辛有全，何建，楊曉艷，李勝，靳娟，張琪，辛文媛，張麗，李廣輝，代瑞霞

(青海省地方病預防控制所，西寧 810021)

鼠疫在全球是危害人類最嚴重的烈性傳染病之一,是由鼠疫耶爾森菌(簡稱鼠疫菌)引起的一種自然疫源性傳染病。該病在我國境內分布范圍廣泛，有12塊自然疫源地，其傳播快，致死率高，尤其是肺鼠疫病死率極高，在傳染病防治法中被列為甲類傳染病。目前還沒有有效的疫苗來預防鼠疫，唯一的辦法就是使用抗生素，抗生素的及時應用可有效控制病情的發(fā)展[1]。我國治療鼠疫最常用的抗生素為鏈霉素。隨著抗生素的廣泛應用，耐藥性及其對人體的毒副作用也日益引起人們的重視[2]。馬達加斯加發(fā)現了兩株耐藥鼠疫菌，其中一株為攜帶7種耐藥基因的多重耐藥菌株[3]。耐藥菌株的出現給全世界敲響了警鐘[4]，鼠疫耐藥菌株如若引起人間疫情，控制起來將會非常棘手，所以篩選一種用于鼠疫防治的藥物勢在必行。左氧氟沙星在2012年被美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準為用于治療鼠疫的主要抗生素之一[5]。目前國內缺少用左氧氟沙星治療鼠疫的體內實驗數據，還未見用此藥治療人工感染鼠疫動物的報道，因此為評價左氧氟沙星對我國鼠疫菌的敏感性，掌握其對我國鼠疫菌是否耐藥及抑菌效果，為我國的鼠疫防控遴選備選藥物提供科學依據，筆者觀察了對實驗動物感染鼠疫菌強毒株141后給予左氧氟沙星藥物治療的療效，現將結果報告如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1實驗動物 SPF豚鼠，體重250～300 g，由重慶騰鑫生物技術有限公司西安分公司提供。[實驗動物使用許可證號:SYXK(青)2016-0001]，動物實驗經青海省地方病預防控制所動物福利倫理委員會批準,本實驗符合動物福利倫理要求。

1.1.2菌株 鼠疫耶爾森菌強毒株141，由青海省地方病預防控制所鼠疫菌專業(yè)實驗室提供。

1.1.3藥物 注射用甲磺酸左氧氟沙星，0.2 g/支，山東羅欣藥業(yè)集團有限公司生產，國藥準字H20051882，批號：520023064。

1.1.4主要儀器 動物負壓隔離籠(購自意大利泰尼百斯公司)；Ⅱ級B2型生物安全柜(購自賽默飛世爾公司)；換籠工作臺(購自美國紐埃爾公司)。

1.2 方法

實驗豚鼠共20只，治療組和對照組隨機分配各10只。

1.2.1動物人工感染 將37 ℃培養(yǎng)24 h的鼠疫強毒株141菌株用滅菌生理鹽水制備成1×107cfu/mL的菌懸液，分別對治療組和對照組動物鼠鼷部皮下注射，每只注射1 mL的菌懸液。本實驗均在ABSL-3實驗室內操作，實驗動物于負壓隔離籠內進行飼養(yǎng)觀察。

1.2.2治療 治療組豚鼠感染鼠疫菌后24 h開始治療，左氧氟沙星預防用藥的劑量和方法參照《中華人民共和國國家藥典》成人劑量，用孫敬方等[6]的動物折算系數法，換算成豚鼠用藥劑量，劑量為40 mg/kg/d，通過皮下注射方式對治療組動物進行治療，對照組每日觀察，不進行治療。連續(xù)給藥9 d，再觀察9 d后處死，解剖并培養(yǎng)各臟器，未分離到鼠疫菌為治愈。治療和觀察期間如有動物死亡，分離到鼠疫菌為特異性死亡。

2 結果

2.1 療效觀察

表1結果表明，治療組豚鼠人工感染1×107cfu/mL鼠疫菌后，經治療全部治愈，治愈率為100%，對照組動物3～5 d全部死亡。

表1 左氧氟沙星治療豚鼠人工感染鼠疫療效觀察

2.2 臨床及病理觀察

豚鼠用大劑量鼠疫菌懸液人工感染后，發(fā)病急，潛伏期較短，為1～2 d，感染后第1 d動物納食和活動量明顯減少，精神萎靡，3～5 d全部死亡，解剖并培養(yǎng)肝、脾、肺、心各臟器，均分離到鼠疫菌，鼠疫噬菌體裂解試驗陽性，為特異性死亡(圖1)。實驗組豚鼠經治療2～3 d后納食、飲水、運動量逐漸恢復正常。治療9 d后繼續(xù)觀察9 d，豚鼠各方面狀況良好，處死并解剖觀察各臟器，無明顯病理改變，鼠疫細菌學培養(yǎng)均為陰性。對照組豚鼠呈現典型的鼠疫病理變化，肉眼可見皮下充血，鼠鼷部淋巴結明顯腫大，局部化膿，與周圍組織粘連。肝脾腫大充血、質硬，表面可見點狀壞死灶(圖2)。

圖1 人工感染豚鼠對照組解剖培養(yǎng)結果

圖2 人工感染豚鼠治療組和對照組臟器病理變化

3 討論

鼠疫患者通過抗生素治療可以有效控制病情的發(fā)展,但是近年來不斷發(fā)現耐藥的鼠疫菌株。1997年在馬達加斯加報道了一株對多種抗生素(包括用于預防和治療鼠疫的磺胺類、鏈霉素等藥物)具有耐藥性的鼠疫菌[7-9]。馬達加斯加和蒙古還分別報道從嚙齒動物體內分離到耐藥鼠疫菌[10，11]，鼠疫菌耐藥菌株的不斷發(fā)現，對鏈霉素等傳統(tǒng)治療方案和藥物提出了新的挑戰(zhàn)，如果沒有切實有效的抗生素來應對上述鼠疫菌，鼠疫的預防和治療將面臨很大威脅，因此，篩選新型抗菌藥物替代傳統(tǒng)藥物十分必要。

前期研究的鼠疫菌體外抗菌活性試驗結果表明，1010株鼠疫菌對左氧氟沙星和莫西沙星均敏感[12]，但這些試驗均為體外實驗，不能完全代表該類藥物治療鼠疫的真實結果，必須通過動物實驗加以驗證[13]，因此我們進行了左氧氟沙星治療鼠疫的體內實驗。本研究中，實驗動物連續(xù)給藥時間為9 d，給藥途徑為皮下注射，選用的實驗動物為豚鼠，治療組和對照組的實驗動物均人工感染1×107cfu鼠疫菌，治療組動物24 h后皮下注射左氧氟沙星進行治療，治療劑量為12 mg/d，連續(xù)治療9 d后全部存活，停藥觀察9 d后處死，鼠疫細菌培養(yǎng)實驗均為陰性，治愈率為100%；對照組動物3～5 d全部死亡，經解剖并培養(yǎng)肝、脾、肺、心各臟器，均分離到鼠疫菌，為特異性死亡。值得一提的是，強毒鼠疫菌141株對豚鼠最小致死量(MLD)為50個菌[14]，本次實驗動物的感染劑量為1×107cfu，相差20萬倍，感染后24 h開始治療，存活率為100%，說明左氧氟沙星對治療重癥鼠疫有效，因此，左氧氟沙星可做為治療鼠疫的替代藥物。

左氧氟沙星是喹諾酮類藥物中的一種，為氧氟沙星的左旋體，其體外抗菌活性約為氧氟沙星的2倍。其作用機制是通過抑制細菌DNA旋轉酶的活性，阻止細菌DNA的合成和復制而導致細菌死亡，具有廣譜抗菌作用，抗菌作用強，對多數腸桿菌科革蘭氏陰性菌有較強的抗菌活性，不良反應均輕微，與氧氟沙星相比，本品的不良反應較為少見。КΑπΙнскйВБ等[15]用1×106個菌感染小鼠，觀察喹諾酮類6種藥物治療實驗感染小鼠鼠疫，效果較為顯著。LaytonRC等[16，17]進行了實驗動物感染鼠疫菌的動物實驗，采用左氧氟沙星治療有效。本實驗應用左氧氟沙星預防治療豚鼠人工感染鼠疫，有效率為100%，進一步驗證了左氧氟沙星可用于治療鼠疫。尤其在出現鼠疫菌耐鏈霉素菌株時，左氧氟沙星可做為治療鼠疫的藥物，以備在出現鼠疫耐藥菌株或鏈霉素過敏反應等應急情況時發(fā)揮作用。