李春勇，呂 瑩，金 靜，王偉榮，王 霞，秦 曙

（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西功能農(nóng)產(chǎn)品檢驗(yàn)檢測(cè)中心 太原 030031）

氟啶胺（Fluazinam）是一種2，6-二硝基苯胺類廣譜殺菌劑，內(nèi)吸活性低，殘效長(zhǎng)[1]，對(duì)馬鈴薯晚疫病、番茄早疫病、辣椒炭疽病、大白菜根腫病等有較好的防治效果[2-4]。雖然氟啶胺已在水稻、大白菜、辣椒、馬鈴薯等作物上登記[5]，但因缺乏小白菜在良好農(nóng)業(yè)規(guī)范（GAP）條件下進(jìn)行的規(guī)范殘留試驗(yàn)數(shù)據(jù)，無法進(jìn)行膳食暴露評(píng)估，氟啶胺在小白菜中的最大殘留限量（MRL）值尚未制定。

國(guó)內(nèi)外關(guān)于氟啶胺的研究主要集中在檢測(cè)方法、殘留行為、膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、加工對(duì)殘留量的影響等方面。目前已報(bào)道的檢測(cè)方法主要有氟啶胺在馬鈴薯[6-8]、人參[9]中的QuEChERS 前處理-超高效液相色譜三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜法，Li 等[10]建立了測(cè)定6 種蔬菜（卷心菜、黃瓜、番茄、白菜、菠菜和西葫蘆）和4 種水果（蘋果、葡萄、柑橘、草莓）中氟啶胺的QuEChERS-液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，李玉霞[11]、龔會(huì)琴等[12]利用高效液相法對(duì)氟啶胺進(jìn)行了分離和定量分析。馬俊[13]、劉亞娟等[14]報(bào)道了植物源性食品及人參中檢測(cè)氟啶胺的氣相色譜法。Guo Yuyu 等[15]、Li 等[16]采用納米簇?zé)晒馓结槣y(cè)定了氟啶胺的含量。Sahu 等[17]用紫外可見分光光度計(jì)和傅里葉變換紅外光譜檢測(cè)蔬菜樣品中氟啶胺類殺蟲劑。已有學(xué)者對(duì)氟啶胺殘留行為及膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估開展了試驗(yàn)研究。葉倩等[18]報(bào)道了氟啶胺在菊花中的殘留消解動(dòng)態(tài)及其風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估；李文希等[19]報(bào)道了氟啶胺在三七中的降解行為及安全性評(píng)價(jià)；李如美等[20]報(bào)道了氟啶胺在馬鈴薯和土壤中的殘留及安全使用評(píng)價(jià)；靖俊杰等[21]利用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分析氟啶胺在冬瓜上的殘留行為；Zhao 等[22]報(bào)道了氟啶胺在柑橘中的消解及膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。康霞麗等[23]研究發(fā)現(xiàn)，在柑橘汁加工過程中，榨汁是降低氟啶胺殘留最有效的過程，殘留加工因子為5.217～5.669。Noh 等[24]采用LC-MS/MS 法分析了氟啶胺在新鮮和加工柿中的消解和殘留規(guī)律。國(guó)內(nèi)外關(guān)于氟啶胺在小白菜中的殘留行為及膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估未見報(bào)道。筆者的研究建立了QuEChERS 前處理與UPLC-MS/MS 相結(jié)合的提取凈化及殘留檢測(cè)方法，對(duì)小白菜中氟啶胺最終殘留量進(jìn)行了檢測(cè)，并對(duì)全國(guó)10 地的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，以期為指導(dǎo)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、保障農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全及制定殘留限量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)地及供試品種 供試物為500 g·L-1氟啶胺懸浮劑，從青島奧迪斯生物科技有限公司購(gòu)買。移栽、施藥、采樣時(shí)間及品種：遼寧省遼陽市，2020 年5 月16 日移栽，2020 年5 月19 日施藥，2020 年6 月12 日采樣，綠秀，由沈陽化工研究院有限公司安全評(píng)價(jià)中心提供；山西省太原市，2020 年6 月10 日移栽，2020 年6 月12 日施藥，2020 年7月13 日采樣，冬秀，由山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全與檢測(cè)研究所提供；河北省石家莊市，2020年10 月15 日移栽，2020 年10 月17 日施藥，2020年11 月4 日采樣，津智30，由石家莊市博生環(huán)境科技有限公司提供；山東省濟(jì)南市，2020 年6 月28 日移栽，2020 年6 月29 日施藥，2020 年7 月16 日采樣，北京新3 號(hào)，由山東省農(nóng)藥科學(xué)研究院提供；安徽省宿州市，2020 年5 月23 日移栽，2020 年5 月25 日施藥，2020 年6 月17 日采樣，精選上海青，由安徽燦留植?？萍加邢薰咎峁?；江蘇省句容市，2020 年5 月11 日移栽，2020 年5 月14 日施藥，

2020 年5 月21 日采樣，上海青，由江蘇恒生檢測(cè)有限公司提供；湖南省長(zhǎng)沙市，2020 年10 月17 日移栽，2020 年10 月19 日施藥，2020 年11 月6 日采樣，白玉，由湖南文譜檢測(cè)技術(shù)研究有限公司提供；廣西省南寧市，2020 年9 月5 日移栽，2020 年9 月7 日施藥，2020 年9 月26 日采樣，甜脆赤葉小白菜，由廣西大學(xué)農(nóng)藥與環(huán)境毒理研究所提供；貴州省貴陽市，2020 年10 月10 日移栽，2020 年10 月12 日施藥，2020 年11 月9 日采樣，遲白菜3 號(hào)，由貴州省無公害植物保護(hù)工程技術(shù)研究中心提供；海南省?？谑?，2020 年6 月1 日移栽，2020 年6 月3日施藥，2020 年6 月25 日采樣，早皇京白菜，由海南特譜農(nóng)業(yè)科技有限公司提供。

1.1.2 試驗(yàn)儀器與試劑 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（沃特世I-Class XEVO TQ-S Micro）、刀式研磨儀（德國(guó)萊馳GM300）、離心機(jī)（艾本德5804 R、5824 R）、多管渦旋振蕩器（萊普特LPD2500）、天平（賽多利斯QUINTIX224-1CN、BS210S）、氟啶胺標(biāo)準(zhǔn)品（Dr.Ehrenstorfer 99.9%）、乙腈（TEDIA?色譜純）、甲酸（Fisher chemical Optima?色譜純）。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 按照《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》[25]設(shè)置試驗(yàn)及對(duì)照區(qū)各50 m2，并設(shè)區(qū)間保護(hù)行。供試藥劑為500 g·L-1氟啶胺懸浮劑。按有效成分1500 g·hm-2施藥，噴藥時(shí)，去掉噴頭，噴淋小白菜根部，藥后立即補(bǔ)噴清水清洗葉面，對(duì)照區(qū)用等量清水處理，采用隨機(jī)法分別于收獲期、收獲期后3 d 采集不少于12 株（至少2 kg）生長(zhǎng)正常且無病害的小白菜樣品。

1.2.2 樣品提取、凈化 小白菜樣品粉碎后稱取10.0 g（精確至0.1 g）于50 mL 離心管中，加入10 mL 乙腈后，加入5.0 g NaCl，于2500 r·min-1下渦旋振蕩10 min，8000 r·min-1離心3 min，取1.5 mL上清液加入盛有142.5 mg MgSO4、20 mg PSA、20 mg GCB 混合劑的2 mL 離心管中，2500 r·min-1渦旋2 min，5000 r·min-1離心2 min。上清液過0.22 μm 有機(jī)微孔濾膜后，取0.5 mL 上清液加入0.5 mL水，混勻，UPLC-MS/MS 測(cè)定。

1.2.3 檢測(cè)條件 色譜條件：Waters ACQUITY UPLC?BEH C18色譜柱（50.0 mm×2.1 mm，1.7 μm），柱溫35 ℃，進(jìn)樣量5.0 μL；流動(dòng)相A 為0.1% 甲酸水溶液，B 為乙腈，梯度洗脫程序見表1，流速0.3 mL·min-1，此條件下氟啶胺的保留時(shí)間為2.83 min。

表1 梯度洗脫程序

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源（ESI+），多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式掃描；毛細(xì)管電壓3.0 kV；錐孔電壓28 V；離子源溫度150 ℃；去溶劑氣及錐孔反吹氣均為高純N2，去溶劑氣溫度400 ℃，碰撞氣為高純Ar，氟啶胺定量離子對(duì)463.0＞397.9，碰撞能16 eV；定性離子對(duì)463.0＞415.9，碰撞能20 eV。

1.2.4 溶液配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 稱取0.010 g（精確至0.000 1 g）氟啶胺標(biāo)準(zhǔn)品，溶于乙腈，配制成1000 mg·L-1氟啶胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，-18 ℃溫度下密封保存。將氟啶胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用乙腈稀釋，依次配制成100、10、1 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液，再以小白菜空白基質(zhì)提取液配制質(zhì)量濃度為0.005、0.010、0.020、0.050、0.100 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.2.5 基質(zhì)效應(yīng)評(píng)價(jià) 筆者的研究采用相對(duì)響應(yīng)值法對(duì)基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)[26]，公式為ME/%=（A/B）×100，式中ME 為基質(zhì)效應(yīng)，A 為基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液響應(yīng)值，B 為乙腈中同濃度標(biāo)樣工作液響應(yīng)值，當(dāng)ME 為80%～120% 時(shí)為弱基質(zhì)效應(yīng)，當(dāng)ME 為50%～80% 或120%～150% 時(shí)為中等基質(zhì)效應(yīng)，當(dāng)ME≤50% 或≥150% 時(shí)為強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)，當(dāng)ME＜100%時(shí)表現(xiàn)為基質(zhì)抑制效應(yīng)，當(dāng)ME＞100% 時(shí)表現(xiàn)為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。

1.2.6 添加回收率試驗(yàn) 在空白小白菜樣品中分別添加0.01、0.10 和5.00 mg·kg-1的氟啶胺標(biāo)準(zhǔn)工作液，按照1.2.2 節(jié)的方法提取、凈化樣品，按1.2.3 節(jié)的條件進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算添加回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.2.7 長(zhǎng)期膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估 根據(jù)《中國(guó)不同人群消費(fèi)膳食分組食譜》[27]確定人群的膳食結(jié)構(gòu)和食品消費(fèi)量。如果國(guó)內(nèi)沒有足夠的膳食調(diào)查數(shù)據(jù)，則優(yōu)先參考世界衛(wèi)生組織全球環(huán)境監(jiān)測(cè)體系食品規(guī)劃（GEMS/Food）項(xiàng)目[28]推薦的聚類食物消費(fèi)量或膳食習(xí)慣相似的國(guó)家及其他國(guó)家的膳食結(jié)構(gòu)和食品消費(fèi)量，或者參考有關(guān)報(bào)道的權(quán)威數(shù)據(jù)。其次，根據(jù)規(guī)范殘留試驗(yàn)中值（STMR/STMR·P）或最大殘留限量（MRL）計(jì)算某種農(nóng)藥國(guó)家估算每日攝入量（NEDI）[27]，依據(jù)膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估數(shù)據(jù)推薦合適的MRL 值[29]。計(jì)算公式如下[30-32]：

式中，STMRi：農(nóng)藥在某一食品中規(guī)范殘留試驗(yàn)中值；STMR·Pi：用加工因子校正的規(guī)范殘留試驗(yàn)中值；Fi：一般人群某一食品的消費(fèi)量；bw：人體重量，中國(guó)人群平均體重以63 kg 計(jì)；RQ：風(fēng)險(xiǎn)概率，當(dāng)RQ≤1 時(shí)，可認(rèn)為殘留量對(duì)一般人群不會(huì)構(gòu)成不可接受的風(fēng)險(xiǎn)，數(shù)值越小，風(fēng)險(xiǎn)越低；ADI：為該農(nóng)藥的每日允許攝入量。

2 結(jié)果與分析

2.1 基質(zhì)效應(yīng)評(píng)價(jià)

在0.005 mg·kg-1時(shí)，ME 為42.9%，表現(xiàn)為強(qiáng)基質(zhì)抑制效應(yīng)；在0.050 mg·kg-1時(shí)，ME 為55.5%，表現(xiàn)為中等基質(zhì)抑制效應(yīng)，需要采用基質(zhì)匹配標(biāo)液法補(bǔ)償基質(zhì)效應(yīng)的影響。

2.2 方法有效性評(píng)價(jià)

在0.005～0.500 mg·kg-1范圍內(nèi)，氟啶胺儀器的響應(yīng)值y（峰面積）與質(zhì)量濃度x（μg·mL-1）呈線形相關(guān)：y=2 000 000x+15 687，R2=0.992 8，氟啶胺定量限為0.01 mg·kg-1。由表2 可知，在0.01、0.10 和5.00 mg·kg-13 個(gè)添加水平下，氟啶胺在小白菜中的平均回收率在105%～108%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在1%～7%，符合農(nóng)藥殘留檢測(cè)要求。

表2 氟啶胺在小白菜樣品中的回收率

2.3 最終殘留量試驗(yàn)

由表3 可知，綜觀10 地的最終殘留試驗(yàn)，以有效成分1500 g·hm-2施藥1 次，收獲期小白菜中氟啶胺的殘留量在＜0.010～0.570 mg·kg-1，STMR 為0.010 mg·kg-1，最高殘留量（HR）為0.570 mg·kg-1；收獲期后3 d 小白菜中氟啶胺的殘留量為＜0.010～0.380 mg·kg-1，STMR 為0.010 mg·kg-1，HR 為0.380 mg·kg-1?？梢姡斋@期后3 d 小白菜中氟啶胺最高殘留量低于收獲期。江蘇句容的殘留量較其他點(diǎn)偏高一些，可能是收獲期采收間隔較短所致（遼寧24 d、山西31 d、河北18 d、山東17 d、安徽23 d、江蘇7 d、湖南18 d、廣西19 d、貴州28 d 和海南22 d）。

2.4 長(zhǎng)期膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

長(zhǎng)期膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估基于中國(guó)居民營(yíng)養(yǎng)與健康狀況監(jiān)測(cè)調(diào)查數(shù)據(jù)，采用STMR 或MRL 值計(jì)算NEDI。由于我國(guó)及CAC 均未制定氟啶胺的ARfD值，因此，筆者的研究?jī)H對(duì)氟啶胺在小白菜中的長(zhǎng)期膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估，將以在臨界良好農(nóng)業(yè)生產(chǎn)規(guī)范（cGAP）條件下獲得的小白菜中氟啶胺的STMR 值作為深色蔬菜的參考限量，按有效成分1500 g·hm2施藥1 次，收獲時(shí)的STMR 值為0.010 mg·kg-1，其他登記作物的STMR 值來源于《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)》制定文本的編制說明。評(píng)估結(jié)果（表4）顯示，由STMR 值計(jì)算的膳食攝入量為0.122 900 mg，對(duì)應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)商為19.5%。因此，氟啶胺在小白菜中的殘留量對(duì)我國(guó)一般人群健康不會(huì)產(chǎn)生不可接受的風(fēng)險(xiǎn)。

表4 氟啶胺的長(zhǎng)期膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

3 討論與結(jié)論

目前，關(guān)于氟啶胺檢測(cè)方法及殘留行為研究主要有液相色譜法[11]、氣相色譜法[13-14]、紅外光譜法[17]及液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[6-10]，其中，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法具有保留時(shí)間短、較高的重現(xiàn)性及準(zhǔn)確度，廣泛運(yùn)用于中藥材[9，19]、蔬菜[8]、水果[10]中氟啶胺含量的檢測(cè)，尚未有氟啶胺在小白菜中殘留量的檢測(cè)方法報(bào)道。筆者的研究采用10 mL 乙腈作為前處理提取溶劑，代替了常規(guī)QuEChERS 方法中二氯甲烷[33]、正己烷[20]等提取溶劑，有機(jī)溶劑用量少[6]，毒性低。固相萃取劑選擇NaCl，替代了常見的無水MgSO4、檸檬酸鈉等混合萃取劑[7]，有利于降低試驗(yàn)成本。在凈化過程中，渦旋、離心時(shí)間短，有助于提高試驗(yàn)效率。氟啶胺在葉菜中的殘留行為報(bào)道較為少見，較多的報(bào)道集中于添加回收檢測(cè)方法研究方面。由筆者研究的殘留結(jié)果可知，在小白菜采收期氟啶胺殘留量仍有檢出現(xiàn)象，收獲期的殘留量整體高于收獲后3 d 的殘留量，隨著采收期的延長(zhǎng)，氟啶胺部分降解，小白菜的生長(zhǎng)也會(huì)對(duì)殘留量有一定的稀釋作用。因試驗(yàn)時(shí)間、作物品種不同，在采收期大致相同時(shí)，河北（18 d）、山東（17 d）、湖南（18 d）、廣西（19 d）的殘留量也有差異，說明最終殘留量受溫度、作物品種的影響較大，小白菜作為常見的蔬菜品種，探索其殘留消解規(guī)律，對(duì)保證農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全具有重要意義。

根據(jù)最終殘留量進(jìn)行膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，氟啶胺在小白菜中的殘留中值為0.010 mg·kg-1，ADI 值為0.01 mg·kg-1bw，普通人群的國(guó)家估算每日攝入量為0.12 mg，占日允許攝入量的19.5%，表明按有效成分1500 g·hm-2劑量在移栽苗或間苗3 d 內(nèi)噴淋（去掉噴頭）小白菜根部，施藥1 次，藥后立即補(bǔ)噴清水，氟啶胺在小白菜中的殘留不會(huì)對(duì)一般人群健康造成不可接受的風(fēng)險(xiǎn)。按照風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果推薦最大殘留限量（MRL）值為2 mg·kg-1，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于GB 2763－2021 中葉菜類蔬菜的MRL 值（菜薹30 mg·kg-1、蕹菜10 mg·kg-1、葉芥菜20 mg·kg-1、蕪菁葉20 mg·kg-1）。因小白菜在實(shí)際生產(chǎn)中無固定的采收間隔期，會(huì)增加膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)，目前，因缺乏相關(guān)毒理學(xué)研究，JMPR、CAC 等均未制定氟啶胺的急性參考劑量（ARfD）值。因此，不斷完善相應(yīng)數(shù)據(jù)，對(duì)精確評(píng)估膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)及進(jìn)一步推薦合理MRL 值具有指導(dǎo)和現(xiàn)實(shí)意義。