劉夢(mèng)，白占成，吳森

(青海大學(xué)畜牧獸醫(yī)科學(xué)院 青海省高原家畜遺傳資源保護(hù)與創(chuàng)新利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，西寧 810016)

隨著禁止在飼料中添加促生長(zhǎng)抗生素政策的實(shí)施和消費(fèi)者對(duì)綠色健康食品的需求，研究人員一直在尋找綠色、安全、高效的飼料添加劑。近年來(lái)，益生菌、酶制劑和中草藥等作為綠色、高效、安全飼料添加劑已成為研究的重點(diǎn)[1]，這些添加劑作為抗生素的替代品具有巨大的潛力。《飼料添加劑品種目錄(2013)》明確規(guī)定了地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、雙歧桿菌等34種益生菌可作為飼料添加劑。很多種抗菌類的活性物質(zhì)源于雙歧桿菌，雙歧桿菌還能拮抗致病菌，調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，使動(dòng)物機(jī)體抗病力得到一定提高[2]。現(xiàn)階段，雙歧桿菌制劑主要用于豬等單胃動(dòng)物的生產(chǎn)和養(yǎng)殖，且多為各種復(fù)合雙歧桿菌成品制劑使用，雙歧桿菌的作用的研究較少，反芻動(dòng)物的相關(guān)研究更為罕見(jiàn)，僅曹健等[3]研究發(fā)現(xiàn)復(fù)合雙歧桿菌可提高肉羊多種血液生化指標(biāo)、生長(zhǎng)性能及表觀消化率，但報(bào)道中未指明肉羊品種及雙歧桿菌具體添加量，其他反芻動(dòng)物，特別是柴達(dá)木絨山羊方面的研究未見(jiàn)報(bào)道。本研究使用雙歧桿菌補(bǔ)飼柴達(dá)木絨山羊，旨在研究日糧補(bǔ)充雙歧桿菌及補(bǔ)飼時(shí)間對(duì)柴達(dá)木絨山羊的血清生化、免疫指標(biāo)和抗氧化能力的影響，為柴達(dá)木絨山羊科學(xué)無(wú)抗養(yǎng)殖提供理論指導(dǎo)，為日后雙歧桿菌在柴達(dá)木絨山羊的生產(chǎn)應(yīng)用上提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

該試驗(yàn)于2020年2月在青海伊清農(nóng)牧科技有限責(zé)任公司進(jìn)行，雙歧桿菌(50億活菌/kg)及基底輔料購(gòu)自內(nèi)蒙古和美科盛生物技術(shù)有限公司。選擇48只體重、年齡相近的健康柴達(dá)木絨山羊，隨機(jī)分為對(duì)照組、雙歧桿菌組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)8只羊。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)日糧中添加5×106CFU/g雙歧桿菌，預(yù)試期10 d，正式期60 d；分別于30 d和60 d上午空腹頸靜脈采血，進(jìn)行血清分離及相關(guān)血液指標(biāo)檢測(cè)。

1.2 基礎(chǔ)飼糧與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)期間各處理組柴達(dá)木絨山羊的日常飼養(yǎng)管理完全一致，基礎(chǔ)日糧參照中國(guó)肉羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)NRC(2004)，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。在試驗(yàn)中，試驗(yàn)羊可以自由活動(dòng)、進(jìn)食和飲水，并進(jìn)行定期的驅(qū)蟲(chóng)和防疫工作。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

1.3 樣品采集及測(cè)定方法

試驗(yàn)第30 d、60 d早晨空腹頸靜脈采集血液3 mL，室內(nèi)靜置30 min，5 000 r/min離心10 min，吸取上清液進(jìn)行血清分離。分離后的血清于-80℃保存，方便后續(xù)血清生化指標(biāo)的測(cè)定。

1.4 血清生化指標(biāo)測(cè)定

測(cè)定總蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、堿性磷酸酶(ALP)、總膽固醇(TC)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、甘油三酯(TG)、雌二醇(E2)、生長(zhǎng)激素(GH)、胰島素(INS)、尿素(Urea)、球蛋白(GLB)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、白細(xì)胞介素1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素2(IL-2)、白細(xì)胞介素4(IL-4)、白細(xì)胞介素6(IL-6)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脫氫酶(LDH)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)含量。

1.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)先用Excel 2010進(jìn)行初步統(tǒng)計(jì)整理，然后使用IBM SPSS 24.0軟件進(jìn)行T檢驗(yàn)，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊血清生化指標(biāo)的影響

由表2可知，第30 d，試驗(yàn)組AST、ALT、ALP、INS含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，GH含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，試驗(yàn)組血清TP、AIB、TC、TG、E2、Urea含量高于對(duì)照組，但差異不顯著(P>0.05)；第60 d，試驗(yàn)組血清ALB、TC含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，而ALT、ALP、GH、INS、Urea含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，對(duì)照組和試驗(yàn)組之間血清AST、TP、TG、E2含量無(wú)顯著差異(P>0.05)，試驗(yàn)組血清AST、TG含量高于對(duì)照組，但差異不顯著(P>0.05)。

表2 雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊血清生化指標(biāo)的影響

2.2 雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊免疫指標(biāo)的影響

由表3可知，第30 d，試驗(yàn)組血清IgA、IgG、IgM、IL-4含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，而血清IL-2含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，兩組中血清GLB、IL-1beta、IL-6含量無(wú)顯著差異(P>0.05)，且試驗(yàn)組血清GLB、IL-1beta含量高于對(duì)照組(P>0.05)；第60 d，試驗(yàn)組血清GLB、IL-1beta、IL-2、IL-4、IL-6含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，但試驗(yàn)組血清IgM含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，血清IgA、IgG含量在兩組間差異未達(dá)到顯著水平(P>0.05)。

表3 雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊免疫指標(biāo)的影響

2.3 雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊抗氧化指標(biāo)的影響

由表4可知，試驗(yàn)30 d時(shí)，試驗(yàn)組血清LDH含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，而CAT含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，血清SOD、GSH-Px、MDA含量在兩組間未呈現(xiàn)顯著性差異(P>0.05)，試驗(yàn)組血清SOD、GSH-Px含量高于對(duì)照組，但差異不顯著(P>0.05)，而MDA含量低于對(duì)照組(P>0.05)；試驗(yàn)60 d時(shí)，試驗(yàn)組血清GSH-Px含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，其他含量均未呈現(xiàn)出顯著性差異(P>0.05)。

表4 雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊抗氧化指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊血清生化指標(biāo)的影響

動(dòng)物機(jī)體血清中AST的活性或含量隨蛋白質(zhì)代謝的增加而增加[4]，該試驗(yàn)第30 d，試驗(yàn)組血清AST含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，可能是因?yàn)椴襁_(dá)木絨山羊短期飼喂雙歧桿菌后合成蛋白質(zhì)的能力減弱，導(dǎo)致血清中AST活性降低。機(jī)體血清中AST、ALB含量是反映肝臟合成蛋白質(zhì)能力強(qiáng)弱的，是血液中重要的蛋白質(zhì)，在轉(zhuǎn)運(yùn)代謝物、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和維持膠體滲透壓方面起著至關(guān)重要的作用[5]。在本試驗(yàn)第60 d，試驗(yàn)組血清AST、ALB、TC含量高于對(duì)照組，說(shuō)明補(bǔ)充雙歧桿菌能夠促進(jìn)柴達(dá)木絨山羊?qū)Φ鞍踪|(zhì)的消化吸收利用率，改善柴達(dá)木絨山羊肝臟和腎臟功能，這與郭武君[6]、戴東文[7]、王彩蓮等[8]的研究結(jié)果相似。血清ALT活性升高通常意味著肝臟功能障礙，ALP活性增加通常反映心臟或肌肉組織功能障礙[9,10]。在本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組ALT、ALP含量均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，對(duì)于30 d而言，第60 d血清含量的下降幅度更大，這與莫文生等[11]的研究結(jié)果不同，可能是因?yàn)殚L(zhǎng)期補(bǔ)充雙歧桿菌影響了反芻動(dòng)物的瘤胃微生物菌群平衡，且在短期飼喂中能夠加強(qiáng)維持反芻動(dòng)物心臟和肌肉組織功能的代謝，改善體況和機(jī)體肝臟功能，因而反芻動(dòng)物不適合長(zhǎng)期補(bǔ)充雙歧桿菌，但具體調(diào)控機(jī)制尚待進(jìn)一步研究驗(yàn)證。

3.2 雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊免疫指標(biāo)的影響

在免疫相關(guān)的血清生化檢測(cè)中，具有抗體活性的小肽是免疫球蛋白，一種由免疫細(xì)胞和具有抗體活性的細(xì)胞因子合成的球蛋白。它主要在動(dòng)物機(jī)體中起免疫調(diào)節(jié)作用，主要包括IgA、IgM和IgG[12,13]。在本試驗(yàn)第30 d，試驗(yàn)組血清IgA、IgG、IgM含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，且第60 d，試驗(yàn)組僅有血清IgM含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，對(duì)于60 d而言，第30 d血清含量的上升幅度更大，這與胡興義等[14]的研究結(jié)果不同，這可能是短期補(bǔ)充雙歧桿菌能夠顯著改善柴達(dá)木絨山羊的免疫功能。IL-2能夠刺激T淋巴細(xì)胞增殖，IL-4可以抑制促炎因子的產(chǎn)生，IL-6能夠誘導(dǎo)B細(xì)胞分化[15]。在本試驗(yàn)中，第30 d，試驗(yàn)組血清IL-4含量顯著高于對(duì)照組，而第60 d，試驗(yàn)組血清IL-2、IL-4、IL-6含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，對(duì)于60 d而言，第30 d血清含量的降低幅度更小，說(shuō)明短期補(bǔ)充雙歧桿菌能夠提高動(dòng)物機(jī)體的免疫力，這與徐萍[16]、楊春濤[17]的研究結(jié)果相似。

3.3 雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊抗氧化指標(biāo)的影響

在抗氧化相關(guān)血清生化指標(biāo)測(cè)定中，動(dòng)物體內(nèi)SOD、CAT、GSH-Px等指標(biāo)在保護(hù)動(dòng)物機(jī)體免受氧化損傷方面是非常重要的。在一定范圍內(nèi)的活性越高，機(jī)體的抗氧化能力越強(qiáng)[18]。在本試驗(yàn)第30 d，試驗(yàn)組血清SOD、GSH-Px含量高于對(duì)照組，但差異不顯著(P>0.05)。補(bǔ)充雙歧桿菌可以提高生物體的抗氧化能力，雖然在本研究結(jié)果中不明顯，但趨勢(shì)與陳浩等[19]的研究結(jié)果相同。LDH是衡量機(jī)體糖代謝的主要指標(biāo)，LDH越高糖代謝越旺盛，在本試驗(yàn)中，僅有第30 d時(shí)試驗(yàn)組血清LDH含量顯著高于對(duì)照組，這與張勇[20]的研究結(jié)果相似。第60 d，試驗(yàn)組血清GSH-Px含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，其他均無(wú)顯著差異(P>0.05)，而試驗(yàn)第30 d，試驗(yàn)組血清MDA含量低于對(duì)照組，對(duì)于60 d而言，試驗(yàn)組第30 d血清MDA含量降低幅度更小，補(bǔ)充雙歧桿菌60 d時(shí)，雙歧桿菌在MDA調(diào)節(jié)方面可能引起與30 d相反的作用，具體調(diào)節(jié)機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

綜上所述，日糧中短期添加雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊免疫、抗氧化機(jī)能有一定的提高作用，有利于促進(jìn)柴達(dá)木絨山羊的生長(zhǎng)性能。