田蕓嘉，郭云海，張 儀，朱 丹，李元元，劉 琴

（中國(guó)疾病預(yù)防控制中心寄生蟲(chóng)病預(yù)防控制所（國(guó)家熱帶病研究中心） 國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)寄生蟲(chóng)病原與媒介生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 世界衛(wèi)生組織熱帶病合作中心 國(guó)家級(jí)熱帶病國(guó)際聯(lián)合研究中心，上海 200025）

性別分化通常是由性別決定級(jí)聯(lián)通路上的關(guān)鍵基因、兩性差異表達(dá)基因、發(fā)育相關(guān)基因互作和調(diào)控。昆蟲(chóng)的性別決定是由復(fù)雜的基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)控制的，盡管上游的初始信號(hào)和決定因子部分各物種之間并不保守，變異較大；但最下游都有保守的雙性基因（doublesex，dsx）。Dsx基因具有兩種特征性的結(jié)構(gòu)域：N端保守的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（DM結(jié)構(gòu)域/OD1）以及C末端特異的二聚化結(jié)構(gòu)域（OD2）[1]。Dsx基因最早在果蠅中被解析，它出現(xiàn)在從低等到高等不同動(dòng)物的性別決定基因中[2]。Dsx基因的保守結(jié)構(gòu)預(yù)示了它功能的保守性。最近的研究表明，dsx僅在需要細(xì)胞通過(guò)功能或形態(tài)表現(xiàn)其性別特征時(shí)才表達(dá)，這種dsx表達(dá)的時(shí)空調(diào)控機(jī)制在已研究的所有節(jié)肢動(dòng)物物種（如金小蜂、褐飛虱等）中均有建立，因此，dsx被視為節(jié)肢動(dòng)物性別決定機(jī)制的中心環(huán)節(jié)[3-4]。

據(jù)報(bào)道，在完全變態(tài)的昆蟲(chóng)綱動(dòng)物中dsx基因主要通過(guò)特異性剪接，從而產(chǎn)生雄性和雌性特異性dsx蛋白質(zhì)而實(shí)現(xiàn)性別調(diào)控機(jī)制[5]。例如，dsx基因最早在黑腹果蠅（Drosophilamelanogaster）中發(fā)現(xiàn)（Dmdsx），其在雌雄個(gè)體中都表達(dá)，但受到不同的調(diào)控發(fā)生性別特異的可變剪接，生成雌雄特異的DmdsxF和DmdsxM[6]。Dmdsx的前體mRNA(pre—mRNA)由6個(gè)外顯子構(gòu)成，在外顯子4上存在6個(gè)由13個(gè)核苷酸組成的重復(fù)元件(dsxRE)，該元件是外顯子剪接增強(qiáng)子[6]。在已研究的大多數(shù)雙翅目昆蟲(chóng)中，調(diào)控同源基因dsx的可變剪接的分子機(jī)制與果蠅一樣，例如岡比亞按蚊的dsx基因編碼兩個(gè)選擇性剪接的轉(zhuǎn)錄物，AgdsxF和AgdsxM，控制兩性的分化[7]。鱗翅目可變剪接的機(jī)制與果蠅并不相同，其不含有dsxRE。例如，家蠶（Bombyxmori）的dsx通過(guò)特異性剪接外顯子3和4產(chǎn)生雌性dsxF，特異性剪接外顯子2和外顯子5產(chǎn)生雄性dsxM，而雌性特異性的BmdsxF被證明是其默認(rèn)可變剪接的產(chǎn)物[8]。在鞘翅目中，赤擬谷盜（Triboliumcastaneum）Tcdsx的前體mRNA特異性剪接成三個(gè)雌性剪接體（TcdsxF1、TcdsxF2和TcdsxF3）和一個(gè)雄性特異性TcdsxM剪接體，雌性特異性外顯子和相鄰的內(nèi)含子序列中發(fā)現(xiàn)了可能參與Tcdsx前體mRNA性別特異性剪接的順式調(diào)控元件[9]。在膜翅目中，蜜蜂（Apismellifera）的Amdsx經(jīng)過(guò)可變剪接產(chǎn)生了一種雄性特異的AmdsxM，兩種雌性特異的AmdsxF和一種雌雄共有的AmdsxC，雌性dsx剪接是默認(rèn)的，而雄性剪接體通過(guò)抑制雌性的剪接而產(chǎn)生的，并且其可變剪接受到基因Amfem的調(diào)控[10]。

然而，在對(duì)半變態(tài)的昆蟲(chóng)dsx基因研究結(jié)果表明，其dsx并不存在特異性剪接。例如，半翅目的長(zhǎng)紅錐蝽（Rhodniusprolixus）有三種Rpdsx亞型，一個(gè)雌性特異性dsx（Rpdsx1）和兩個(gè)雄性特異性dsx（Rpdsx2和Rpdsx3），但雌雄的dsx并不存在特異性剪接[11]。煙粉虱（Bemisiatabaci）的dsx基因編碼28個(gè)異構(gòu)體，但其缺乏性別特異性剪接異構(gòu)體[12]。虱目的雌雄人虱均有兩種dsx亞型（Phdsx1和Phdsx2），均在兩性中表達(dá)。這些結(jié)果提示了性別特異性dsx剪接可能出現(xiàn)在昆蟲(chóng)進(jìn)化的早期，而半變態(tài)的兩性之間的dsx異構(gòu)體可能發(fā)生性別特異性剪接的喪失。

目前半變態(tài)的昆蟲(chóng)的dsx性別調(diào)控機(jī)制仍不清楚，因此，本研究分離并鑒定了紅帶錐蝽dsx基因，分析了其在紅帶錐蝽不同發(fā)育階段及雌雄的表達(dá)譜，以期為解析紅帶錐蝽dsx性別調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 紅帶錐蝽飼養(yǎng) 選用飼養(yǎng)于中國(guó)疾病預(yù)防控制中心寄生蟲(chóng)病預(yù)防控制所（國(guó)家熱帶病研究中心）紅帶錐蝽廣東順德株[13]，實(shí)驗(yàn)室傳代14代。紅帶錐蝽卵及各個(gè)發(fā)育期飼養(yǎng)條件均為：溫度（28±1）℃、相對(duì)濕度（70±5）%、恒溫恒濕培養(yǎng)箱中12 h光照和12 h黑暗。飼血每周一次，均為昆明鼠體。

1.2 總RNA 提取和 cDNA 合成 分別收集紅帶錐蝽卵、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ期齡若蟲(chóng)、雌性成蟲(chóng)和雄性成蟲(chóng)。使用QIAGEN公司的RNeasy Mini Kit（No.74104）試劑盒對(duì)樣本進(jìn)行總RNA提取。其中卵、幼蟲(chóng)與成蟲(chóng)均為1只。各樣品總RNA經(jīng)酶標(biāo)儀NanoDrop ND-2000（美國(guó)NanoDrop公司)定量檢測(cè)后，用TaKaRa公司的PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser（Perfect Real Time）逆轉(zhuǎn)錄試劑盒去除基因組DNA并合成cDNA，產(chǎn)物于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 克隆TrdsxB基因的全長(zhǎng)ORF序列 使用Primer Premier 5.0 軟件對(duì)Trdsx進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，得到引物TrdsxBF1與TrdsxBR1（表1），送生工生物工程（上海）股份有限公司合成，并稀釋到10 μmol/mL的濃度備用。以12.5 μL全式金公司的2×EasyTaq?PCR SuperMix、10 μL無(wú)核酸酶滅菌水、0.5 μL模板DNA、1 μL上游引物、1 μL下游引物為標(biāo)準(zhǔn)體系對(duì)Trdsx基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增。所得產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳后切膠回收，使用全式金公司的pEASY?-T1 Cloning Kit進(jìn)行TA克隆。克隆樣品送測(cè)序公司測(cè)序分析。

表1 紅帶錐蝽TrdsxB基因克隆與表達(dá)檢測(cè)參數(shù)與引物信息Table 1 Primers and programs for gene cloning and expression detection of TrdsxB in T.rubrofasciata

1.4TrdsxB序列比對(duì) 在NCBI上導(dǎo)出三種模式動(dòng)物的dsx氨基酸序列：黑腹果蠅（Drosophilamelanogaster,GenBank登錄號(hào)：AHN57219）、長(zhǎng)紅錐蝽（Rhodnius prolixus,GenBank登錄號(hào)：QGB21101）、煙粉虱（Bemisiatabaci,GenBank登錄號(hào)：AWC26116），使用MEGA 6.0軟件進(jìn)行多重氨基酸序列比對(duì)。比對(duì)參數(shù)：空位開(kāi)放（gap opening penalty）15，空位延伸（gap extension penalty）6.66，延遲趨異序30%，蛋白質(zhì)加權(quán)矩陣Gonnet。

1.5 系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)分析 我們選擇昆蟲(chóng)綱下不同目屬的dsx蛋白同系物氨基酸序列建立進(jìn)化樹(shù)，包括蜻蜓目的長(zhǎng)葉異痣蟌（Ischnuraelegans,GenBank登錄號(hào)：XP046401714.1）、稀少追逐蜓（Ladonafulva,GenBank登錄號(hào)：KAG8238589.1），蚤目的貓櫛頭蚤（Ctenocephalidesfelis,GenBank登錄號(hào)：XP026469487.1），蜚蠊目的隱尾蠊（Cryptocercus punctulatus,GenBank登錄號(hào)：BCX65400.1）、德國(guó)小蠊（Blattellagermanica,GenBank登錄號(hào)：QGB21106.1），雙翅目的黑腹果蠅（Drosophila melanogaster,GenBank登錄號(hào)：NP524272.4）、昆士蘭實(shí)蠅（Bactroceratryoni,GenBank登錄號(hào)：AAB99947.1），鱗翅目的家蠶（Bombyx mori,GenBank登錄號(hào)：NP001104815.1）、舞毒蛾（Lymantriadispar,GenBank登錄號(hào)：BAN82532.1）、美鳳蝶（Papiliomemnon,GenBank登錄號(hào)：BAX24553.1）、冬尺蠖蛾（Operophterabrumata,GenBank登錄號(hào)：KOB69684.1），膜翅目的西方蜜蜂（Apismellifera,GenBank登錄號(hào)：NP001128408.1），半翅目的溫帶臭蟲(chóng)（Cimex lectularius,GenBank登錄號(hào)：XP014241968.1）、球蚜（Adelgescooleyi,GenBank登錄號(hào)：XP050436429.1）、葡萄根瘤蚜（Daktulosphaira vitifoliae,GenBank登錄號(hào)：XP050519863.1）。使用MEGA6.0軟件進(jìn)行多重蛋白序列比對(duì)后，使用鄰接法（neighbor-joining，NJ）進(jìn)行類聚分析，Bootstrap法評(píng)估結(jié)果可信度（1000次重復(fù)），以甲殼綱的中國(guó)對(duì)蝦（Penaeuschinensis,GenBank登錄號(hào)：AUT13216.1）作為外群建立進(jìn)化樹(shù)進(jìn)行分析。

1.6TrdsxB在紅帶錐蝽不同發(fā)育階段的表達(dá)水平分析 使用所得的cDNA序列為模板設(shè)計(jì)出qTrdsxBF與qTrdsxBR兩條引物（表1），采用相對(duì)定量的方法對(duì)紅帶錐蝽不同發(fā)育階段的Trdsx基因表達(dá)水平進(jìn)行測(cè)定。實(shí)驗(yàn)使用Bio-Rad C1000熒光定量PCR儀、全式金Green qPCR SuperMix。反應(yīng)體系如下：Green qPCR SuperMix 10 μL、10 mmol/L 正、反向引物各0.5 μL、稀釋10倍的cDNA 1 μL、無(wú)核酸酶滅菌水補(bǔ)足到20 μL。每個(gè)樣品以及陰性對(duì)照做3組平行重復(fù)，另外再做3個(gè)無(wú)模板的陰性對(duì)照。反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)Ct值采用2－△△Ct法進(jìn)行處理，從而定量分析dsx基因在紅帶錐蝽不同時(shí)期的表達(dá)水平，并進(jìn)行LSD多重比較檢驗(yàn)，根據(jù)數(shù)據(jù)作柱形圖。

2 結(jié)果

2.1TrdsxB的鑒定與分子結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 分別以雌雄成蝽cDNA為模板，使用兩條引物對(duì)TrdsxB全序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增并克隆鑒定，根據(jù)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行序列拼接后得到該基因全長(zhǎng)開(kāi)放性讀碼框序列，命名為T(mén)rdsxB，其基因提交GenBank（GenBank登錄號(hào)：OQ168410）。TrdsxB長(zhǎng)度為948 nt，編碼315個(gè)氨基酸。通過(guò)與紅帶錐蝽基因組（GenBank 登錄號(hào)：PRJNA516044）比對(duì)，得到TrdsxB相應(yīng)外顯子和內(nèi)含子的數(shù)目、分布等信息。TrdsxB基因位于12號(hào)常染色體，基因橫跨約30 kb長(zhǎng)度，mRNA由4個(gè)外顯子構(gòu)成（圖1），起始密碼子位于第1個(gè)外顯子，終止密碼子位于第 4 個(gè)外顯子。

圖1 Trdsx基因結(jié)構(gòu)Fig.1 Trdsx gene structure

2.2TrdsxB結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)與其他物種同源蛋白的比較TrdsxB基因的分子排列形式與已知物種的dsx基因分子排列類似，存在一個(gè)與所有Dmrt性別基因共有的保守多聚化結(jié)構(gòu)域（DM）和一個(gè)泛素相關(guān)（ubiquitin-associated，UBA）結(jié)構(gòu)域（圖2）。我們通過(guò)在線motif預(yù)測(cè)工具meme（http://meme.nbcr.net/meme/）分析了TrdsxB基因序列，得到部分motifs，結(jié)果圖見(jiàn)圖2。

圖2 Trdsx蛋白一級(jí)結(jié)構(gòu)圖Fig.2 Primary structure of Trdsx protein

通過(guò)與Dmdsx、Btdsx、RPdsx蛋白比較，我們發(fā)現(xiàn)Trdsx DM結(jié)構(gòu)域中同樣存在較為保守的OD1結(jié)構(gòu)域和一定特異的OD2結(jié)構(gòu)域。其中OD1結(jié)構(gòu)域包含了一個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)（atypical zinc-finger domain）[14]，具有保守的鋅螯合殘基C2H2C4（圖3）。連接OD1與OD2的區(qū)域在同屬半翅目的紅帶錐蝽、長(zhǎng)紅錐蝽、煙粉虱之間較為相近，這個(gè)區(qū)域主要富含精氨酸、亮氨酸與谷氨酸（圖3）。

圖3 紅帶錐蝽、長(zhǎng)紅錐蝽、煙粉虱和黑腹果蠅dsx 蛋白的多重序列比對(duì)Fig.3 Multiple sequence alignment of dsx proteins of T.rubrofasciata,R.prolixus,B.tabaci and D.melanogaster

2.3Trdsx系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)特點(diǎn) 將不同種類昆蟲(chóng)dsx基因編碼的氨基酸挑選出來(lái)并拼接后，以甲殼綱的中國(guó)對(duì)蝦作為外群繪制系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。結(jié)果顯示，半翅目種群與蜻蜓目、蚤目、蜚蠊目、雙翅目、鱗翅目、膜翅目等六個(gè)目屬的進(jìn)化距離均較遠(yuǎn)，其中蜻蜓目與蚤目的進(jìn)化距離較近屬于同一分支。在半翅目中紅帶錐蝽與葡萄根瘤蚜在同一分支中，親緣性較近（圖4）。

圖4 不同昆蟲(chóng)dsx蛋白進(jìn)化樹(shù)Fig.4 Dsx protein phylogenetic tree of different insect species

2.4TrdsxB的表達(dá)特點(diǎn) 使用qTrdsxBF與qTrdsxBR兩條引物，以紅帶錐蝽cDNA作為模板研究紅帶錐蝽TrdsxB基因在不同發(fā)育階段的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，胚胎時(shí)期TrdsxB大量表達(dá)，之后表達(dá)量降低，四期若蟲(chóng)的表達(dá)量最低，然后再逐漸升高。且雄性與雌性之間的表達(dá)量存在差異（圖5）。

圖5 紅帶錐蝽Trdsx不同發(fā)育時(shí)期的相對(duì)表達(dá)量（圖中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差，分別以卵表達(dá)量為基準(zhǔn)）Fig.5 The relative expression of TrdsxB at different developmental stages (the data in the figure is mean±standard error,were based on egg expression)

3 討論

美洲錐蟲(chóng)病，又稱恰加斯病（Chagas disease），是一種由鞭毛體原蟲(chóng)－克氏錐蟲(chóng)引起的人畜共患熱帶病。根據(jù)最新的估測(cè)，目前在拉丁美洲大約有700萬(wàn)人感染美洲錐蟲(chóng)病，有1億人處于風(fēng)險(xiǎn)之中。在最近的幾十年內(nèi)，美洲錐蟲(chóng)病流行病學(xué)發(fā)生重大變化，輸入性的美洲錐蟲(chóng)病在歐洲的許多地區(qū)以及日本、澳大利亞、新西蘭等國(guó)家均有報(bào)道[15-18]，已經(jīng)成為重要的全球性公共衛(wèi)生問(wèn)題。紅帶錐蝽是已記錄的被證實(shí)能自然感染克氏錐蟲(chóng)，是克氏錐蟲(chóng)能在其體內(nèi)定殖的錐蝽之一[19]。在已記錄的151種可傳播美洲錐蟲(chóng)病的錐蝽中，紅帶錐蝽是已知的全球范圍內(nèi)分布最為廣泛的一種錐蝽。近年來(lái)，紅帶錐蝽已被證實(shí)在我國(guó)沿海地區(qū)廣泛分布[20]。最新的研究證實(shí)，紅帶錐蝽不僅可以作為克式錐蟲(chóng)和布氏錐蟲(chóng)的傳播媒介，還可以自然感染T.lewisi和T.conorhini兩種錐蟲(chóng)，且T.lewisi和T.conorhini均可感染人。目前在泰國(guó)、馬來(lái)西亞、巴西、岡比亞、印度等地均有人感染T.lewisi和T.conorhini的病例報(bào)道[21]。另有研究表明，T.lewisi對(duì)人類特異性血清載脂蛋白誘導(dǎo)的錐蟲(chóng)溶解具有天然抵抗力，由此可見(jiàn)紅帶錐蝽傳播的T.lewisi可能是一個(gè)被低估，被忽視的感染人的病原體[21]。目前我國(guó)存在極少量的輸入性錐蟲(chóng)病，未有相關(guān)的本地錐蟲(chóng)病病例出現(xiàn)，但紅帶錐蝽的存在依然給我國(guó)錐蟲(chóng)病的防控增加了許多風(fēng)險(xiǎn)和挑戰(zhàn)。對(duì)紅帶錐蝽的防制無(wú)疑是預(yù)防和控制錐蟲(chóng)病等疾病最有效的措施之一，目前對(duì)病媒的防制主要依賴于殺蟲(chóng)劑的使用，然而過(guò)度和持續(xù)使用殺蟲(chóng)劑導(dǎo)致了昆蟲(chóng)抗藥性的增強(qiáng)，并存在環(huán)境污染的可能[22-24]，因此生物防制是更為適合的方式。隨著生物信息學(xué)的發(fā)展與比較基因組學(xué)的興起，越來(lái)越多的昆蟲(chóng)基因組被報(bào)道，加快了性別調(diào)控機(jī)制研究的步伐[25-26]。通過(guò)同源基因比對(duì)，可以幫助大家快速的找到性別調(diào)控級(jí)聯(lián)通路上同源的關(guān)鍵基因，還可以挖掘新物種中性別調(diào)控通路上其他的侯選關(guān)鍵基因[27-28]。因此，本研究參考已發(fā)布的紅帶錐蝽的全基因組[29]數(shù)據(jù)，對(duì)紅帶錐蝽性別決定基因TrdsxB進(jìn)行了克隆與鑒定。

本研究結(jié)果顯示，TrdsxB中存在4個(gè)外顯子，但并不存在特異性剪接，該結(jié)果與具有多種選擇性剪接模式的雙翅目昆蟲(chóng)（如岡比亞按蚊[30]、果蠅[31]等）、鱗翅目昆蟲(chóng)（如家蠶[32]）以及鞘翅目昆蟲(chóng)（如赤擬谷盜[33]）不同，但與同屬半翅目且雌雄的dsx并不存在特異性剪接的長(zhǎng)紅錐蝽[34]一致。關(guān)于昆蟲(chóng)的性別調(diào)控通路的研究顯示，dsx蛋白擁有共同的氨基端與雌雄特異的羧基端。雌雄共同的氨基端包含DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（DM domain）、中間蛋白寡聚結(jié)構(gòu)域（dimer domain）[35]。本研究所得的TrdsxB也符合這一特征，存在一個(gè)與所有Dmrt性別基因共有的保守多聚化結(jié)構(gòu)域和一個(gè)泛素相關(guān)（UBA）結(jié)構(gòu)域[36]。其中DM結(jié)構(gòu)域包含了一個(gè)具有保守的鋅螯合殘基C2H2C4的鋅指結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)與家蠶中雄性特異性的CCCH型鋅指結(jié)構(gòu)不同[32]，屬于C2H2型，關(guān)于該結(jié)構(gòu)是否屬于能與RNA結(jié)合的特殊鋅指結(jié)構(gòu)還有待研究[37-38]。UBA結(jié)構(gòu)域則是一個(gè)初級(jí)的α螺旋結(jié)構(gòu)，具有三螺旋束結(jié)構(gòu)，是參與泛素介導(dǎo)的蛋白水解的蛋白質(zhì)中常見(jiàn)的序列基序，用于與DNA相互作用。早期胚胎性別決定原始信號(hào)激活級(jí)聯(lián)基因性別特異選擇性剪切，級(jí)聯(lián)基因性別特異產(chǎn)物調(diào)控個(gè)體分化為雄性或者雌性[39]。在對(duì)TrdsxB所預(yù)測(cè)的motifs中存在與卵黃形成相關(guān)的結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域同樣存在于家蠶中，可以激活雌性家蠶的信息素結(jié)合蛋白（pheromone-binding protein,pbp）異性表達(dá)，抑制雄性信息素結(jié)合蛋白特異性基因的表達(dá)[40]，而模式生物果蠅的Dmdsx所編碼的蛋白會(huì)與卵黃蛋白基因（Yp）結(jié)合調(diào)控卵黃蛋白基因的表達(dá)[6]。由此，本研究推測(cè)Trdsx基因與雌性的發(fā)育也許存在更為緊密的關(guān)聯(lián)，這種功能的差異或許與該基因中所存在的卵母細(xì)胞分化功能域相關(guān)。

同時(shí)，RT-PCR結(jié)果顯示，本次研究所得的TrdsxB基因在雌雄兩種成蟲(chóng)中均有表達(dá)，且雌性表達(dá)量高于雄性，提示Trdsx對(duì)紅帶錐蝽的性別具有重要的作用。各個(gè)發(fā)育階段的Trdsx表達(dá)水平結(jié)果顯示，Trdsx在早期胚胎中就出現(xiàn)了表達(dá)且表達(dá)量極高，之后表達(dá)量逐漸降低直到四期若蟲(chóng)后再逐漸升高，同樣的表達(dá)方式也存在于岡比亞按蚊的AngdsxM[30]和煙粉虱的Btdsx[41]中，間接提示dsx可能在早期屬于一種母體基因（maternal gene）。進(jìn)化樹(shù)結(jié)果顯示，本研究所鑒定的TrdsxB與已知的半翅目屬的蚜蟲(chóng)dsx之間具有較高的同源性。由此可見(jiàn)，部分半翅目昆蟲(chóng)的dsx基因能為紅帶錐蝽的Trdsx基因研究提供參考，為后期紅帶錐蝽性別決定機(jī)制的研究指明了方向。

本研究將紅帶錐蝽性別調(diào)控機(jī)制研究的doublesex基因作為突破口，對(duì)其進(jìn)行克隆，同源性分析并通過(guò)定量分析其時(shí)空表達(dá)的差異性，為進(jìn)一步研究紅帶錐蝽性別調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)，進(jìn)而為探索和開(kāi)發(fā)紅帶錐蝽防制策略提供新的思路。