劉心怡，劉佳琪，陳家琪，譚麗萍，宮啟翔，李道勁，韋丁賢，宋立華，何 誠

（1. 中國農(nóng)業(yè)大學 動物醫(yī)學院，北京 100193; 2. 廣西園豐牧業(yè)集團，廣西 靈山 535418;3. 北京化工大學 生命科學與技術學院，北京 100000）

2021年7月1日，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部提出家禽飼養(yǎng)禁止使用抗菌素添加劑，中獸藥添加劑可以用于飼料添加，這對集約化養(yǎng)殖家禽提出了新的技術挑戰(zhàn)。因此，新型中獸藥添加劑研制和開發(fā)可為家禽健康養(yǎng)殖提供技術支撐[1?4]。大黃素甲醚作為蒽醌類化合物，分布廣泛，在蓼科、豆科、唇形科、菊科、蘭科、薔薇科的許多植物中都可以提取到。蒽醌類化合物具有抗菌消炎、抗病毒、抗癌、抗氧化、利尿、止血等藥理作用，其中抗菌作用效果顯著[5]。蒽醌類化合物對多種植物源性細菌和真菌都起到抑制甚至殺滅的作用，其抗菌機理主要是抑制菌體糖及糖代謝中間產(chǎn)物的氧化和脫氫過程，并與DNA結(jié)合，干擾其模板功能，抑制蛋白質(zhì)和核酸合成[6]。BALB/c小鼠骨髓細胞體外試驗顯示大黃素刺激導致TNF-α、IL-6、IFN-γ的表達量增加，從而增強巨噬細胞殺傷布魯氏菌的能力[7]。大黃素甲醚是大黃內(nèi)生菌的次生代謝產(chǎn)物，可以干擾真菌細胞壁物質(zhì)合成，使真菌芽管及菌絲體膨大、破裂，導致真菌細胞內(nèi)容物瀉出而死亡；還可以抑制孢子生成，從而起到防治植物病害的作用[8?13]。大黃素不僅通過抑制血管的新生來抑制腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，還可通過誘導腫瘤細胞的凋亡，抑制腫瘤細胞的增殖，以發(fā)揮抗癌作用[14?16]。此外，大黃素甲醚在腦細胞保護、改善損傷腦組織方面具重要作用[17]。動物模型證明大黃素甲醚對小鼠抑郁癥有治愈作用[18]。

大黃素甲醚作為一種新型植物源性殺菌劑，廣泛應用于防治植物病害，對白粉病、霜霉病、灰霉病、炭疽病有很好防治效果，但在家畜疾病防治應用方面未見報道。大黃素甲醚具有較高的抑菌活性，筆者推測其可能對防治畜禽養(yǎng)殖細菌病和真菌病有一定的作用。本研究選取采食正常、產(chǎn)蛋率和體質(zhì)量相近的、健康的土種蛋雞，飼喂大黃素甲醚，研究其對產(chǎn)蛋高峰期土種雞死淘率和生產(chǎn)性能的影響，旨在探索大黃素甲醚潛在的臨床應用用途，為選定土種雞抗菌素替代添加劑提供技術支撐和保障。

1 材料與方法

1.1 試驗動物在廣西園豐集團靈山香雞核心示范區(qū)雞舍，選采食正常、產(chǎn)蛋率和體質(zhì)量相近的、健康的31周齡廣西麻雞（品系為土1.5種產(chǎn)蛋雞）2 250只作為試驗材料。

1.2 試驗藥物大黃素甲醚，有效成分>50%，批號20190910，由中國農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院配置。牛至油對照添加劑(商品名：奧來可): 含量10%，由河北威遠生化有限公司贈送，批號21072902。

1.3 試驗設計試驗采用單因子完全隨機區(qū)組設計，將2 250只靈山土雞隨機分為6組，每組450只雞，包括4個大黃素甲醚處理組、1個牛至油對照組和1個空白對照組，飼喂大黃素甲醚14 d。4個大黃素甲醚處理組分別在每日基礎日糧中加入400、800、1 000和1 200 mg·kg?1大 黃 素 甲醚，牛至油處理組在每日基礎日糧中加入牛至油500 mg·kg?1，空白對照組雞飼喂基礎日糧。

1.4 基礎日糧組成及營養(yǎng)水平土種雞基礎日糧組成（風干基礎）原料見表1。土種雞基礎日糧營養(yǎng)成分（風干基礎）為代謝能、蛋白、鈣、有效磷和賴氨酸，營養(yǎng)水平分別為2 750 MJ·kg?1、16.50%、3.00%、0.36%和0.86%。

表1 土種雞基礎日糧組成

1.5 飼養(yǎng)管理選取半開放式雞舍，內(nèi)置3層立體籠架，每籠養(yǎng)殖3只雞。試驗用雞飼養(yǎng)管理仍遵循原雞舍本土種蛋雞日常飼養(yǎng)管理程序。雞舍中采用自動照明控制系統(tǒng)，每天16 h補光，光照強度為14 lx。雞舍采用環(huán)控系統(tǒng)，舍內(nèi)溫度控制在14～15 ℃，相對濕度控制在40%～70%。干粉飼料由料機每日定量投放于食槽，每天喂料2次，人工手動勻料4次。采用乳頭式水線飲水器，雞群自由飲水。每天上午3次，下午2次人工撿蛋。每天帶雞消毒，上午下午各1次，每天更換糞帶。試驗期間，雞群仍按照正常免疫程序，由專人進行防疫工作。

1.6 死淘率統(tǒng)計

式中，C為死淘率，X表示不同時間段處理組和未處理組死亡雞只總數(shù)，Y表示測試雞只數(shù)。

1.7 種蛋性能測定記錄每天產(chǎn)蛋數(shù)（包括軟殼蛋、破殼蛋）、蛋質(zhì)量、死亡雞數(shù)、種蛋入孵數(shù)。最后計算出產(chǎn)蛋率。

式中，L為產(chǎn)蛋率，X表示各處理組和未處理組每天產(chǎn)蛋數(shù)，Y表示存欄母雞數(shù)。

式中，S為合格種蛋率，X表示各處理組和未處理組每天合格種蛋數(shù)量，Y表示全部產(chǎn)蛋數(shù)量。

式中，A為平均蛋質(zhì)量/ g，X表示各處理組&未處理組每天產(chǎn)蛋質(zhì)量，Y表示產(chǎn)蛋數(shù)。

式中，F(xiàn)為種蛋受精率，X表示處理組和未處理組每天合格種蛋入孵數(shù)，Y表示各處理組每天合格種蛋數(shù)量。

1.8 數(shù)據(jù)處理本試驗所有數(shù)據(jù)均用均值±標準差表示，利用GraphPad Prism 8軟件包中單因素方差分析(One-way ANOVA)進行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析，以P<0.05作為差異顯著性判斷標準。

2 結(jié)果與分析

2.1 大黃素甲醚對土種產(chǎn)蛋雞安全性的影響由于雞群長期定量采食和飲水，飼料中添加大黃素甲醚后，各組采食、飲水情況與前期沒有差異。各組雞活動正常、精神狀況良好。觀察發(fā)現(xiàn)給藥初期3～5 d糞便呈現(xiàn)紅色，隨著給藥時間延長糞便顏色恢復正常。飼料中添加大黃素甲醚后，死淘率明顯下降(表2），與空白對照組差異顯著（P<0.05）。大黃素4個處理組與牛至油組相比，差異顯著(P<0.05)。隨著大黃素甲醚添加量增加，處理組死淘率下降更明顯，存在劑量效應關系。

2.2 大黃素甲醚對土種產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能的影響飼料中添加大黃素甲醚對土種雞安全性的影響結(jié)果（表2）表 明，400、800、1 000、1 200 mg·kg?1大黃素甲醚和牛至油組死淘率顯著低于空白對照組（P<0.05），大黃素甲醚各個處理組死淘率顯著低于牛至油組（P<0.05）。添加大黃素甲醚對土種雞生產(chǎn)性能的影響見表3。由表3可知，（1）平均蛋質(zhì)量：給藥1周，處理組與空白對照組相比，800、1 200 mg·kg?1組平均蛋質(zhì)量顯著高于空白對照組（P<0.05）。給藥2周，處理組與空白對照組相比，400、1 000 mg·kg?1組平均蛋質(zhì)量顯著高于空白對照組（P<0.05）。停藥后，處理組與空白對照組相比，400、1 000 mg·kg?1大黃素甲醚和牛至油對照組平均蛋質(zhì)量顯著高于空白對照組（P<0.05），其他各組間差異不顯著。隨著給藥時間增加，400、800、1 200 mg·kg?1大黃素甲醚組各時段平均蛋質(zhì)量也逐漸增加，與給藥前差異相比顯著。（2）合格種蛋率：停藥后，處理組與空白對照組相比，800 mg·kg?1大黃素甲醚組合格種蛋率顯著高于空白對照組（P<0.05），其他各組間差異不顯著。隨著給藥時間增加，400、800、1 000 mg·kg?1組各時段合格種蛋率也逐漸增加，與給藥前差異相比顯著。（3）產(chǎn)蛋率：給藥2周,處理組與空白對照組相比，400、800 mg·kg?1大黃素甲醚組產(chǎn)蛋率顯著高于空白對照組（P<0.05）。停藥后，處理組與空白對照組相比，800、1 200 mg·kg?1和牛至油對照組產(chǎn)蛋率顯著高于空白對照組（P<0.05），其他各組間差異不顯著。（4）種蛋受精率：大黃素甲醚處理組、牛至油組和未處理組之間，合格種蛋的受精率均無顯著差異。綜上所述，整個試驗期內(nèi)，大黃素甲醚處理組與空白對照組相比，死亡率顯著降低，平均蛋質(zhì)量、合格種蛋率和產(chǎn)蛋率3項指標與空白對照組，差異顯著。并且隨著給藥時間增加，大黃素甲醚平均蛋質(zhì)量和合格種蛋率也逐漸增大。

表2 大黃素甲醚對土種產(chǎn)蛋雞死淘率的影響

表3 大黃素甲醚對土種雞生產(chǎn)性能的影響

3 討 論

本試驗結(jié)果表明，飼料中添加大黃素甲醚后，雞群采食飲水均不受影響，精神狀況良好。雖然給藥3～5 d出現(xiàn)紅色糞便，隨后即恢復正常。大黃素甲醚組死淘率顯著低于牛至油組和空白對照組，且呈現(xiàn)劑量-效應關系。其中1 200 mg·kg?1劑量添加大黃素甲醚死淘率降低最明顯；平均蛋質(zhì)量、合格種蛋率和產(chǎn)蛋率顯著高于空白對照組，且隨給藥時間延長，各時段平均蛋質(zhì)量、合格種蛋率也逐漸增加，與給藥前相比差異顯著。說明大黃素甲醚作為中獸藥飼料添加劑在降低土種雞死淘率方面優(yōu)于牛至油添加劑。

大黃素甲醚降低土種雞的死淘率可能與抑制/殺滅病原細菌有關。大黃素甲醚是從中藥虎杖中獲得抗菌、促生長的活性成分。體外抑菌實驗證明大黃素甲醚對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌均有良好的抑菌效果。大黃素甲醚64 g·mL?1即可有效抑制臨床大腸桿菌、雞桿菌分離株的生長；128 g·mL?1可以有效抑制糞腸球菌、沙門氏桿菌、芽孢桿菌的生長，并可以有效抑制鸚鵡熱衣原體的生長。

HAZIN等[19]通過研究抑制金黃色葡萄球菌的植物化學成分MRSA，發(fā)現(xiàn)大黃素對MRSA的MIC50值為（2.0±1.5） μg·mL?1，證明大黃素對金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、肺炎球菌、白喉桿菌、炭疽桿菌、痢疾桿菌、大腸桿菌、變形桿菌等都有較強的抑制作用。本試驗發(fā)現(xiàn)大黃素甲醚添加土種雞后，雞群死淘率顯著下降，這可能因為大黃素甲醚能夠破壞細菌細胞膜的通透性，抑制菌體內(nèi)蛋白質(zhì)合成，抑制菌體的呼吸代謝，阻斷了病原菌在呼吸道、生殖道的發(fā)病[20]。

與空白對照組相比，飼料中添加大黃素甲醚后平均蛋質(zhì)量顯著增加，其內(nèi)在原因與大黃素甲醚促進機體營養(yǎng)吸收有關。大黃素甲醚有利于種蛋的色素沉積和鈣沉積，從而提高了種蛋的合格率。蛋雞企業(yè)飼料中添加大黃素甲醚，添加5 d后種蛋顏色發(fā)紅、蛋黃中紅色物質(zhì)增多，雞蛋質(zhì)量提高2%～3%。從臨床使用上證明大黃素甲醚能夠提高雞群生產(chǎn)性能，有效防止輸卵管炎，增強種蛋品質(zhì)。因此，大黃素甲醚作為飼料添加劑能夠提升產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能，提高種蛋品質(zhì)。此外，隨著中國政府全面倡導的抗生素減量行動計劃的實施和推廣，大黃素甲醚無疑是一種綠色、健康和可持續(xù)的中獸藥添加劑。

雖然本試驗未發(fā)現(xiàn)大黃素甲醚不同處理組對土種雞的生產(chǎn)性能產(chǎn)生副作用，但是，大黃素甲醚屬性寒涼，對雞胃腸道有促進瀉出作用。如果添加過量，如每噸添加超過3 kg飼料，會使蛋雞、黃雞腹瀉的數(shù)量增加，出現(xiàn)大量紅色糞便。一般按照推薦劑量添加，初期會出現(xiàn)一過性的糞便發(fā)紅，3 d后糞便顏色恢復正常，未見到腹瀉現(xiàn)象。

本試驗結(jié)果表明，飼料中添加大黃素甲醚后可以提高土種雞的生產(chǎn)性能，平均蛋重、合格種蛋率均有增加。大黃甲醚添加可以提高機體抵抗病菌的能力，抑制病原的生長發(fā)育，防治蛋雞輸卵管疾病，顯著降低土種雞的死淘率。這也說明了大黃素甲醚不僅在植物疾病防控方面效果顯著，也能夠提高雞群生產(chǎn)性能，有效防止輸卵管疾病，增強種蛋品質(zhì)，提高養(yǎng)殖效益。本實驗結(jié)果為大黃素甲醚在家禽飼料添加劑應用方面提供了研究基礎，證明大黃素甲醚的抑菌效果不僅能應用于農(nóng)藥，也可以應用于畜禽細菌性疾病防治。并且，從植物中提取的大黃素甲醚作為一種綠色、健康和可持續(xù)的中獸藥添加劑，其安全性符合我國政府提倡的限制使用抗生素的政策，應用前景廣泛。

4 結(jié) 論

飼料中添加大黃素甲醚后，能有效防止蛋雞輸卵管炎，降低土種雞的死淘率，提高雞群的生產(chǎn)性能、種蛋品質(zhì)和養(yǎng)殖效益，減少抗生素的使用。