李冬光， 石艷華， 鄧永進(jìn)， 周思旋， 趙春萍， 朱麗莉*

(1. 貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，貴州 貴陽(yáng) 550005； 2. 貴州省冊(cè)亨縣工業(yè)和科學(xué)技術(shù)局保障中心，貴州 冊(cè)亨 552200；3. 盤(pán)州市科技事業(yè)發(fā)展中心，貴州 盤(pán)州 553500)

2021年3月28日，盤(pán)州市某豬場(chǎng)的3～7日齡哺乳仔豬發(fā)生嘔吐、水樣腹瀉，嚴(yán)重者死亡。為確認(rèn)病因，進(jìn)行臨床癥狀和剖檢觀察，并采集2頭腹瀉仔豬的病料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室病原檢測(cè)，現(xiàn)將診斷情況報(bào)道如下，供參考。

1 發(fā)病情況

該場(chǎng)存欄豬1 164頭，豬群在每年春、秋季已接種口蹄疫、豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病等常規(guī)疫苗。本次發(fā)病主要為3～7日齡哺乳仔豬，發(fā)病率50%，病死率55%。曾使用穿心蓮、痢菌凈、慶大霉素等藥物治療，但效果不佳。

2 臨床癥狀

病豬臨床表現(xiàn)為嘔吐、水樣腹瀉、精神不振、消瘦、被毛粗亂等癥狀，糞便呈灰白色或灰綠色、惡臭，中后期嚴(yán)重脫水，眼窩下陷。

3 病理剖檢

剖檢2頭典型病豬可見(jiàn)：腹股溝淋巴結(jié)充血嚴(yán)重并呈藍(lán)紫色，肝臟和腎臟有針尖狀出血點(diǎn)，胃內(nèi)有未消化的凝乳塊，腸道充氣，腸壁變薄，腸系膜淋巴結(jié)充血。其他器官未見(jiàn)明顯病變。

4 實(shí)驗(yàn)室檢查

4.1 相關(guān)病毒核酸檢測(cè)無(wú)菌條件下采集2頭病豬(分別編號(hào)Ⅰ、Ⅱ)的腹股溝淋巴結(jié)、糞便各2份(共計(jì)8份)，加入適量無(wú)菌生理鹽水研磨至勻漿，反復(fù)凍融3次，離心取上清液。采用寶生物RNAiso Plus試劑盒提取病料總RNA，采用PrimeScriptTMRT reagent Kit進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，采用世紀(jì)元亨柱式DNA核酸提取試劑盒提取病料總DNA。按各病毒核酸PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明方法分別檢測(cè)豬流行性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬輪狀病毒、偽狂犬病病毒，2%瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙錠染色后凝膠成像系統(tǒng)觀察。結(jié)果：2份檢測(cè)病豬糞樣中可見(jiàn)豬流行性腹瀉病毒目的擴(kuò)增條帶(見(jiàn)圖1)，表明病豬存在豬流行性腹瀉病毒感染。豬傳染性胃腸炎病毒、豬輪狀病毒、偽狂犬病病毒均無(wú)目的擴(kuò)增條帶，表明無(wú)此類(lèi)病毒感染(見(jiàn)圖2、圖3)。

M：DL 1 000 DNA Marker； 1：豬流行性腹瀉病毒疫苗CV777株陽(yáng)性對(duì)照； 2：豬流行性腹瀉病毒疫苗AJ1102-R株陽(yáng)性對(duì)照； 3、4：Ⅰ、Ⅱ號(hào)病豬糞樣； 5、6：Ⅰ、Ⅱ號(hào)病豬腹股溝淋巴結(jié)； 7：陰性對(duì)照?qǐng)D1 豬流行性腹瀉病毒RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果

M：DL 1 000 DNA Marker； 1～7：豬傳染性胃腸炎病毒檢測(cè)(1：陰性對(duì)照； 2、3：Ⅰ、Ⅱ 號(hào)病豬腹股溝淋巴結(jié)； 4、5：Ⅰ、Ⅱ號(hào)病豬糞樣； 6：豬傳染性胃腸炎病毒疫苗WH-1R株陽(yáng)性對(duì)照； 7：豬傳染性胃腸炎病毒疫苗SD/L株陽(yáng)性對(duì)照)； 8～13：豬輪狀病毒檢測(cè)(8：陰性對(duì)照； 9、10：Ⅰ、Ⅱ號(hào)病豬腹股溝淋巴結(jié)； 11、12：Ⅰ、Ⅱ號(hào)病豬糞樣； 13：陽(yáng)性對(duì)照)圖2 豬傳染性胃腸炎和豬輪狀病毒RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果

M：DL 1 000 DNA Marker； 1：陰性對(duì)照； 2、3：Ⅰ、Ⅱ號(hào)病豬腹股溝淋巴結(jié)； 4、5：豬偽狂犬病病毒疫苗Bartha-K61株陽(yáng)性對(duì)照?qǐng)D3 豬偽狂犬病病毒PCR擴(kuò)增結(jié)果

4.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)鑒定無(wú)菌條件下取2頭病豬肛門(mén)內(nèi)糞便樣品各1份，接種于沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基(HB7007-1，青島海博生物)，36 ℃培養(yǎng)22～24 h，觀察培養(yǎng)基上菌落顏色(沙門(mén)氏菌顯紫色，大腸桿菌及菌群顯藍(lán)色，其他細(xì)菌顯黃色或無(wú)色)。結(jié)果：2份糞便病料均檢測(cè)出大腸桿菌，其中1頭豬糞便檢測(cè)出沙門(mén)氏菌(見(jiàn)圖4)。挑取典型菌落分別進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢，可見(jiàn)革蘭氏陰性短小桿菌，符合大腸桿菌和沙門(mén)氏菌特征(見(jiàn)圖5)。

Ⅰ號(hào)病豬糞樣 Ⅱ號(hào)病豬糞樣圖4 培養(yǎng)菌落

大腸桿菌 沙門(mén)氏菌圖5 分離菌革蘭氏染色鏡檢(×100 )

5 診斷

根據(jù)發(fā)病情況、臨床癥狀、病理變化及實(shí)驗(yàn)室病原檢測(cè)，確診病例存在豬流行性腹瀉病毒、大腸桿菌及沙門(mén)氏菌混合感染。

6 討論

6.1豬流行性腹瀉是由豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)引起的1種急性、接觸性腸道傳染病，各日齡階段的豬均易感染，且日齡越小，癥狀越重，死亡率越高[1，2]。哺乳仔豬臨床癥狀最為明顯，出現(xiàn)嘔吐、腹瀉、食欲下降和脫水，并伴有高死亡率(80%～100%)。該病一年四季均可發(fā)生，病豬和帶毒豬是主要傳染源，在環(huán)境密閉、濕度和溫差大、衛(wèi)生條件差、養(yǎng)殖密度大的豬舍更易傳播。近年來(lái)，該病的流行區(qū)域和流行強(qiáng)度有不斷擴(kuò)大和增強(qiáng)的趨勢(shì)，造成哺乳仔豬感染，死亡率居高不下[3，4]。大腸桿菌病是豬常見(jiàn)的傳染病之一，可引起仔豬黃痢、白痢和水腫病等[5]。沙門(mén)氏菌是最常見(jiàn)且分布最廣泛的食源性病原菌之一，也可引起仔豬下痢。大腸桿菌和沙門(mén)氏菌可感染任何品種、日齡的豬，對(duì)仔豬的危害尤為嚴(yán)重，日齡越低，發(fā)病率和病死率越高[6]。

6.2沙門(mén)氏菌和大腸桿菌感染可以選擇頭孢類(lèi)、磺胺類(lèi)或氟苯尼考等敏感藥物治療(以藥敏試驗(yàn)結(jié)果為依據(jù))，采取多途徑、聯(lián)合、交叉等合理用藥方案。目前尚無(wú)治療豬流行性腹瀉的特效藥，一旦發(fā)生需盡快隔離病豬，對(duì)病豬進(jìn)行補(bǔ)液防脫水，飲水中添加電解多維和黃芪多糖，并應(yīng)用上述抗菌藥物避免繼發(fā)感染。同時(shí)通過(guò)加強(qiáng)科學(xué)飼養(yǎng)管理、控制公共環(huán)境衛(wèi)生等綜合配套措施，加強(qiáng)豬流行性腹瀉疫苗的免疫，才能收到良好的效果。