徐 亮， 王杜娟， 謝 倩， 李松梅， 黃述斌

(1.安徽省池州市人民醫(yī)院病理科， 安徽 池州 247000 2.廣東省東莞市厚街醫(yī)院病理科， 廣東 東莞 523900)

乳腺癌是全球范圍內(nèi)女性最常見惡性腫瘤，且近年來，其發(fā)病率總體呈上升趨勢[1]。乳腺癌作為高度異質(zhì)性的復(fù)雜惡性腫瘤，特定基因異常表達在發(fā)病和進展中發(fā)揮關(guān)鍵作用[2]。長鏈非編碼RNA(Long noncoding RNA，LncRNA)漿細胞瘤異位變異基因1(Plasmacytoma Variant Translocation 1，PVT1)被認為是癌癥相關(guān)基因的結(jié)合區(qū)，已有研究證實，其可能為乳腺癌促癌基因[3]。三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運蛋白G2(ATP-binding cassette super family Gmember 2，ABCG2)是新發(fā)現(xiàn)的腫瘤相關(guān)多藥耐藥蛋白，且被證實是腫瘤干細胞通用性腫瘤標(biāo)志物，與腫瘤細胞增殖分化密切相關(guān)[4]。PVT1、ABCG2自身結(jié)構(gòu)和功能復(fù)雜，目前，二者在乳腺癌中的作用機制尚未完全明確。本研究探討乳腺癌組織LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA表達與病理特征間關(guān)系及KM曲線分析，旨在為乳腺癌發(fā)病機制及靶向治療研究提供依據(jù)。報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取2017年1月至2018年12月我院接受手術(shù)治療的80例乳腺癌患者的病例資料進行回顧性研究。納入標(biāo)準：均經(jīng)病理確診為乳腺癌，病理類型均為浸潤性導(dǎo)管癌；首次確診及接受乳腺手術(shù)治療；術(shù)前均未接受放療、化療或內(nèi)分泌治療；病例資料完整。排除標(biāo)準：合并其他惡性腫瘤；合并乳腺局部或全身感染性疾??；原發(fā)性血液系統(tǒng)疾病，造血功能障礙；妊娠期或哺乳期患者；隨訪過程中失訪。年齡31～74歲，平均(51.62±6.87)歲，腫瘤數(shù)量：單個51例，多個29例，腫瘤直徑：<5cm 53例，≥5cm 27例，臨床分期：I期22例，Ⅱ期39例，Ⅲ期19例，病理分級：高分化24例，中分化36例，低分化20例，存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移28例。

1.2方法:①病理特征收集：通過查閱電子病歷記錄獲得患者病理特征信息，包括年齡、腫瘤數(shù)量、腫瘤直徑、臨床分期、病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等。②癌組織及癌旁組織LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA檢測：采用TRIzol法提取癌組織及癌旁正常組織總RNA，將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，以cDNA為模板進行聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase chain react，PCR)擴增，以GAPDH為內(nèi)參，lncRNA PVT1引物設(shè)計：5′GTCTCCCTATGGAATGTAAG-3′、3′AGTGTCCTGGCAGTAAAAG-5′，ABCG2引物設(shè)計：5′-AACCTGGTCTCAACGCCATC-3′、5′-GTCGCGGTGCTCCATTTATC-3′，結(jié)果采用2-△△Ct法進行分析。③隨訪：隨訪起始時間為術(shù)后第1天的時間，均隨訪3年，從手術(shù)日期到復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移或隨訪截止日期確定為患者的無病生存期；至隨訪結(jié)束，共有18例復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率22.50%。

1.3觀察指標(biāo):①癌組織及癌旁組織LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA表達。②癌組織LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA表達與病理特征的相關(guān)性。③乳腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的單因素分析。④乳腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的多因素分析。⑤不同癌組織LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA表達患者無病生存期。

2 結(jié) 果

2.1癌組織及癌旁組織LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA表達：癌組織LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA表達高于癌旁組織(P<0.05)，見表1。

表1 癌組織及癌旁組織LncRNA PVT1和ABCG2 mRNA表達

2.2癌組織LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA表達與病理特征的相關(guān)性：<50歲與≥50歲患者、單個腫瘤與多個腫瘤患者、腫瘤直徑<5 cm與≥5 cm患者癌組織LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA表達對比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；Ⅲ期患者癌組織LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA表達量大于Ⅱ期、I期患者，Ⅱ期患者癌組織LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA表達量大于I期患者，低分化患者癌組織LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA表達量大于中分化、高分化患者，中分化患者癌組織LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA表達量大于高分化患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移患者癌組織LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA表達量大于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)。見表2。

表2 癌組織LncRNA PVT1 ABCG2 mRNA表達與病理特征的相關(guān)性

2.3乳腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的單因素分析：是否復(fù)發(fā)患者年齡、腫瘤數(shù)量、腫瘤直徑對比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；復(fù)發(fā)患者Ⅲ期占比、低分化占比、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移占比、癌組織LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA表達量高于未復(fù)發(fā)患者(P<0.05)。見表3。

表3 乳腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的單因素分析

2.4乳腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的多因素分析：以術(shù)后復(fù)發(fā)情況作為因變量(賦值見表4)，將表4中差異有統(tǒng)計學(xué)意義的項作為自變量，納入COX回歸模型(賦值見表4)，結(jié)果顯示，將臨床分期、病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移控制后，癌組織LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA高表達均為術(shù)后復(fù)發(fā)的獨立危險因素(P<0.05)，見表5。

表4 賦值

表5 乳腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的多因素分析

2.5不同癌組織LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA表達患者無病生存期:以癌組織LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA表達均值為界分高表達、低表達，其中LncRNA PVT1高表達41例，低表達39例；ABCG2 mRNA高表達43例，低表達37例。Kaplan-Meier生存分析顯示，癌組織LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA高表達者術(shù)后3年無病生存率低于低表達者(P<0.05)。見圖1、2。

圖1 癌組織LncRNA PVT1無病生存期分析圖

圖2 癌組織ABCG2 mRNA無病生存期分析

3 討 論

乳腺癌在分子水平上存在高度異質(zhì)性，傳統(tǒng)病理形態(tài)學(xué)診斷已無法適應(yīng)現(xiàn)代腫瘤診治的需要。而以分子生物學(xué)特征及基因表達譜為基礎(chǔ)的乳腺癌分子生物學(xué)分型，可較好地反映腫瘤生物學(xué)行為。

LncRNA系人類基因組中有轉(zhuǎn)錄作用但不翻譯的RNA序列，但近年證據(jù)表明，其可通過序列特異性識別、序列雜交等機制參與轉(zhuǎn)錄因子激活、細胞周期分化、基因沉默等過程[5]。PVT1為LncRNA中的“明星分子”，在直腸癌、卵巢癌等多種腫瘤均存在PVT1異常表達[6]。本研究顯示，乳腺癌患者癌組織LncRNA PVT1表達高于癌旁組織(P<0.05)，且與臨床分期、病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與既往研究相符，推測LncRNA PVT1可能通過靶向調(diào)控某個靶基因發(fā)揮致癌作用，促進乳腺癌侵襲、轉(zhuǎn)移。進一步分析發(fā)現(xiàn)，癌組織LncRNA PVT1高表達為術(shù)后復(fù)發(fā)的獨立危險因素，且癌組織LncRNA PVT1高表達者術(shù)后3年無病生存率低于低表達者。分析相關(guān)機制，PVT1在染色體斷點8q24區(qū)可轉(zhuǎn)錄出miR-1207-5p，而miR-1207-5p已被發(fā)現(xiàn)在乳腺癌中發(fā)揮促癌基因活性，提示PVT1可能通過調(diào)節(jié)miR-1207-5p表達，參與乳腺癌發(fā)生及發(fā)展。miR-200家族可抑制上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，降低癌細胞轉(zhuǎn)移能力，屬抑制性miRNA，PVT1可通過結(jié)合miRNA200s影響其對靶基因作用[7]。

ABCG2是較晚發(fā)現(xiàn)的藥泵蛋白。目前有關(guān)ABCG2與乳腺癌關(guān)系的研究多集中在ABCG2與抗腫瘤藥物敏感性的關(guān)系方面[8]。本研究顯示，乳腺癌癌組織ABCG2 mRNA高表達是術(shù)后復(fù)發(fā)的危險因素。乳腺癌干細胞發(fā)病理論認為，癌組織由一群異質(zhì)性細胞群組成，少數(shù)具有干細胞的無限增殖性及多向分化潛能，但無正常干細胞對增殖和分化的自我控制能力，促進乳腺癌發(fā)生、浸潤、轉(zhuǎn)移等過程，這是腫瘤發(fā)生的基礎(chǔ)[9]。鄭淑君[10]研究顯示，乳腺癌患者ABCG2蛋白表達與淋巴細胞亞群中CD3+淋巴細胞、B淋巴細胞計數(shù)呈負相關(guān)。本研究Kaplan-Meier生存分析顯示，癌組織ABCG2 mRNA高表達者術(shù)后3年無病生存率低于低表達者(P<0.05)，ABCG2 mRNA高表達提示腫瘤惡性程度高，因此，更易導(dǎo)致不良預(yù)后。主要是因ABCG2不僅作為耐藥蛋白介導(dǎo)腫瘤細胞多藥耐藥，且是干細胞的重要標(biāo)志物，其活性高低可對腫瘤細胞增殖分化活性產(chǎn)生重要影響[11]。同時ABCG2一方面，可調(diào)節(jié)機體淋巴細胞，影響其功能，另一方面，與淋巴細胞間可能存在某種聯(lián)系，相互制約，相互影響。

綜上可知，乳腺癌患者癌組織LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA異常高表達，與病理特征相關(guān)，且為影響患者無病生存期的獨立危險因素，與患者不良預(yù)后相關(guān)。