王中軍，張海平,任立晟，張少燕，王盼，初開秋

(青島大學附屬醫(yī)院檢驗科，山東 青島 266003)

目前臨床生化測定血清鈣主要以偶氮砷Ⅲ法檢測為主。該法以特異性好、線性范圍廣、抗干擾能力強、速度快、對儀器污染小等優(yōu)點，成為實驗室全自動生化分析儀測定血清鈣的常用方法。華氏巨球蛋白血癥(WM)又稱為原發(fā)性巨球蛋白血癥，是一種B淋巴細胞起源的惡性增殖性疾病，以合成和分泌大量的單克隆IgM以及骨髓中出現(xiàn)淋巴樣漿細胞為特征[1]。本實驗室在日常工作中觀察到，WM病人應用偶氮砷Ⅲ法濕化學方法檢測血清鈣結(jié)果異常增高，甚至出現(xiàn)危急值(>3.5 mmol/L)，而經(jīng)與臨床醫(yī)生溝通發(fā)現(xiàn)病人并沒有高鈣的現(xiàn)象。為進一步探討其原因和解決方法，本研究進行了如下試驗?，F(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

2016—2021年到本院就診，根據(jù)臨床表現(xiàn)、免疫分型電泳、骨髓組織活檢等臨床檢查，并排除意義未明的單克隆丙種球蛋白病及其他B淋巴細胞增殖性疾病[2-3]，臨床確診為WM病人15例，臨床上均排除甲狀旁腺功能亢進及其他惡性腫瘤。另選取健康人15例作為對照。

1.2 檢測方法

采集WM病人和健康對照者的空腹靜脈血各5 mL，置離心機中分離血清，轉(zhuǎn)速為3 000 r/min，分離時間為15 min。分離出血清各約3 mL，取其中2 mL分別使用日本日立7600型全自動生化分析儀和美國強生Vitros-3500全自動干化學分析儀進行血清鈣水平檢測；另外的1 mL血清，則使用德國西門子公司Dade Behring BNⅡ免疫生化分析儀測定IgM含量。

1.3 統(tǒng)計學分析

2 結(jié) 果

2.1 WM病人及健康對照者干、濕化學法所測血清鈣水平比較

本文15例WM病人采用濕化學法和干化學法所測血清鈣水平分別為(6.34±1.88)和(2.30±0.24)mmol/L，差異有顯著性(t=8.6，P<0.01)；15例健康對照者采用濕化學法和干化學法所測血清鈣水平分別為(2.32±0.08)和(2.30±0.09)mmol/L，差異無顯著性(t=0.5，P>0.05)。

2.2 WM病人與健康對照者血清IgM含量比較

本文15例WM病人血清IgM含量為(42.77±23.64)g/L，遠大于本室參考范圍(0.4～2.3 g/L)，與15例健康對照者血清IgM含量(1.32±0.42)g/L比較，差異具有統(tǒng)計學意義(t=6.6，P<0.01)。

3 討 論

全國大部分臨床生化實驗室采用全自動生化分析儀測定血清鈣，檢測方法主要以偶氮砷Ⅲ法為主，其優(yōu)點是特異性好、線性范圍廣、抗干擾能力強、速度快、對儀器污染少。目前研究報道血清鈣測定的干擾因素較少，檢驗學者的共識為嚴重脂血標本可以造成鈣檢測正干擾，某些抗凝劑如草酸鹽、檸檬酸鹽和乙二胺四乙酸(EDTA)可以造成負干擾。而關于大分子蛋白干擾濕化學法檢測血清鈣的研究報道很少[4]。本實驗室觀察到，WM病人采用濕化學法檢測血清鈣出現(xiàn)結(jié)果異常增高的現(xiàn)象，甚至出現(xiàn)危急值，而標本非嚴重脂血標本。報告危急值后經(jīng)與臨床醫(yī)生溝通，顯示病人并沒有高鈣血癥的現(xiàn)象，即臨床上并沒有出現(xiàn)疲倦、軟弱、乏力、煩渴、尿頻等癥狀。這種假性高鈣現(xiàn)象引起檢測人員的關注，本研究旨在分析其原因。

人體中血鈣有兩種存在形式，即非擴散鈣和擴散鈣，前者指與蛋白質(zhì)主要是清蛋白結(jié)合的鈣，后者是離子鈣。高鈣血癥是由于過多鈣進入細胞外液，超過了細胞外液鈣濃度調(diào)節(jié)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)能力[5]。其最常見的原因是原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進和惡性腫瘤造成甲狀旁腺激素水平過高，過多的甲狀旁腺激素既有促進溶骨作用又可促進維生素D的活化，間接促進腸管對鈣的吸收，從而導致高鈣血癥[6-7]；惡性腫瘤細胞可以分泌破骨細胞激活因子，這種多肽因子能激活破骨細胞，也能引起高鈣血癥[8]。而本研究15例WM病人臨床上均排除了甲狀旁腺功能亢進及惡性腫瘤等引起高鈣血癥的因素，15例病人也沒有出現(xiàn)疲倦、軟弱、乏力、煩渴、尿頻等高鈣現(xiàn)象，說明實驗室檢測結(jié)果受到干擾。

繼續(xù)查找原因發(fā)現(xiàn)這種假性高鈣現(xiàn)象多發(fā)生于WM病人，其免疫分型電泳均為IgM型。進一步檢索文獻發(fā)現(xiàn)，1997年JOHN等[9]對2例巨球蛋白血癥病人進行血清鈣測定，采用不同的檢測方法得到不同的結(jié)果。其中1例病人使用偶氮砷Ⅲ顯色法測定血清鈣水平為3.02 mmol/L，使用原子吸收法測定血清鈣水平為2.49 mmol/L，采用鄰-甲酚酞絡合酮比色法測定血清鈣水平為2.46 mmol/L。分析不同檢測方法結(jié)果有差異的原因，可能是由于IgM型M蛋白在弱酸性環(huán)境中(偶氮砷Ⅲ所致)產(chǎn)生沉淀，造成血清鈣結(jié)果的假性增高。而改用鄰-甲酚酞絡合酮比色法測定可以避免假性高鈣結(jié)果的產(chǎn)生，因為鄰-甲酚酞絡合酮比色法是在堿性環(huán)境中反應的，不會產(chǎn)生沉淀[10]。BECKMAN公司也注意到了這種干擾因素，在CX7分析手冊中提到：“異常免疫球蛋白合成，如多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、重鏈病等有可能影響偶氮砷Ⅲ法檢測結(jié)果”。目前有一些改進檢測方法是在堿性緩沖液中進行反應，可供參考使用。

本研究結(jié)果顯示，15例WM病人采用濕化學法所測血清鈣假性升高，且WM病人血清IgM含量明顯高于健康對照者，差異具有統(tǒng)計學意義?？紤]WM屬于B細胞淋巴瘤，骨髓中漿細胞樣淋巴細胞浸潤，并伴有外周血單克隆IgM異常增高[11]，病人血中的異常單克隆M蛋白分子可能結(jié)合鈣離子發(fā)生反應形成沉淀，從而干擾比色反應的檢測，導致結(jié)果的假性增高，表明濕化學法檢測血清鈣濃度主要受大分子M蛋白的影響[8]。

干化學法采用多層薄膜的固相試劑技術，其試劑條的分布擴散層能過濾大分子蛋白[12]。所以即使IgM的分子量大于10萬，但是經(jīng)過濾后，該法檢測血清鈣也不會受到干擾而出現(xiàn)假性增高。

既往有文獻報道，這種引起血鈣假性增高疾病的免疫分型為IgG型[13]。這與本研究發(fā)現(xiàn)的免疫分型均為IgM型不符。由于WM病例罕見，對血清鈣檢測產(chǎn)生正干擾的原理也不明確，故國內(nèi)文獻少有報道[4,14]。本研究病例數(shù)也較少，尚需要繼續(xù)積累病例進一步研究。

在臨床工作中若遇到無癥狀高鈣血癥時，應檢查病人有無巨球蛋白血癥，若血清IgM明顯增高，要警惕這種高鈣現(xiàn)象可能是假性高鈣。可以采用干化學法測定排除假性高鈣。有文獻報道，先采用聚乙二醇沉淀大分子免疫球蛋白，再測定上清液中的鈣含量，可以證明有無假性高鈣[15]。也可采用在堿性環(huán)境中反應的方法如鄰-甲酚酞絡合酮比色法測定，但是此種方法因為涉及重金屬物質(zhì)污染環(huán)境，目前已被淘汰[16-17]。

綜上所述，當WM病人出現(xiàn)高鈣血癥與臨床表現(xiàn)不相符時，應考慮到異常蛋白的影響?？梢圆捎媚苋コ∪搜逯写蠓肿拥鞍椎姆椒z測血清鈣，從而為臨床提供真實、可靠的檢驗結(jié)果，防止臨床誤診、誤治。