zhǔn)確度。本研究多因素回歸分析顯示，血清miR-205-5p 高表達(dá)、miR-219-5p 低表達(dá)為EC 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)因素（P＜0.05），提示血清miR-205-5p 升高、miR-219-5p 下降是EC 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)因素。對(duì)于血清miR-205-5p 升高或miR-219-5p 下降的子宮內(nèi)膜癌患者需重點(diǎn)考慮其存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能，重點(diǎn)排查與治療。

綜上所述，血清miR-205-5p 在EC 患者血清中呈高表達(dá)，miR-219-5p 呈低表達(dá)，與肌層浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。