食管癌是一種高度惡性的癌癥，全球癌癥數(shù)據(jù)顯示，食管癌的發(fā)病率已經(jīng)升至第七位，且發(fā)展中國(guó)家的鱗癌患者死亡率高于腺癌，占比高達(dá)80%

。由于飲酒、抽煙、飲食習(xí)慣和地理因素

，在我國(guó)食管癌的組織類(lèi)型主要以食管鱗癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)為主，多數(shù)患者就診時(shí)已經(jīng)處于中晚期。盡管臨床上可以通過(guò)手術(shù)治療、新輔助放化療等手段提高患者的治療成功率，改善生存質(zhì)量，但由于不同患者對(duì)藥物的敏感性存在差異，臨床預(yù)后仍很不理想。ESCC需要一個(gè)臨床前模型來(lái)預(yù)測(cè)患者的藥物敏感度，以實(shí)現(xiàn)患者的個(gè)體化醫(yī)療。

研究ESCC最常用的模型是細(xì)胞系和患者衍生異種移植(patient-derived xenograft，PDX)。這兩個(gè)模型系統(tǒng)均有相當(dāng)大的缺點(diǎn)。腫瘤細(xì)胞系在培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)生突變，無(wú)法忠實(shí)地模擬腫瘤的原始特征。此外，細(xì)胞培養(yǎng)無(wú)法模擬腫瘤細(xì)胞和其他基質(zhì)細(xì)胞在體內(nèi)的相互作用，因?yàn)榕囵B(yǎng)的細(xì)胞是單一的，缺乏不同細(xì)胞類(lèi)型的層次結(jié)構(gòu)

。PDX具有廣泛的應(yīng)用，然而不能充分反映人類(lèi)腫瘤的遺傳特征和異質(zhì)性

。PDX耗時(shí)、費(fèi)力、培養(yǎng)周期長(zhǎng)、低效和高通量藥物篩選工作困難

。

類(lèi)器官具有傳代穩(wěn)定、操作相對(duì)簡(jiǎn)單、培養(yǎng)周期短等優(yōu)點(diǎn)。同時(shí)能夠長(zhǎng)期保持細(xì)胞的基因組穩(wěn)定性，保留原腫瘤的許多關(guān)鍵特征

。類(lèi)器官培養(yǎng)技術(shù)非常有助于研究癌癥干細(xì)胞分化為不同類(lèi)型的腫瘤細(xì)胞，揭示腫瘤異質(zhì)性、演變和轉(zhuǎn)移的原因，并評(píng)估藥物的療效。

劉彬表示，農(nóng)拓者從成立之初便改變了經(jīng)銷(xiāo)農(nóng)資產(chǎn)品為主的立場(chǎng)，站在農(nóng)民的立場(chǎng)上致力于農(nóng)化服務(wù)，真正滿(mǎn)足農(nóng)民的切身需求，肩負(fù)起了企業(yè)的社會(huì)責(zé)任。他表示，在致力于農(nóng)民增產(chǎn)增收的同時(shí)，農(nóng)拓者還在不斷助力節(jié)水節(jié)肥的高效農(nóng)業(yè)發(fā)展，探索土壤修復(fù)模式，推廣新疆特色品牌農(nóng)產(chǎn)品，今后還將打造綠色種植生產(chǎn)基地，打通農(nóng)民和市場(chǎng)之間的產(chǎn)業(yè)鏈條。

目前ESCC類(lèi)器官的研究較少，培養(yǎng)條件尚未統(tǒng)一。本研究在腫瘤細(xì)胞系3D細(xì)胞球中探索了類(lèi)器官培養(yǎng)條件，并用于ESCC患者來(lái)源類(lèi)器官(patient-derived organoid，PDO)的培養(yǎng)，旨在建立ESCC疾病研究和臨床治療藥物篩選的新興腫瘤模型。

1 材料與方法

根據(jù)我國(guó)發(fā)生的歷次大震，《中國(guó)地震動(dòng)參數(shù)區(qū)劃圖》(GB 18306—2015)新增“極罕遇”地震，形成“四級(jí)地震作用”.極罕遇地震的超越概率為10-4，概率雖低但是還是有可能發(fā)生.為避免RC框架結(jié)構(gòu)在遭遇高于設(shè)防烈度的大震時(shí)發(fā)生“強(qiáng)梁弱柱”破壞，目前大量的學(xué)者和工程師通過(guò)附加被動(dòng)控制的措施來(lái)減少結(jié)構(gòu)的損傷.這些被動(dòng)控制的措施一般包括增加阻尼器和耗能構(gòu)件作為損傷元.但RC框架結(jié)構(gòu)在我國(guó)占據(jù)較大的比例，針對(duì)小概率的大震事件使每個(gè)結(jié)構(gòu)安裝阻尼器和耗能構(gòu)件并非是一種經(jīng)濟(jì)有效的措施.

類(lèi)器官培養(yǎng)基參閱文獻(xiàn)

(見(jiàn)表1～2)。文獻(xiàn)中ESCC類(lèi)器官培養(yǎng)基R-spondin-1和Noggin采用的是條件培養(yǎng)基，具體劑量未知。

1.1.1 ESCC患者腫瘤標(biāo)本的收集：收集鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院11例ESCC患者腫瘤標(biāo)本。患者均為術(shù)前未接受放化療等的初診初治病例，所有組織標(biāo)本經(jīng)術(shù)后病理診斷證實(shí)為ESCC。本研究獲得了研究病例的患者和家屬知情同意及鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院倫理審查會(huì)批準(zhǔn)(倫審批件號(hào)：2021329)。

鐵路運(yùn)輸?shù)陌踩允切熊?chē)調(diào)度的第一要素，也是鐵路運(yùn)輸部門(mén)的義務(wù)和職責(zé)。鐵路行車(chē)調(diào)度部門(mén)憑借信息化調(diào)度管理設(shè)備和先進(jìn)的鐵路調(diào)度管理理論，能夠制訂出最優(yōu)化的行車(chē)調(diào)度規(guī)范方案。在節(jié)假日或重大紀(jì)念日活動(dòng)時(shí)，鐵路運(yùn)輸壓力會(huì)局部性的出現(xiàn)高峰，這時(shí)對(duì)鐵路行車(chē)調(diào)度部門(mén)的管理提出了更高的要求。調(diào)度管理人員作為行車(chē)的指揮單位，在進(jìn)行集約化調(diào)度管理的過(guò)程中還要發(fā)揮行車(chē)監(jiān)管義務(wù)，及時(shí)發(fā)出行車(chē)調(diào)度命令，保障鐵路運(yùn)輸安全。

1.1.3 主要試劑及儀器：高內(nèi)涵成像系統(tǒng)(Molecular Devices，IXM-c)；Human R-spondin-1(PeproTech，120-38-100)；Human EGF(PeproTech，AF-100-15-500)；Human Noggin(PeproTech，120-10C)；N-2添加劑100×(Thermo Fisher，17502-048)；B27添加劑(GIBCO，17504044)；Dispase Ⅱ干粉無(wú)酚(Invitrogen，17105-041)；DNase I(Sigma，10104159001)；N-乙酰基-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine，NAC)(Sigma，A7250-5G)；膠原酶Ⅳ(Solarbio，C8160-18)；Hanks平衡鹽搭液HBSS(Invitrogen，14175095)；三抗混合物(Invitrogen，1524-0062)；Matrigel(BD，356234)；Y-27632(hydrochloride)(PeproTech，1293823)；硫酸慶大霉素(BI，03-035-1B)；STI(Sigma，T9128);GlutaMAX-I(Invitrogen，35050061)；DPBS磷酸鹽緩沖液(Invitrogen，14190-144)；HEPES緩沖液IM(Invitrogen，5630080)；DMEM/F-12培養(yǎng)基(Biological Industries)。

1.1.2 人ESCC細(xì)胞系來(lái)源：本研究使用的人ESCC細(xì)胞系KYSE-450來(lái)自鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)研究中心保存的細(xì)胞株。

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)：KYSE450在含質(zhì)量濃度為100 g/L FBS的1640培養(yǎng)基，37 ℃、體積分?jǐn)?shù)為5%的CO

的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

黨的十八大以來(lái)，習(xí)近平總書(shū)記反復(fù)強(qiáng)調(diào)要把人民利益放在至高無(wú)上的地位，多做惠民生、促改革的實(shí)事好事，讓人民有更多獲得感幸福感。他認(rèn)為，為人民謀幸福是中國(guó)共產(chǎn)黨人的初心；共享發(fā)展是社會(huì)主義的本質(zhì)要求；增進(jìn)民生福祉是發(fā)展的根本目的；共同富裕是中國(guó)特色社會(huì)主義的根本原則；明確新時(shí)代我國(guó)社會(huì)主要矛盾的新變化，必須堅(jiān)持以人民為中心的發(fā)展思想，不斷促進(jìn)人的全面發(fā)展、全體人民共同富裕。社會(huì)主義并不高深，人民幸福就是社會(huì)主義……習(xí)近平總書(shū)記的這些重要論述，使科學(xué)社會(huì)主義更接地氣、更加深入人心，為我們黨高舉中國(guó)特色社會(huì)主義偉大旗幟不動(dòng)搖奠定了堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)、實(shí)踐基礎(chǔ)和群眾基礎(chǔ)。

1.2.3 R-spond-1和Noggin濃度的優(yōu)化：將類(lèi)器官培養(yǎng)基分別設(shè)置R-spondin-1濃度100 ng/ml、200 ng/ml和300 ng/ml；Noggin濃度40 ng/ml、80 ng/ml和120 ng/ml各三組。在種板后用不同濃度的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞球，高倍鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野對(duì)細(xì)胞球形成數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)。

1.2.4 患者來(lái)源的ESCC類(lèi)器官的建立：手術(shù)中取下ESCC組織立刻浸泡在冰上預(yù)冷的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，冰盒30 min內(nèi)運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室并開(kāi)始立即操作。每個(gè)樣本分為三部分，分別用于PDO培養(yǎng)、液氮凍存及組織固定。在生物安全柜中處理用于類(lèi)器官培養(yǎng)的組織，用含三抗(青霉素、鏈霉素和兩性霉素B)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基沖洗10次以上，然后用于PDO培養(yǎng)。

無(wú)菌眼科剪盡量剪碎組織，加入HBSS-DFCY(HBSS，膠原酶Ⅳ，Dispase，三抗，Y-27632)，37 ℃水浴消化30 min；離心后棄去上清，加入胰蛋白酶-EDTA重懸沉淀，并在37 ℃水浴孵育10 min。100 μm濾網(wǎng)過(guò)濾到裝有8 ml胰蛋白酶抑制劑(STI)的50 ml管中，1 000 r/min離心5 min，棄上清，加入1 ml類(lèi)器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，臺(tái)盼藍(lán)染色判斷細(xì)胞活力。PDO培養(yǎng)同上，所用培養(yǎng)板為24孔板。

采用R version 3.5.3軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。符合正態(tài)檢驗(yàn)，方差齊時(shí)，采用

分析進(jìn)行多組間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異比較，組間兩兩比較時(shí)采用LSD方法進(jìn)行。

<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2.5 類(lèi)器官的傳代和凍存：培養(yǎng)14 d左右，待類(lèi)器官長(zhǎng)到直徑100 μm，可進(jìn)行類(lèi)器官傳代。24孔板中每孔中加入預(yù)冷的500 μl DPBS，破碎Matrigel，離心后用Dispase消化Matrigel 30 min后，換新的Dispase再次消化得到類(lèi)器官，常規(guī)傳代或凍存。

1.2.2 3D細(xì)胞球培養(yǎng)：細(xì)胞穩(wěn)定傳2～3代生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，質(zhì)量濃度為2.5 g/L胰酶消化傳代和計(jì)數(shù)。用預(yù)冷的槍頭將細(xì)胞和Matrigel混合，并接種在37 ℃預(yù)熱的96孔板中，每孔5 μl含細(xì)胞的Matrigel，培養(yǎng)箱中30 min使Matrigel固化，加入含Y27632的100 μl預(yù)熱的ESCC類(lèi)器官培養(yǎng)基。

2 結(jié)果

宣教前，有633例患者了解肺炎疫苗，有622例患者認(rèn)知疫苗能預(yù)防肺炎，有439例患者愿意接種，分別 占 63.30%（633/1 000）、62.20%（622/1 000）、43.90%（439/1 000）；宣教后，有711例患者了解肺炎疫苗，有703例患者認(rèn)知疫苗能預(yù)防肺炎，有524例患者愿意接種，分別占 71.10%（711/1 000）、70.30%（703/1 000）、52.40%（524/1 000）；組間比較，患者宣教后的了解肺炎疫苗率、疫苗能預(yù)防肺炎率、愿意接種率均更高于宣教前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 見(jiàn)表2。

柑桔紅蜘蛛的防治是贛南臍橙病蟲(chóng)害防治中一項(xiàng)很重要的工作。柑桔紅蜘蛛一年代數(shù)很多，為害大。為提高臍橙的產(chǎn)量與質(zhì)量，柑桔紅蜘蛛防治工作必須持之以恒。

用文獻(xiàn)報(bào)道的培養(yǎng)條件，以及文獻(xiàn)建議的R-spondin-1和Noggin濃度

，用ESCC細(xì)胞系KYSE-450培養(yǎng)細(xì)胞球，初步觀(guān)察類(lèi)器官培養(yǎng)的可行性。如圖1所示，KYSE-450來(lái)源的3D細(xì)胞球，第7天可以形成直徑超過(guò)50 μm的細(xì)胞球，高倍鏡下呈現(xiàn)實(shí)心圓球狀。

ESCC類(lèi)器官培養(yǎng)基的成分，大多使用含R-spond-1和Noggin的條件培養(yǎng)基，而不是重組純化的R-spond-1和Noggin蛋白

。由于條件培養(yǎng)基中成分復(fù)雜，對(duì)類(lèi)器官生長(zhǎng)分化的影響未可知，而且已經(jīng)有市售的R-spondin-1和Noggin。因此，本研究對(duì)這兩個(gè)因子的最佳濃度進(jìn)行了探索。R-spondin-1和Noggin在三組中設(shè)置的最低濃度組(R-spondin-1 100 ng/ml，Noggin 40 ng/ml)均有大量細(xì)胞球崩解死亡，中濃度組(R-spondin-1 200 ng/ml，Noggin 80 ng/ml)有少數(shù)死亡，最高濃度組(R-spondin-1 300 ng/ml，Noggin 120 ng/ml)均未見(jiàn)細(xì)胞球崩解。且最低濃度組與中、高濃度組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

<0

001)，中高濃度組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

>0.05)(見(jiàn)圖2)。由此得出,R-spondin-1的最佳濃度為200～300 ng/ml，Noggin的最佳濃度為80～120 ng/ml。

本研究在11例ESCC患者的手術(shù)組織新鮮標(biāo)本中構(gòu)建成功了9例ESCC PDO，成功率為82%(見(jiàn)圖3)。高倍鏡下如圖4所示。其中1例組織是因污染中斷培養(yǎng)。由于PDO來(lái)源于原發(fā)腫瘤組織，鏡下視野中成分復(fù)雜，含有崩解的組織和細(xì)胞碎片以及纖維結(jié)締組織，不同患者類(lèi)器官形成數(shù)量也存在差異。但PDO細(xì)胞團(tuán)中，盡管也是多種細(xì)胞的混合成分，但組織結(jié)構(gòu)相對(duì)均一。

“十人成桌”早已成為中國(guó)宴席的固定模式，觥籌交錯(cuò)，人聲鼎沸的千年時(shí)空中，卻似乎無(wú)人知曉，這種風(fēng)俗習(xí)慣起源于何時(shí)？

3 討論

本研究首先在ESCC細(xì)胞系KYSE-450中培養(yǎng)3D細(xì)胞球，利用細(xì)胞球模型探索ESCC類(lèi)器官的培養(yǎng)條件。確定了PDO培養(yǎng)基中的兩個(gè)關(guān)鍵因子R-spondin-1、Noggin的濃度。在11例患者手術(shù)組織標(biāo)本中建立了9個(gè)PDO，成功率82%。可以傳代再生的類(lèi)器官豐富了ESCC的體外細(xì)胞模型，為研究腫瘤的發(fā)生發(fā)展機(jī)制以及藥敏檢測(cè)，提供了更為便捷的方法。

為了實(shí)現(xiàn)ESCC類(lèi)器官的長(zhǎng)期體外培養(yǎng)，需要在培養(yǎng)基中引入多種生長(zhǎng)因子，多數(shù)因子與ESCC干細(xì)胞的增殖和分化相關(guān)，并抑制干細(xì)胞的凋亡。其中R-spondin-1、Noggin和EGF對(duì)ESCC細(xì)胞的附著和生長(zhǎng)過(guò)程中的信號(hào)通路的激活至關(guān)重要

。R-spondin-1是G蛋白偶聯(lián)受體4/5(G-protein coupled receptor 4/5, LGR4/5)配體，一種Wnt通路激動(dòng)劑，富含亮氨酸重復(fù)序列，可以在體外長(zhǎng)期保持干細(xì)胞種群增長(zhǎng)

。Noggin是骨形態(tài)發(fā)生蛋白抑制劑，可以取代缺失的Niche相關(guān)的信號(hào)分子，促進(jìn)干細(xì)胞增殖，增加初始類(lèi)器官的形成數(shù)量，并加快擴(kuò)增速度

。EGF與EGF受體結(jié)合，通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂來(lái)促進(jìn)ESCC上皮細(xì)胞的增殖，以實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期保持有機(jī)體生長(zhǎng)的目的

。Y-27632是Rho相關(guān)卷曲螺旋蛋白激酶(Rho-associated coiled-coil forming protein kinase, ROCK)抑制劑可有效減少干細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中的凋亡

。在構(gòu)建ESCC類(lèi)器官培養(yǎng)體系的過(guò)程中，R-spondin-1、Noggin多是采用條件培養(yǎng)基替代

。條件培養(yǎng)基成分復(fù)雜，可能存在類(lèi)器官生長(zhǎng)分化的潛在影響；同時(shí)精確類(lèi)器官培養(yǎng)條件，使得更加方便臨床的推廣應(yīng)用，本研究確定了R-spondin-1、Noggin在ESCC類(lèi)器官培養(yǎng)中的濃度。

從患者組織來(lái)源的類(lèi)器官是一個(gè)被廣泛接受的實(shí)用疾病模型，與2D或3D培養(yǎng)細(xì)胞系相比，腫瘤類(lèi)器官的優(yōu)勢(shì)在于保留了原患者組織中癌細(xì)胞的特征，包括其分化形態(tài)和對(duì)藥物的反應(yīng)

。PDX模型需要在動(dòng)物體內(nèi)定植和增殖，操作復(fù)雜、時(shí)間成本高、藥敏篩選時(shí)效性差。越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)，PDO作為腫瘤發(fā)病機(jī)制研究、藥物發(fā)現(xiàn)和個(gè)性化醫(yī)療的改進(jìn)平臺(tái)，更具有優(yōu)勢(shì)。Li等

使用來(lái)自5例不同患者的27種肝癌類(lèi)器官系篩選了129種癌癥藥物，發(fā)現(xiàn)一些藥物在類(lèi)器官之間的反應(yīng)具有高度異質(zhì)性。Weeber等

在乳腺癌患者使用新型藥物治療前，利用乳腺癌PDO對(duì)各種藥物的劑量和敏感性進(jìn)行檢測(cè)。這種應(yīng)用解決了新型藥物開(kāi)發(fā)中動(dòng)物模型的各種限制，縮短了藥物檢測(cè)所需的時(shí)間，為臨床治療提供了有效的參考。Nanki等

利用CRISPR-Cas9技術(shù)，在PDO平臺(tái)上敲除了胃類(lèi)器官的抑癌基因CDH1和癌基因RHOA后，正常胃類(lèi)器官轉(zhuǎn)變?yōu)榱宋赴╊?lèi)器官，證明了這一平臺(tái)可以很好地用于胃癌的發(fā)生研究。

類(lèi)器官在目前腫瘤研究中應(yīng)用集中在藥物篩選、個(gè)體化治療、腫瘤發(fā)病機(jī)制研究等方面。作為一種新的強(qiáng)大的臨床前模型，現(xiàn)有的PDO培養(yǎng)結(jié)果仍有缺陷，其腫瘤微環(huán)境是單一的，缺乏基質(zhì)、血管和免疫細(xì)胞等，PDO的培養(yǎng)條件仍需要改進(jìn)和優(yōu)化，以便提高其成功率及擴(kuò)增效率，提高和原發(fā)腫瘤的一致性。類(lèi)器官模型需要在個(gè)體化醫(yī)療和疾病模型中不斷優(yōu)化，結(jié)合工程學(xué)方法，類(lèi)器官將成為基礎(chǔ)研究和臨床研究的寶貴工具。

[1] Ferlay J, Shin HR, Bray F, et al. Estimates of worldwide burden of cancer in 2008: GLOBOCAN 2008 [J]. Int J Cancer, 2010, 127(12): 2893-2917. DOI: 10.1002/ijc.25516.

[2] Chen W, Zheng R, Baade PD, et al. Cancer statistics in China, 2015 [J]. CA Cancer J Clin, 2016, 66(2): 115-132. DOI: 10.3322/caac.21338.

[3] Sharma SV, Haber DA, Settleman J. Cell line-based platforms to evaluate the therapeutic efficacy of candidate anticancer agents [J]. Nat Rev Cancer, 2010, 10(4): 241-253. DOI: 10.1038/nrc2820.

[4] Hahn WC, Weinberg RA. Modelling the molecular circuitry of cancer [J]. Nat Rev Cancer, 2002, 2(5): 331-341. DOI: 10.1038/nrc795.

[5] Ben-David U, Ha G, Tseng YY, et al. Patient-derived xenografts undergo mouse-specific tumor evolution [J]. Nat Genet, 2017, 49(11): 1567-1575. DOI: 10.1038/ng.3967.

[6] Zhou J, Su J, Fu X, et al. Microfluidic device for primary tumor spheroid isolation [J]. Exp Hematol Oncol, 2017, 6: 22. DOI: 10.1186/s40164-017-0084-3.

[7] Byrne AT, Alférez DG, Amant F, et al. Interrogating open issues in cancer precision medicine with patient-derived xenografts [J]. Nat Rev Cancer, 2017, 17(4): 254-268. DOI: 10.1038/nrc.2016.140.

[8] Huch M, Gehart H, van Boxtel R, et al. Long-term culture of genome-stable bipotent stem cells from adult human liver [J]. Cell, 2015, 160(1-2): 299-312. DOI: 10.1016/j.cell.2014.11.050.

[9] Georgakopoulos N, Prior N, Angres B, et al. Long-term expansion, genomic stability and in vivo safety of adult human pancreas organoids [J]. BMC Dev Biol, 2020, 20(1): 4. DOI: 10.1186/s12861-020-0209-5.

[10] Kijima T, Nakagawa H, Shimonosono M, et al. Three-dimensional organoids reveal therapy resistance of esophageal and oropharyngeal squamous cell carcinoma cells [J]. Cell Mol Gastroenterol Hepatol, 2018, 7(1): 73-91. DOI: 10.1016/j.jcmgh.2018.09.003.

[11] Karakasheva TA, Kijima T, Shimonosono M, et al. Generation and characterization of patient-derived head and neck, oral, and esophageal cancer organoids [J]. Curr Protoc Stem Cell Biol, 2020, 53(1): e109. DOI: 10.1002/cpsc.109.

[12] Zhao M, Xiong X, Ren K, et al. Deficiency in intestinal epithelial O-GlcNAcylation predisposes to gut inflammation [J]. EMBO Mol Med, 2018, 10(8): e8736. DOI: 10.15252/emmm.201708736.

[13] 伍寧波. MEKK2促進(jìn)腸道上皮損傷修復(fù)的機(jī)制研究[D]. 上海：上海交通大學(xué), 2018.

[14] Xu H, Lyu X, Yi M, et al. Organoid technology and applications in cancer research [J]. J Hematol Oncol, 2018, 11(1): 116. DOI: 10.1186/s13045-018-0662-9.

[15] Sato T, Clevers H. Growing self-organizing mini-guts from a single intestinal stem cell: mechanism and applications [J]. Science, 2013, 340(6137): 1190-1194. DOI: 10.1126/science.1234852.

[16] Carmon KS, Gong X, Lin Q, et al. R-spondins function as ligands of the orphan receptors LGR4 and LGR5 to regulate Wnt/beta-catenin signaling [J]. Proc Natl Acad Sci U S A, 2011, 108(28): 11452-11457. DOI: 10.1073/pnas.1106083108.

[17] Cook C, Vezina CM, Allgeier SH, et al. Noggin is required for normal lobe patterning and ductal budding in the mouse prostate [J]. Dev Biol, 2007, 312(1): 217-230. DOI: 10.1016/j.ydbio.2007.09.038.

[18] Albitar L, Pickett G, Morgan M, et al. EGFR isoforms and gene regulation in human endometrial cancer cells [J]. Mol Cancer, 2010, 9: 166. DOI: 10.1186/1476-4598-9-166.

[19] Clevers H. Modeling development and disease with organoids [J]. Cell, 2016, 165(7): 1586-1597. DOI: 10.1016/j.cell.2016.05.082.

[20] Kondo J, Inoue M. Application of cancer organoid model for drug screening and personalized therapy [J]. Cells, 2019, 8(5): 470. DOI: 10.3390/cells8050470.

[21] Liu HD, Xia BR, Jin MZ, et al. Organoid of ovarian cancer: genomic analysis and drug screening [J]. Clin Transl Oncol, 2020, 22(8): 1240-1251. DOI: 10.1007/s12094-019-02276-8.

[22] Li L, Knutsdottir H, Hui K, et al. Human primary liver cancer organoids reveal intratumor and interpatient drug response heterogeneity [J]. JCI Insight, 2019, 4(2): e121490. DOI: 10.1172/jci.insight.121490.

[23] Weeber F, Ooft SN, Dijkstra KK, et al. Tumor organoids as a pre-clinical cancer model for drug discovery [J]. Cell Chem Biol, 2017, 24(9): 1092-1100. DOI: 10.1016/j.chembiol.2017.06.012.

[24] Nanki K, Toshimitsu K, Takano A, et al. Divergent routes toward Wnt and R-spondin niche independency during human gastric carcinogenesis [J]. Cell, 2018, 174(4): 856-869.e17. DOI: 10.1016/j.cell.2018.07.027.