王國艷，張國權(quán)，范建強，黨文慶，何 敏

（1.山西農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學學院，山西 太原 030032；2.婁煩縣萬順源農(nóng)牧發(fā)展有限公司，山西 太原 030300）

大腸桿菌是自然界中的常在菌，也是人和動物腸道中的常在菌，一般對人和動物機體無危害，但在一定條件刺激下可引起人或動物不同程度的疾病[1-2]。禽大腸桿菌病的臨床病變包括氣囊炎、卵黃性腹膜炎、輸卵管炎、敗血癥等局部或全身感染。該病經(jīng)消化道、呼吸道等多種途徑傳播，易與其他疾病混合感染，引起較大的經(jīng)濟損失[3-4]。豬源大腸桿菌能夠引起仔豬腹瀉，引發(fā)仔豬水腫病、仔豬黃痢、仔豬白痢等疾病，病死率較高[3,5-6]。牛源大腸桿菌可引起發(fā)病快、病死率高牛的腹瀉疾病，也是奶牛乳房炎的致病性因素之一[7-9]。大腸桿菌因其血清型眾多，常出現(xiàn)免疫失效等現(xiàn)象，臨床上多采用抗生素治療，導致大腸桿菌耐藥菌株不斷出現(xiàn)，加劇體內(nèi)殘留情況[10]。

為了解山西地區(qū)大腸桿菌對臨床常用抗菌藥的耐藥性流行情況，本研究對山西農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學學院龍城校區(qū)生物工程研究室分離鑒定的196株大腸桿菌進行藥物敏感試驗，旨在為獸醫(yī)臨床提供合理用藥依據(jù)，為大腸桿菌耐藥性的進一步研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 菌株來源

196株甘油凍存的大腸桿菌菌株由山西農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學學院龍城校區(qū)生物工程研究室分離鑒定。其中，雞源大腸桿菌97株、豬源大腸桿菌56株、牛源大腸桿菌43株。

選取大腸桿菌ATCC25922 為質(zhì)控菌，購自中國普通微生物菌種保存中心。

1.1.2 試劑與培養(yǎng)基

培養(yǎng)基：LB 營養(yǎng)肉湯、普通瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基（EMB）、MH 瓊脂培養(yǎng)基，均購自青島賓得生物技術(shù)有限公司。

藥敏紙片：阿米卡星（10μɡ/片）、頭孢曲松（30μɡ/片）、頭孢哌酮（30 μɡ/片）、頭孢克洛（30 μɡ/片）、頭孢氨芐（30μɡ/片）、卡那霉素（30μɡ/片）、慶大霉素（10μɡ/片）、鏈霉素（10μɡ/片）、四環(huán)素（30μɡ/片）、氟苯尼考（30μɡ/片）、青霉素（10 μɡ/片）、阿莫西林（10 μɡ/片）、諾氟沙星（10μɡ/片）、氧氟沙星（10μɡ/片），均購自北京天壇生物制品有限公司。

1.1.3 儀器設備

超凈工作臺（北京半導體設備一廠）、YX 系列手提式壓力蒸汽滅菌器（江陰濱江醫(yī)療設備有限公司）、ZD-85氣浴恒溫振蕩器（江蘇金壇市金城國勝實驗儀器廠）、恒溫培養(yǎng)箱（上海?，攲嶒炘O備有限公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 菌種復蘇

吸取100 μL 在常溫下解凍的甘油凍存得菌種，加入5 mL 的LB 肉湯試管；放入氣浴溫培養(yǎng)振蕩器（37 ℃、1 200 r/min）中培養(yǎng)10 h；將培養(yǎng)物劃線接種于伊紅美蘭平板培養(yǎng)基，37 ℃恒溫培養(yǎng)12 h。

1.2.2 藥敏試驗

參照NCCLS 推薦的KB 紙片擴散法進行藥敏試驗。采用實驗室常規(guī)9 cm培養(yǎng)皿制作MH培養(yǎng)基平板備用，菌液以無菌棉棒均勻涂于MH 平板，按照每個平板6 或7 個藥敏紙片的要求，將藥敏紙片緊貼于MH平板上。37 ℃培養(yǎng)20 h，使用尺測量抑菌圈的直徑。

參照各藥物的藥敏判定標準進行判定細菌耐藥性，抑菌圈直徑大于中敏范圍的為敏感，小于中敏范圍的為耐藥。中敏（中介度）判定標準見表1。

表1 藥物中介度判定標準Tab.1 Drug intermediary degree judgment criteria

2 結(jié)果與分析

2.1 雞源大腸桿菌的藥敏結(jié)果（見表2）

表2 雞源大腸桿菌的藥敏結(jié)果Tab.2 Drug susceptibility results of chicken-derived Escherichia coli

由表2 可知，97 株雞源大腸桿菌對卡那霉素、阿米卡星、氟苯尼考敏感，高敏率分別為81.44%、88.66%和88.66%；對慶大霉素高度耐藥，耐藥率可達100.00%。

2.2 豬源大腸桿菌的藥敏結(jié)果（見表3）

由表3 可知，56 株豬源大腸桿菌對卡那霉素、阿米卡星、頭孢氨芐敏感度較高，分別為48.21%、55.36%和46.43%；對慶大霉素、氧氟沙星高度耐藥，耐藥率分別為100.00%和91.07%。

表3 豬源大腸桿菌的藥敏結(jié)果Tab.3 Drug susceptibility results of pig-derived Escherichia coli

2.3 牛源大腸桿菌的藥敏結(jié)果（見表4）

由表4可知，43株牛源大腸桿菌對卡那霉素的耐藥率為53.49%；對阿莫西林、慶大霉素、頭孢克羅、頭孢氨芐、頭孢哌酮的耐藥率相對較低，介于10%～42%之間；對阿米卡星、氟苯尼考、頭孢曲松、氧氟沙星、諾氟沙星的耐藥率均為0。

表4 牛源大腸桿菌的藥敏結(jié)果Tab.4 Drug susceptibility results of bovine-derived Escherichia coli

3 討論

本研究分離鑒定的196株大腸桿菌來自山西區(qū)域內(nèi)多個畜禽養(yǎng)殖場，分離株對慶大霉素等多種臨床常用獸用藥物的耐藥率較高，與遼寧、四川、內(nèi)蒙古報道的牛乳房炎大腸桿菌的耐藥情況不同[11-13]。分離株對頭孢類藥物表現(xiàn)不同程度的耐藥，與湖南省部分地區(qū)的大腸桿菌耐藥情況相近[14]，與新疆阿克蘇地區(qū)的大腸桿菌耐藥情況不同[15]。分離株對阿米卡星、氟苯尼考、卡那霉素等敏感率較高，但其中豬源大腸桿菌對氟苯尼考的耐藥率為71.43%，與劉艷紅等[16]、趙麗青等[17]、吳華等[18]報道的大腸桿菌對氟苯尼考的高耐藥率一致。秦春芝等[19]分離的山東省禽源致病性大腸桿菌菌株對阿莫西林的耐藥率較高，達100%，與本研究禽源大腸桿菌對阿莫西林有較低的耐藥性不同。孫偉等[20]研究表明，銅仁市豬源大腸桿菌對氧氟沙星有較強的耐藥性，與本研究結(jié)果基本一致。高?；鄣萚21]研究發(fā)現(xiàn)，寧夏地區(qū)牛源大腸桿菌對阿莫西林、氟苯尼考的耐藥率達90%以上，與本研究中牛源大腸桿菌對阿莫西林、氟苯尼考敏感性較高的結(jié)果完全不同。因此，不同地域、不同時間、不同物種來源的大腸桿菌的耐藥性不同。

4 結(jié)論

大腸桿菌的耐藥流行情況隨時間、地域的不同有所變化。為減少大腸桿菌耐藥性增加的風險，應在合理使用藥物的同時，完善大腸桿菌的監(jiān)控措施，隨時了解耐藥性的動態(tài)變化，為臨床合理用藥提供指導，防控動物源細菌耐藥性發(fā)生蔓延。