周水蓮，白雨曼，謝文婷，黃健佳，邱文粵，龐曉玥，章心婷，唐兆新，蘇榮勝*

(1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，廣州 510642；2.廣州醫(yī)藥研究總院有限公司，廣州 510642)

糖尿病(diabetes mellitus，DM)是一種慢性代謝性疾病[1]，近年來隨著生活水平和醫(yī)療水平的改善，老齡寵物越來越多，寵物糖尿病的發(fā)病率亦呈逐年上升的趨勢。眼病、心臟病等是糖尿病最常見的并發(fā)癥。目前，白內(nèi)障摘除和人工晶體植入手術(shù)是糖尿病性白內(nèi)障的主要治療方法，然而，手術(shù)可導(dǎo)致許多嚴(yán)重的術(shù)后并發(fā)癥，尤其是老年和高血糖情況下[2]。臨床流行病學(xué)和基礎(chǔ)研究均表明氧化應(yīng)激在糖尿病發(fā)病機(jī)制中占有重要地位[3]，白內(nèi)障的形成與脂質(zhì)過氧化和自由基產(chǎn)生過多有關(guān)，從理論上講，抗氧化劑的應(yīng)用應(yīng)成為防治此病，提高機(jī)體健康水平的重要途徑；迄今為止，盡管人們圍繞抗氧化劑進(jìn)行了長期大量的研究和探索，但尚沒有一個(gè)單純的抗氧化劑被臨床證實(shí)可以用于有效治療疾病，抗氧化治療并未獲得預(yù)期的效果。

N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine，NAC)是一種常見的小分子抗氧化劑，易進(jìn)入動(dòng)物機(jī)體進(jìn)行細(xì)胞代謝，在體內(nèi)可脫去乙?；砂腚装彼?，最終合成谷胱甘肽，是機(jī)體生理代謝的重要物質(zhì)[4]。NAC作為一種經(jīng)典的抗氧化劑，能降低機(jī)體細(xì)胞的活性氧，減輕機(jī)體異常的過氧化反應(yīng)[5]，最終有助于維持細(xì)胞正常的生理功能和細(xì)胞形態(tài)。秦淑蘭等[6]探討了NAC對糖尿病模型小鼠氧化應(yīng)激的影響，研究結(jié)果表明NAC可有效改善糖尿病模型小鼠的氧化應(yīng)激狀態(tài)，減輕糖尿病引起的多個(gè)臟器的氧化損傷[7]。但NAC在機(jī)體眼部疾病，特別是糖尿病引起的白內(nèi)障中的作用鮮有報(bào)道。鑒于此，本試驗(yàn)擬將NAC作用于STZ聯(lián)合ALX誘導(dǎo)的1型糖尿病模型比格犬，探討NAC是否參與改善糖尿病犬晶狀體的氧化損傷，為NAC的臨床應(yīng)用提供又一理論支持。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用40只健康2～3歲比格犬，雌雄各半，體重9～13 kg，由廣州醫(yī)藥研究總院有限公司提供。本批次實(shí)驗(yàn)動(dòng)物已獲得實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證(編號：SYXK 粵 2019-0196)，所有動(dòng)物試驗(yàn)程序均經(jīng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，在試驗(yàn)前已通過華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物倫理審查備案。

1.2 主要試劑與儀器

鏈脲佐菌素購自上海源葉生物科技有限公司；四氧嘧啶、NAC購自美國Sigma公司；精蛋白生物合成人胰島素注射液，商品名為諾和靈N(中效)，購自諾和諾德(中國)制藥有限公司。

常規(guī)生化復(fù)合校準(zhǔn)品、生化復(fù)合定值質(zhì)控品均購于深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；Trizol試劑盒、熒光定量試劑盒(SYBR?Premix Ex TaqTMII)和反轉(zhuǎn)錄試劑盒(PrimeScriptTMRT reagent kit with gDNA Eraser)均購自TaKaRa公司；脂質(zhì)氧化物(MDA)檢測試劑盒、谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)檢測試劑盒、谷胱甘肽還原酶(GR)檢測試劑盒(DTNB法)、谷胱甘肽過氧化物酶檢測試劑盒(NADPH法)均購于上海碧云天生物技術(shù)有限公司。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與動(dòng)物飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)犬造模前先適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，將比格犬隨機(jī)分為5組，每組8只，分別為對照組(CON組)、糖尿病模型組(DM組)、胰島素治療組(INS組)、NAC聯(lián)合胰島素治療組(NAC+INS組)和NAC治療組(NAC組)。

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果，確定造模所需的鏈脲佐菌素和四氧嘧啶的劑量。于試驗(yàn)開始當(dāng)日(第1 天)和第4天，通過靜脈注射的方式每組均給予20 mg·kg-1鏈脲佐菌素和20 mg·kg-1四氧嘧啶。此外，對照組靜脈注射相應(yīng)體積的生理鹽水。此后連續(xù)兩周監(jiān)測空腹血糖值，并于試驗(yàn)第10天進(jìn)行胰島素釋放試驗(yàn)，如果連續(xù)兩周測得血糖空腹血糖濃度≥8.30 mmol·L-1或隨機(jī)血糖濃度>11.1 mmol·L-1，則可判定為糖尿病[8]。據(jù)上述兩種試驗(yàn)結(jié)果確定已成1型糖尿病模型后，INS組、NAC+INS組在試驗(yàn)第11天開始給予胰島素，胰島素用量參照說明書，每天2次，于早上09：00和晚上21：00進(jìn)食后進(jìn)行。NAC+INS組和NAC組亦在試驗(yàn)第11天開始，每日早上09：00按30 mg·kg-1的劑量給犬口服NAC。每月記錄犬只體重和空腹血糖。

1.4 胰島素釋放試驗(yàn)

在空腹?fàn)顟B(tài)下，給每只試驗(yàn)犬按照10 mL·kg-1劑量灌喂10%葡萄糖溶液，使血糖升高刺激胰島β細(xì)胞釋放胰島素，通過ELISA的方法測定空腹及服糖后0.5、1、2、3 h的血漿胰島素水平。

1.5 樣品采集與處理

將試驗(yàn)犬只安樂死后，迅速吸取雙眼房水，取200 μL待檢測葡萄糖含量，其余分裝凍存于-80 ℃冰箱待檢。用眼科器械行眼球摘除術(shù)，取出完整的眼球，然后迅速切取少量右眼晶狀體組織用于分子生物學(xué)檢測；切取左眼晶狀體進(jìn)行組織病理學(xué)分析。

1.6 比格犬晶狀體白內(nèi)障的等級測定

在造模第120天時(shí)，使用手持裂隙燈顯微鏡，檢查眼晶狀體，評估晶狀體的分級狀況分別拍攝記錄。

晶狀體混濁的分級如下：透明正常晶狀體(0級)；外周囊泡(1級)；外周囊泡和皮質(zhì)混濁(2級)；彌漫性中央混濁(3級)；和成熟的白內(nèi)障(4級)[9]。記錄每只眼睛等級，每級對應(yīng)相應(yīng)的分?jǐn)?shù)。

根據(jù)裂隙燈檢查結(jié)果，并參照晶狀體混濁分類系統(tǒng)Ⅲ(LOCSⅢ)和Kador等國際分級標(biāo)準(zhǔn)來確定白內(nèi)障分期[9]，共分為Ⅰ～Ⅴ期。分期標(biāo)準(zhǔn)分別為①白內(nèi)障Ⅰ期：散瞳后裂隙燈下可見晶狀體周邊皮質(zhì)出現(xiàn)小囊泡或細(xì)小囊泡群；②白內(nèi)障Ⅱ期：散在小囊泡群開始從赤道部向前極部蔓延，從而在鏡下形成細(xì)環(huán)狀或戒指狀混濁；③白內(nèi)障Ⅲ期：皮質(zhì)部前極有放射狀混濁，呈灰白色，從“Y”形縫蔓延。④白內(nèi)障Ⅳ期：皮質(zhì)部的混濁開始融合，有水裂或新月形投影，混濁區(qū)眼底細(xì)節(jié)不可見；⑤白內(nèi)障Ⅴ期：皮質(zhì)和晶體核均完全變成灰白混濁，眼底完全被遮蔽，細(xì)節(jié)不可見。

1.7 病理切片

將犬晶狀體組織浸泡于4%的多聚甲醛中固定24 h以上，梯度酒精脫水處理，石蠟包埋，待石蠟?zāi)毯笮迚K，然后進(jìn)行晶狀體組織切片(3～7 μm)，之后將置于37 ℃烘片機(jī)上平放烘干8～10 h后備用。將烘片機(jī)溫度調(diào)高至55 ℃烤片2 h，37 ℃復(fù)溫后使用蘇木精和伊紅(H&E)染色、中性樹脂封片，晾干后于顯微鏡下觀察并取圖像記錄。

1.8 抗氧化能力檢測

稱取20 mg晶狀體組織于EP管中，加入0.2 mL裂解液，混勻2 min后勻漿，12 000g離心10 min，取上清用于后續(xù)測定；上清和眼房水用于MDA含量、GSH/GSSG、GSH-Px活性和GR活性的測定。測定過程嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.9 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測晶狀體氧化損傷相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)情況

使用Trizol法提取晶狀體組織總RNA，并反轉(zhuǎn)錄制備cDNA。以β-actin作為內(nèi)參基因，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測晶狀體上皮細(xì)胞氧化損傷相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平，根據(jù)NCBI的GenBank中犬β-actin、SOD2和GRmRNA的基因組序列，應(yīng)用Primer 6.0軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì)。設(shè)計(jì)成功后進(jìn)行合成，引物序列見表1。按SYBR?Premix Ex TaqTMII熒光定量試劑盒說明書進(jìn)行操作。

表1 引物序列Table 1 Reference sequences

1.10 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié) 果

2.1 胰島素釋放試驗(yàn)和血糖圖變化

試驗(yàn)期間空腹血糖曲線如圖1A可見，試驗(yàn)15 d內(nèi)，與CON組血糖一直在正常范圍，而DM組連續(xù)兩周測得血糖空腹血糖濃度≥8.30 mmol·L-1。

A.血糖；B.胰島素。CON.對照組；DM.糖尿病模型組A. Blood glucose；B. Plasma insulin. CON. Control group；DM. Diabetes model group圖1 血糖和血漿胰島素含量曲線Fig.1 Blood glucose and plasma insulin content curves

試驗(yàn)犬血漿胰島素含量變化見圖1B，可見CON組犬血漿胰島素水平在服糖后0.5 h達(dá)高峰，隨后2 h內(nèi)回降至空腹水平；而DM組犬血漿胰島素曲線一直呈低平，無明顯高峰狀態(tài)。

2.2 NAC對1型糖尿病模型犬房水及血液中糖含量的影響

如圖2A所示，與CON組對比，DM組房水中葡萄糖含量有大幅升高，差異顯著(P<0.05)；與DM組對比，NAC+INS組房水中葡萄糖含量呈顯著降低(P<0.05)，而INS組和NAC組房水中葡萄糖含量僅有輕微降低。

A.NAC對房水GLU含量的影響；B.各組不同時(shí)間點(diǎn)血清GLU含量。CON.對照組；DM.糖尿病模型組；INS. 胰島素治療組；NAC+INS. NAC聯(lián)合胰島素治療組；NAC. NAC治療組。同一時(shí)間點(diǎn)中，與CON組相比,*.P<0.05，**.P<0.01，***.P<0.001；與DM組相比,#.P<0.05，##.P<0.01，###.P<0.001。下同A. Effect of NAC on aqueous humor GLU content；B. Serum GLU content at different time points in each group. CON. Control group；DM. Diabetes model group；INS. Insulin treatment group；NAC+INS. NAC combined with insulin treatment group；NAC. NAC treatment group. At the same time point，compared with CON group, *.P<0.05，**. P<0.01，***. P<0.001; compared with DM group, #.P<0.05，##. P<0.01; ###. P<0.001. The same as below圖2 NAC對房水和血清葡萄糖含量的影響Fig.2 Effect of NAC on aqueous humor and serum glucose content

各組試驗(yàn)犬血糖含量變化見圖2B，試驗(yàn)犬在造模前各組間血糖含量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；試驗(yàn)30 d時(shí)，與CON組相比，DM組血糖含量極顯著升高(P<0.001)，與DM組比較，NAC+INS、INS及NAC組中血糖含量均顯著降低(P<0.05,P<0.01或P<0.001)，其中，NAC+INS組下降幅度最大；試驗(yàn)120 d時(shí)，與CON組相比，DM組血糖含量極顯著升高(P<0.001)，與DM組比較，NAC+INS、INS及NAC組中GLU含量均顯著降低(P<0.05,P<0.01或P<0.001)，其中，NAC+INS組下降幅度最大。

2.3 NAC對白內(nèi)障程度的影響

各試驗(yàn)組犬在造模120 d時(shí)對晶狀體進(jìn)行裂隙燈檢查照片，圖3為從試驗(yàn)組犬中挑選1只最具代表性的進(jìn)行展示。造模4個(gè)月后，CON組和NAC+INS組晶狀體呈清晰、正常狀態(tài)為0級；DM組和INS組試驗(yàn)犬皮質(zhì)部的混濁開始融合，有水裂，混濁區(qū)眼底細(xì)節(jié)不可見，彌漫性中央混濁，可分為白內(nèi)障Ⅳ期，3級；NAC組試驗(yàn)犬散瞳后皮質(zhì)部前極有放射狀混濁，呈灰白色，從“Y”形縫蔓延外周囊泡和皮質(zhì)混濁，可分為Ⅲ期，2級。

圖3 裂隙燈檢查圖片F(xiàn)ig.3 Slit-lamp examination pictures

綜合兩種分級標(biāo)準(zhǔn)對病變進(jìn)行描述，記錄結(jié)果如表2。DM組白內(nèi)障評分顯著高于CON組(P<0.01)；NAC+INS組評分顯著低于DM組(P<0.01)。

表2 白內(nèi)障等級評估表Table 2 Cataract grade assessment table

2.4 NAC對眼睛病理組織學(xué)的影響

從圖4可以看出，CON組和NAC+INS組的晶狀體上皮細(xì)胞(LECs)排列整齊，大小均一，細(xì)胞間連接緊密，胞間空隙均勻，核呈圓形又大，且染色均勻，與前囊膜連接緊密；然而，DM組LECs間隙不均勻，細(xì)胞大小不均，細(xì)胞核數(shù)量減少且部分出現(xiàn)核固縮，有壞死小體(箭頭所示)，且前囊膜連接疏松，染色過程中前囊膜脫離，圖中所見為厚切之后多層LECs裸露在表面；經(jīng)NAC或胰島素單獨(dú)治療的組中LECs胞間連接較為緊密，病變情況有所改善，但細(xì)胞核形態(tài)不均一，且與前囊膜連接也出現(xiàn)縫隙，治療效果不及NAC+INS組。此外，5個(gè)組的晶狀體內(nèi)部淺皮質(zhì)區(qū)和深皮質(zhì)區(qū)，成熟的晶狀體纖維排列和走向均整齊，無明顯病變，INS組和NAC組由于染色過程出現(xiàn)裂紋，其纖維結(jié)構(gòu)未出現(xiàn)明顯變化。

左列為HE染色，200×；中間列為左列的放大；右列為晶體深皮質(zhì)區(qū)。箭頭指示細(xì)胞核The left column is HE staining, 200×; The middle column is a larger version of the left column; The right column is the deep cortex of the crystal. The arrow indicates the nucleus圖4 晶狀體組織病理學(xué)切片圖(HE染色，200×)Fig.4 Histopathological section of lens (HE staining，200×)

2.5 NAC對晶狀體上皮細(xì)胞抗氧化指標(biāo)的影響

NAC對晶狀體上皮細(xì)胞抗氧化指標(biāo)的結(jié)果如圖5所示，與CON組相比，DM組的晶狀體上皮細(xì)胞內(nèi)MDA含量顯著升高(P<0.05)、GSH/GSSG和GSH-Px活性均顯著下降(P<0.05)、GR活性下降(P>0.05)；而與DM組相比，NAC+INS組中晶狀體上皮細(xì)胞內(nèi)MDA含量顯著下降(P<0.05)、GSH/GSSG和GSH-Px活性顯著上升(P<0.05)、GR活性極顯著上升(P<0.01)，表明NAC聯(lián)合胰島素治療可抑制DM犬晶狀體上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激。

圖5 NAC對晶狀體上皮細(xì)胞抗氧化指標(biāo)的影響Fig.5 Effect of NAC on antioxidant index of lens epithelial cells

2.6 NAC對房水中抗氧化指標(biāo)的影響

NAC對房水中抗氧化指標(biāo)的結(jié)果如圖6所示，在造模第120天，與CON組相比，DM組的房水中MDA含量極顯著升高(P<0.01)，而GSH/GSSG、GR活性和GSH-Px活性均極顯著下降(P<0.01)；與DM組相比，NAC+INS組房水中MDA含量下降(P>0.05)、GSH/GSSG極顯著上升(P<0.001)、GR活性和GSH-Px活性極顯著上升(P<0.05)，表明NAC聯(lián)合胰島素治療可降低DM犬房水中氧化應(yīng)激水平。

圖6 NAC對房水中抗氧化指標(biāo)的影響Fig.6 Effect of NAC on antioxidant indexes in aqueous humor

2.7 NAC對晶狀體上皮細(xì)胞氧化損傷相關(guān)基因表達(dá)的影響

NAC對晶狀體上皮細(xì)胞氧化損傷相關(guān)基因表達(dá)量變化如圖7所示，與CON組對比，DM組的GR和SOD2mRNA表達(dá)水平明顯上調(diào)，且差異顯著(P<0.05)；而與DM組對比，NAC+INS組GR和SOD2mRNA表達(dá)水平上調(diào)，但差異不顯著(P>0.05)，表明NAC聯(lián)合胰島素治療可進(jìn)一步增加抗氧化相關(guān)基因的表達(dá)量。

圖7 NAC對晶狀體上皮細(xì)胞氧化損傷相關(guān)基因表達(dá)量的影響Fig.7 Effect of NAC on expression of oxidative damage-related genes in lens epithelial cells

3 討 論

為了研究糖尿病性白內(nèi)障發(fā)病機(jī)制，篩選保護(hù)藥物并探索其作用機(jī)理，建立合適的試驗(yàn)性糖尿病白內(nèi)障動(dòng)物模型具有重要意義[10-11]。運(yùn)用對胰島β細(xì)胞有毒性的化學(xué)物質(zhì)ALX和STZ對試驗(yàn)比格犬進(jìn)行造模。在本試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，5個(gè)組呈現(xiàn)的血清和房水的GLU變化趨勢是一致的，表明用血清和房水中任何一種來作為測量房水葡萄糖含量都是可行的，但是血清中測量的葡萄糖含量變化差異性要高于房水，說明臨床中如果要為眼部患畜做診斷，若選擇檢測血清去推測房水葡萄糖，那么房水中的葡萄糖含量會(huì)被高估。張志鵬[12]研究表明，犬糖尿病性白內(nèi)障模型分級形成時(shí)間分別為C1：30 d左右；C2：60 d左右；C3：150 d左右；C4：180 d左右；C5：240 d左右。本試驗(yàn)中所監(jiān)測到的空腹血糖水平均表明已建成1型糖尿病模型。成模120 d后進(jìn)行散瞳，可見DM組中犬晶狀體皮質(zhì)部的混濁開始融合，有水裂，即為白內(nèi)障Ⅳ期，與張志鵬[12]研究結(jié)果相一致。有研究表明，與非糖尿病患者相比，即使血糖水平降低至機(jī)體正常范圍內(nèi)，波動(dòng)也較小，DM患者的白內(nèi)障發(fā)生可能性還是沒有顯著降低[13-14]。本試驗(yàn)中INS組血糖水平較NAC組控制更好，但是裂隙燈結(jié)果中INS組比NAC組白內(nèi)障等級要更高，說明只用胰島素，可以有效控制血糖，但不能延緩糖尿病性白內(nèi)障的發(fā)展。本研究結(jié)果表明，NAC聯(lián)合胰島素治療，可以有效延緩晶狀體混濁的發(fā)生發(fā)展。

有研究表明，氧化應(yīng)激是白內(nèi)障的致病因素，與正常個(gè)體相比，從復(fù)雜性白內(nèi)障患者獲得的房水樣品的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物濃度增加[15]。據(jù)報(bào)道STZ和ALX是通過氧化應(yīng)激對β細(xì)胞造成損傷[16]。Boarescu等[17]研究表明，1型糖尿病可降低機(jī)體的總抗氧化能力。另有研究表明，STZ誘導(dǎo)的DM大鼠氧化應(yīng)激水平升高，提示高糖可觸發(fā)氧化應(yīng)激，與對照組相比，DM組大鼠的血清，MDA含量明顯增加[18]。本試驗(yàn)中首先采用ELISA試劑盒對各組試驗(yàn)犬的房水、晶體組織進(jìn)行機(jī)體氧化應(yīng)激指標(biāo)的檢驗(yàn)，研究結(jié)果與上述學(xué)者所得一致。與CON組對比，在兩種樣本中DM組的犬晶體上皮的MDA含量升高，GSH-Px活性、GR活性和GSH/GSSG含量均呈不同程度的增加。說明運(yùn)用SLX聯(lián)合STZ造模會(huì)使試驗(yàn)犬機(jī)體氧化應(yīng)激水平升高。房水中各氧化應(yīng)激指標(biāo)降低幅度很大，與CON組對比差異極顯著，而同樣條件下，在晶體組織中檢測結(jié)果差異顯著性更小?？赡苁蔷铙w酶類抗氧化劑從細(xì)胞內(nèi)核糖體被制造，通過細(xì)胞膜擴(kuò)散至細(xì)胞外液，分布在全身各個(gè)組織中，所以細(xì)胞代謝功能越活躍的器官，抗氧化酶濃度越高，越容易檢測到，而房水是由睫狀體某些上皮細(xì)胞產(chǎn)生，而晶狀體上皮細(xì)胞只有單層，數(shù)量較少，且晶狀體囊膜形成一層屏障，房水中與晶狀體上皮細(xì)胞的抗氧化酶濃度與活力存在梯度，所以房水中比晶體組織中檢測的氧化應(yīng)激指標(biāo)顯著性差異更大。

黃酮苷可以抑制糖尿病性白內(nèi)障小鼠中LECs的氧化應(yīng)激水平，顯示GSH-Px、T-SOD活性全部都低于陰性對照組(P<0.05或P<0.01)，提示高糖對LECs表現(xiàn)出明顯的氧化應(yīng)激[19]，而高劑量黃酮苷治療組與高糖組對比GSH-Px、T-SOD活性顯著升高[20]。DL-丁基苯酞對STZ誘導(dǎo)的糖尿病性白內(nèi)障大鼠血清MDA含量比模型組顯著降低[21]。本試驗(yàn)對DM組和其他治療組犬房水和晶體組織中的各氧化應(yīng)激因子水平進(jìn)行了對比，研究結(jié)果顯示，與DM組相比較，NAC+INS組的MDA含量在兩種樣本中均降低；所有已測的抗氧化酶活力和GSH/GSSG在兩種樣本中均呈不同程度的升高，與前人研究結(jié)果相一致，表明NAC聯(lián)合胰島素治療可抑制DM犬氧化應(yīng)激，其中，晶體組織中GSH-Px、GR活力和GSH/GSSG的升高程度與DM組對比有顯著差異，且MDA含量也顯著升高，同時(shí)在房水中僅有GSH-Px、GR活力的升高程度與DM組對比有顯著差異，說明在晶狀體酶系抗氧化劑中以GSH-Px和GR為主。而且通過比較兩種樣本，INS組和NAC+INS組可改善氧化應(yīng)激水平，且NAC+INS組比INS組表現(xiàn)更佳，說明NAC聯(lián)合胰島素治療與單獨(dú)使用胰島素治療相比，在抑制糖尿病性白內(nèi)障犬氧化應(yīng)激方面可取得更好的效果。Takahashi等[22]研究表明，T1D患者中與氧化應(yīng)激有關(guān)的基因?yàn)樯险{(diào)，本研究中，DM組的SOD2和GR基因相對表達(dá)水平相較于CON組也有顯著性升高，與Takahashi等[22]的研究結(jié)果相一致。而各治療組相較于DM組均有不同程度上調(diào)，其中，NAC組的SOD2基因相對表達(dá)水平與DM組對比有顯著性上調(diào)(P<0.05)；與INS組相比，NAC+INS組和NAC組上調(diào)程度更高，說明只要發(fā)生糖尿病，那么機(jī)體內(nèi)氧化應(yīng)激基因均出現(xiàn)上調(diào)，而NAC作為抗氧化劑，也可能對氧化應(yīng)激有關(guān)的基因有激活作用，其具體機(jī)制有待進(jìn)一步探究。

4 結(jié) 論

NAC聯(lián)合胰島素治療能改善1型糖尿病犬的血糖、晶狀體功能，比單獨(dú)使用胰島素組的效果更好。NAC聯(lián)合胰島素治療對糖尿病犬晶狀體上皮損傷的保護(hù)作用，可能和抑制晶狀體的氧化應(yīng)激有關(guān)。