丁燕霞

(浙江大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，浙江 杭州 310058)

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是生命科學(xué)研究不可或缺的“活體儀器”，發(fā)揮著重要且不可替代的作用。隨著科學(xué)技術(shù)的迅猛發(fā)展，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)已發(fā)展成為1門(mén)支撐生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)和醫(yī)藥研究的綜合性學(xué)科，成為衡量高校及科研院所科研水平的重要標(biāo)志[1，2]。由于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的來(lái)源、生理特征、飼養(yǎng)環(huán)境及是否感染疾病會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，因此實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量直接影響著科研質(zhì)量。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量的控制依賴于獸醫(yī)的管理，獸醫(yī)是屏障設(shè)施不可或缺的角色。整個(gè)過(guò)程包括：設(shè)施的設(shè)計(jì)、設(shè)施啟用前消毒、運(yùn)行管理中的微生物和環(huán)境控制、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理審查、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的引入、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中動(dòng)物的監(jiān)護(hù)、試驗(yàn)結(jié)束后動(dòng)物的安樂(lè)死，貫穿動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的始終?，F(xiàn)將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量管理中的獸醫(yī)監(jiān)管工作介紹如下，供同行參考。

1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量管理易出現(xiàn)的問(wèn)題

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來(lái)源實(shí)驗(yàn)科研對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物需求量大，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來(lái)源廣泛，大概有以下幾種途徑：(1)委托實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心代購(gòu)相應(yīng)等級(jí)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物；(2)通過(guò)相關(guān)公司采購(gòu)常規(guī)動(dòng)物或基因工程小鼠；(3)其他單位贈(zèng)送；(4)從國(guó)外引進(jìn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在生產(chǎn)、包裝、運(yùn)輸?shù)冗^(guò)程中因?yàn)檠b運(yùn)不當(dāng)、外力、污染等因素導(dǎo)致達(dá)不到相關(guān)等級(jí)要求，無(wú)法使用。此外，購(gòu)買(mǎi)或者其他單位贈(zèng)送的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物沒(méi)有嚴(yán)格把關(guān)，致使一些沒(méi)有生產(chǎn)資質(zhì)單位的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)入設(shè)施造成污染。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用管理不當(dāng)學(xué)生對(duì)相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作的熟悉程度不一樣，有的甚至對(duì)小鼠等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有恐懼心理，致使動(dòng)物在使用過(guò)程中受到意外傷害，如抓取不當(dāng)、用力過(guò)度造成動(dòng)物死亡。另外，動(dòng)物在剪趾、標(biāo)號(hào)或基因型鑒定過(guò)程中出血過(guò)多，剪尾取血沒(méi)有做好止血誘使動(dòng)物之間撕咬，超量飼養(yǎng)，動(dòng)物食仔等影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。除此之外，由于環(huán)境因素、實(shí)驗(yàn)因素、病原污染等情況會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物狀態(tài)不好、生長(zhǎng)發(fā)育不良、感染疾病等問(wèn)題，甚至污染整個(gè)設(shè)施及其他動(dòng)物。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)管理不規(guī)范高校屏障設(shè)施人流量大，實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中未遵守相關(guān)屏障設(shè)施管理標(biāo)準(zhǔn)操作程序(以下簡(jiǎn)稱“SOP”)，私自攜帶未消毒的物品進(jìn)入屏障設(shè)施或在屏障設(shè)施內(nèi)違規(guī)使用未徹底消毒的實(shí)驗(yàn)物品，致使屏障環(huán)境受到污染，影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生存環(huán)境，進(jìn)而影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量[3]。飼養(yǎng)員專(zhuān)業(yè)化程度不高，沒(méi)有掌握對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生長(zhǎng)習(xí)性等相關(guān)信息，動(dòng)物疫病防控觀念淡薄，不主動(dòng)學(xué)習(xí)相關(guān)的專(zhuān)業(yè)知識(shí)；有的飼養(yǎng)員甚至不按SOP規(guī)定飼養(yǎng)動(dòng)物，不重視實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)，對(duì)環(huán)境衛(wèi)生的清潔消毒馬虎，增加了屏障設(shè)施污染的風(fēng)險(xiǎn)。

2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量管理中的獸醫(yī)監(jiān)管

良好的飼養(yǎng)管理是保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量的前提，為保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量，浙江大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心在借鑒同行管理經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，結(jié)合相關(guān)工作實(shí)際，制定了1套實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量獸醫(yī)監(jiān)管方法。

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物現(xiàn)場(chǎng)接收實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量控制的關(guān)鍵首先是對(duì)動(dòng)物來(lái)源的控制，因此對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物供應(yīng)商的考察以及動(dòng)物運(yùn)輸?shù)綀?chǎng)后獸醫(yī)現(xiàn)場(chǎng)審查顯得尤為重要。在完成供應(yīng)商考察，確定供應(yīng)商符合相應(yīng)條件和資質(zhì)后，為保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在運(yùn)輸過(guò)程中的質(zhì)量，獸醫(yī)會(huì)在接收動(dòng)物時(shí)進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)審查，內(nèi)容包括：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來(lái)源、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量檢測(cè)報(bào)告、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物運(yùn)輸盒有無(wú)破損漏氣等情況、觀察動(dòng)物的狀態(tài)等[4]。相關(guān)證件審核不符合要求或發(fā)現(xiàn)有運(yùn)輸盒破損、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物狀態(tài)異常等情況，獸醫(yī)應(yīng)當(dāng)場(chǎng)拒收此類(lèi)動(dòng)物并告知供應(yīng)商。審核通過(guò)后，獸醫(yī)通過(guò)本中心的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接收系統(tǒng)錄入相關(guān)信息，并打印出相對(duì)應(yīng)的訂單二維碼，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物憑訂單二維碼進(jìn)入屏障設(shè)施。這樣不僅保證了每批外來(lái)動(dòng)物都在我中心有飼養(yǎng)籠位且經(jīng)過(guò)獸醫(yī)嚴(yán)格審查后進(jìn)入屏障設(shè)施，也保證了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來(lái)源資料清晰可追溯。對(duì)于其他來(lái)源(如其他單位贈(zèng)送或國(guó)外引進(jìn))的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，根據(jù)是否來(lái)源于有相關(guān)資質(zhì)的生產(chǎn)單位分為2種情況。(1)來(lái)源于有生產(chǎn)資質(zhì)的單位：要現(xiàn)場(chǎng)檢查實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)合格證、第三方出具的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量檢測(cè)報(bào)告以及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物狀態(tài)。檢查通過(guò)后置于隔離包隔離飼養(yǎng)1個(gè)月，隨后抽取一定數(shù)量的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物送往官方認(rèn)定的正規(guī)單位檢測(cè)。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果判斷動(dòng)物是直接進(jìn)入?yún)^(qū)域飼養(yǎng)還是通過(guò)凈化的方式進(jìn)入?yún)^(qū)域。生物凈化的周期一般為1個(gè)月，實(shí)驗(yàn)人員可根據(jù)時(shí)間安排實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。(2)來(lái)源于沒(méi)有生產(chǎn)資質(zhì)的單位：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物到達(dá)后，按以上條款檢查相關(guān)情況，并聯(lián)系技術(shù)部門(mén)進(jìn)行生物凈化。具體流程見(jiàn)圖1。

圖1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)入屏障設(shè)施流程

2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用監(jiān)督獸醫(yī)在設(shè)施內(nèi)不定期巡查以規(guī)范實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用，并給實(shí)驗(yàn)操作者進(jìn)行技術(shù)指導(dǎo)，規(guī)范實(shí)驗(yàn)操作，解決實(shí)驗(yàn)中遇到的問(wèn)題，降低對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的傷害。巡查內(nèi)容主要包括以下幾方面。(1)是否正確使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案選擇合適的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。(2)實(shí)驗(yàn)操作是否符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理規(guī)范。如：小鼠剪趾標(biāo)記時(shí)最好在出生10天以內(nèi)，這樣出血少，可最大程度降低小鼠的疼痛，剪下的腳趾也可用于基因型鑒定；小鼠采血時(shí)用剪尾取血法，剪尾長(zhǎng)度為5 mm，采血完成后及時(shí)止血；檢查飼養(yǎng)籠盒內(nèi)是否存在超出規(guī)定(5只/籠)的情況，不符合規(guī)定的通知實(shí)驗(yàn)者及時(shí)分籠飼養(yǎng)處理。(3)解決實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)的問(wèn)題。如：發(fā)現(xiàn)有雌鼠食仔的情況，應(yīng)及時(shí)告知實(shí)驗(yàn)者在雌鼠分娩前后避免換籠操作，使其處于熟悉的環(huán)境中，否則可使雌鼠受驚導(dǎo)致食仔；也可以在生產(chǎn)前4天換籠時(shí)適當(dāng)添加一些棉棒等做窩材料，避免食仔情況發(fā)生；小鼠因打斗撕咬導(dǎo)致皮膚破損的，建議實(shí)驗(yàn)者分開(kāi)飼養(yǎng)，待傷口愈合后再進(jìn)行后續(xù)操作。(4)監(jiān)督并查看動(dòng)物設(shè)施的衛(wèi)生條件，動(dòng)物的飲水、飼料使用等是否滿足動(dòng)物福利要求[5]。

2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)監(jiān)管

2.3.1 疾病預(yù)防及環(huán)境監(jiān)督屏障環(huán)境是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)化的生長(zhǎng)環(huán)境，屏障設(shè)施的好壞直接影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量。對(duì)于屏障設(shè)施的管理，我中心獸醫(yī)制定了一系列切實(shí)可行的SOP以及反映實(shí)際操作的記錄表。同時(shí)根據(jù)設(shè)施實(shí)際情況，制定科學(xué)、可實(shí)施的疾病預(yù)防計(jì)劃，包括屏障設(shè)施內(nèi)周期性消毒計(jì)劃，消毒液定期更換，季度性清洗小鼠獨(dú)立通風(fēng)籠盒(IVC)和飼養(yǎng)籠架以預(yù)防滋生寄生蟲(chóng)，與相關(guān)公司合作制定蟑螂和野鼠消滅計(jì)劃及其他疾病防治措施等。獸醫(yī)聯(lián)合設(shè)施設(shè)備組每天對(duì)設(shè)施內(nèi)的溫度、濕度、氣壓差等進(jìn)行監(jiān)控，發(fā)現(xiàn)異常及時(shí)處理。

2.3.2 生產(chǎn)物資管控實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生產(chǎn)物資包括水、飼料和墊料。普通級(jí)動(dòng)物飲用水按《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》(GB 5749—2006)檢驗(yàn)。SPF級(jí)動(dòng)物飲用水按《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境與設(shè)施》(GB 14925—2010)要求檢測(cè)，應(yīng)為無(wú)菌水。飼料和墊料均通過(guò)招標(biāo)購(gòu)自國(guó)內(nèi)有資質(zhì)的廠商，在使用過(guò)程中不定期抽查墊料的均勻性，是否混有雜質(zhì)等情況，以及飼料的食用情況、適口性等，發(fā)現(xiàn)異常及時(shí)反饋和處理，確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)生活物資的質(zhì)量[6，7]。對(duì)飼養(yǎng)員的要求：屏障內(nèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飲水瓶和籠盒更換頻率為1～2次/周；飼料按需添加，以更換墊料時(shí)飼料架上沒(méi)有飼料存積為宜。生產(chǎn)物資消毒是否徹底與高壓蒸氣滅菌器的消毒效果和程序有關(guān)。為做到有效消毒，采用生物檢測(cè)法，在消毒時(shí)定點(diǎn)放置生物指示劑，通過(guò)培養(yǎng)結(jié)果檢查高壓蒸氣滅菌器的滅菌效果。

2.3.3 人員培訓(xùn)為了提高服務(wù)質(zhì)量，加強(qiáng)飼養(yǎng)員的專(zhuān)業(yè)知識(shí)儲(chǔ)備，獸醫(yī)每年定期對(duì)飼養(yǎng)員進(jìn)行培訓(xùn)。培訓(xùn)內(nèi)容涉及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)管理中的各個(gè)方面，包括：基礎(chǔ)性的換籠操作手法，飼料添加量，飲用水瓶更換的頻率，消毒劑的配制和規(guī)范使用，屏障區(qū)域內(nèi)地面、墻壁的擦拭消毒和空間噴霧消毒頻率；飼養(yǎng)管理過(guò)程中常見(jiàn)問(wèn)題的分析及處理方式，如：常見(jiàn)的動(dòng)物脫毛、食仔、難產(chǎn)、狀態(tài)和行為異常；基礎(chǔ)的試驗(yàn)操作技術(shù)，包括：腹腔注射、尾靜脈注射、肌肉注射、灌胃、采血等；飼養(yǎng)管理過(guò)程中與課題組建立良好的溝通方式，根據(jù)課題組實(shí)驗(yàn)需要對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行特殊管理等。培訓(xùn)結(jié)束后對(duì)飼養(yǎng)員進(jìn)行考核，考核成績(jī)直接與績(jī)效掛鉤，并一起討論工作中遇到的問(wèn)題，飼養(yǎng)中操作及生產(chǎn)工具的優(yōu)化，SOP和疾病控制方案根據(jù)每年的工作情況和討論方案調(diào)整實(shí)施。獸醫(yī)按季度檢查飼養(yǎng)員的日常工作表記錄情況，以此評(píng)估設(shè)施環(huán)境控制情況以及飼養(yǎng)員的工作情況[8]。

2.4 “哨兵鼠”及環(huán)境檢測(cè)通過(guò)“哨兵鼠”監(jiān)測(cè)小鼠種群的微生物感染狀況是保障實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量的基礎(chǔ)。哨兵鼠是指將背景健康的外源小鼠引入重要的繁殖飼養(yǎng)群體，通過(guò)直接接觸目的鼠或間接接觸墊料的方式對(duì)飼養(yǎng)區(qū)域進(jìn)行病原微生物檢測(cè)，并替代重要飼養(yǎng)群體進(jìn)行健康體檢的1類(lèi)小鼠。設(shè)置哨兵鼠的目的是為了監(jiān)測(cè)環(huán)境對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是否有影響、是否患有傳染病，以及飲水、飼料對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是否有影響[9]。獸醫(yī)每年制訂哨兵鼠年度檢測(cè)計(jì)劃，每年檢測(cè)2次，檢測(cè)項(xiàng)目有細(xì)菌、病毒、寄生蟲(chóng)、環(huán)境等，具體各項(xiàng)檢測(cè)項(xiàng)目參照《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 寄生蟲(chóng)學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)》(GB 14922.1—2001)、《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 微生物學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)》(GB 14922.2—2011)。考慮到病原體對(duì)動(dòng)物的致病特性及年齡依賴等問(wèn)題，兼顧某些病原在感染動(dòng)物后除了沒(méi)有臨床癥狀(或不明顯)外，還可經(jīng)人員流動(dòng)帶來(lái)病原傳播的風(fēng)險(xiǎn)等制定設(shè)施微生物常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目。通常檢測(cè)方法有以下幾種：通過(guò)取樣分離細(xì)菌的細(xì)菌學(xué)檢測(cè)；通過(guò)血清學(xué)檢測(cè)病毒抗體；通過(guò)透明膠紙黏取法、拔毛鏡檢法等檢測(cè)體外寄生蟲(chóng)；通過(guò)分泌物涂片法、組織剖面壓印法等檢測(cè)體內(nèi)寄生蟲(chóng)。此外，發(fā)病和死亡的動(dòng)物必須剖檢，剖檢結(jié)果用于指導(dǎo)是否要增加檢測(cè)頻率或者增加被檢動(dòng)物的數(shù)量。與哨兵鼠檢測(cè)方案同時(shí)進(jìn)行的是環(huán)境檢測(cè)。獸醫(yī)在屏障設(shè)施內(nèi)選擇氣流擾動(dòng)較小的位置，并在設(shè)施內(nèi)實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)出量少的時(shí)間內(nèi)放置直徑為90 mm的培養(yǎng)皿，放置時(shí)間為30 min，之后置于37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h，以此監(jiān)測(cè)動(dòng)態(tài)情況下屏障設(shè)施內(nèi)落菌數(shù)[10]。落菌數(shù)結(jié)果可作為獸醫(yī)制定設(shè)施內(nèi)消毒方案的參考依據(jù)。

3 小結(jié)

在實(shí)際工作中，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的獸醫(yī)監(jiān)管不但要承擔(dān)動(dòng)物質(zhì)量控制的相關(guān)工作，還要涉及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施管理的各個(gè)方面，尤其在動(dòng)物福利審查與監(jiān)督、生物安全評(píng)價(jià)與管理中發(fā)揮著不可替代的作用。沒(méi)有獸醫(yī)監(jiān)管就沒(méi)有合格的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果[11]。隨著我國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)的不斷發(fā)展及對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量要求的不斷提高，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物行業(yè)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的獸醫(yī)監(jiān)管要求也越來(lái)越高、越來(lái)越專(zhuān)業(yè)，為我國(guó)的生物醫(yī)藥研發(fā)和人類(lèi)健康做出更大貢獻(xiàn)。