楊福雙，曹 方，孔一卜，徐 炎，王中天，孫麗平

（1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長(zhǎng)春 130117；2.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院兒童診療中心，吉林 長(zhǎng)春 130021）

肺炎是兒童最常見(jiàn)的一種呼吸系統(tǒng)疾病，多由呼吸道病毒、細(xì)菌、非典型微生物單獨(dú)或混合感染所致［1］，支氣管壁和肺泡的炎癥是其基本病理改變，臨床上以發(fā)熱、咳嗽、氣促、肺部固定中細(xì)濕啰音為主要表現(xiàn)［2］。因其發(fā)病率在兒童呼吸系統(tǒng)疾病中占首位，故該病已被列為我國(guó)重點(diǎn)防治的小兒疾病之一［3］。兒童肺炎相當(dāng)于祖國(guó)醫(yī)學(xué)中的肺炎喘嗽，因感受六淫之邪而發(fā)病，現(xiàn)代醫(yī)家普遍認(rèn)為痰、熱為其病理產(chǎn)物，肺氣郁閉是其病機(jī)關(guān)鍵［4］。

藥對(duì)即兩藥配伍，相互依賴、相互制約，從而起到協(xié)同作用以增效減毒。桑白皮-地骨皮藥對(duì)是宋代錢乙《小兒藥證直訣》中瀉白散的重要藥物組合。桑白皮甘寒，入肺中氣分，瀉肺中邪熱，以瀉肺平喘；地骨皮甘淡而寒，入走血分，清熱涼血，清肺中伏火；二藥配伍，氣血雙清，增強(qiáng)清肺熱、瀉肺火、瀉肺氣、祛痰嗽、平喘逆之效［5］。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明桑白皮的主要化學(xué)成分是黃酮類，包括桑素、桑根酮A-P、桑白皮素C、D 等，具有抗炎、鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用［6］；地骨皮成分是生物堿類、蒽醌類和有機(jī)酸及其酯類，主要包括地骨皮甲素、大黃素、亞油酸等，具有解熱、抑菌消炎和調(diào)節(jié)免疫等作用［7］；臨床研究也發(fā)現(xiàn)含桑白皮-地骨皮的方劑對(duì)兒童肺炎有良好的治療效果［8，9］，但其藥效的具體物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制尚不明確。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是融合分子生物學(xué)、生物信息學(xué)、藥理學(xué)和多個(gè)網(wǎng)絡(luò)計(jì)算平臺(tái)等的新興科學(xué)，它從宏觀到微觀層面多層次地闡釋藥物與疾病的關(guān)聯(lián)性，利用多種計(jì)算機(jī)軟件和數(shù)據(jù)平臺(tái)將作用機(jī)制可視化，直觀地闡明中藥對(duì)疾病多分子、多靶點(diǎn)、多通路的分子機(jī)制［10，11］。因此，本研究以網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)為研究方法構(gòu)建“成分-靶點(diǎn)-通路-疾病”的多維網(wǎng)絡(luò)，探討桑白皮-地骨皮藥對(duì)治療兒童肺炎的潛在分子機(jī)制，為桑白皮-地骨皮藥對(duì)的臨床應(yīng)用以及兒童肺炎的臨床與基礎(chǔ)研究提供參考。

1 資料與方法

1.1 數(shù)據(jù)庫(kù)與軟件

中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP，http：//tcmspw.com/tcmsp.php）；中藥分子機(jī)制的生物信息學(xué)分析工具（BATMAN-TCM，http：//bionet. ncpsb. org/batman-tcm/）；PubMed 數(shù) 據(jù) 庫(kù)（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov）；GeneCards 數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//www.genecards.org/）；DrugBank 數(shù) 據(jù) 庫(kù)（http：//www. drugbank. ca/）；Unitprot 數(shù) 據(jù) 庫(kù)（http：//www. Unitprot. org/）；Bioconductor 平 臺(tái)（http：//www.bioconductor.org/）；Cytoscape 3.7.2軟 件（https：//cytoscape.org/）；R 語(yǔ) 言3.5.2 軟 件（http：//www. r-project. org/）；Perl 3.6.0 軟 件（https：//www.perl.org/）；韋恩圖繪制平臺(tái)（http：//bioinformatics. psb. ugent. be/webtools/Venn/） ；STRING 平臺(tái)（http：//string-db.org/）。

1.2 藥物所含成分及對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)的篩選

在TCMSP 與BATMAN-TCM 在線預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)中分別以“桑白皮”、“地骨皮”為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索化學(xué)成分，收集口服生物利用度（OB）≥30%且同時(shí)滿足類藥性（DL）≥0.18 的活性成分，并從TCMSP 中查找活性成分對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)蛋白，通過(guò)Unitprot 數(shù)據(jù)庫(kù)確定靶點(diǎn)蛋白的基因簡(jiǎn)稱。

1.3 兒童肺炎靶點(diǎn)的預(yù)測(cè)

以“infantile pneumonia”“children pneumonia”“pneumonia in children”為關(guān)鍵詞 對(duì)GeneCards 和PubMed 中GEO 數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，對(duì)兒童肺炎的相關(guān)基因進(jìn)行收集。同時(shí)根據(jù)臨床指南了解治療兒童肺炎的上市藥物，在DrugBank Database 中收集相關(guān)藥物的作用靶點(diǎn)，最后將以上檢索結(jié)果整合剔重后，建立兒童肺炎的預(yù)測(cè)靶點(diǎn)庫(kù)。

1.4 活性成分-關(guān)鍵靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

利用韋恩圖在線繪制工具將中藥活性成分的作用靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)進(jìn)行匹配映射，并繪制韋恩圖獲得二者共同基因即桑白皮-地骨皮活性成分治療肺炎的潛在作用靶點(diǎn)。以Cytoscape 3.7.2 構(gòu)建“活性成分-關(guān)鍵靶點(diǎn)”調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，將桑白皮-地骨皮治療兒童肺炎的作用機(jī)制可視化，其中節(jié)點(diǎn)的類型為活性成分和中藥-疾病共同靶點(diǎn)。

1.5 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治?/h3>

將桑白皮-地骨皮與疾病的共同靶點(diǎn)上傳至STRING 平臺(tái)構(gòu)建蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)（PPI）；將蛋白相互作用基因輸入在Cytoscape 3.7.2 軟件的“BisoGenet”插件中，“Organism”選擇“Homo sapiens”，映射范圍選擇“Gene”，數(shù)據(jù)庫(kù)來(lái)源選擇“DIP、BIOGRID、HPRD、INTACT、MINT、BIND”，其余參數(shù)為默認(rèn)，以進(jìn)一步分析相互作用關(guān)系；將上述“BisoGenet”插件獲得的相互作用網(wǎng)絡(luò)利用CytoNCA插件進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治?，首先以Degree 為過(guò)濾條件進(jìn)行分析，將得到的網(wǎng)絡(luò)以Betweenness 為過(guò)濾條件進(jìn)行再次分析，最終得到PPI 核心網(wǎng)絡(luò)。

1.6 GO 功能分析及KEGG 通路富集分析

利用R 語(yǔ)言和Bioconductor 平臺(tái)對(duì)獲得的交集基因進(jìn)行GO 功能分析和KEGG 通路富集分析。GO 富集分析結(jié)果應(yīng)包括生物過(guò)程（Biological process，BP）、細(xì)胞組分（Cellular component，CC）和分子功能（Molecular function，MF）三方面，對(duì)所獲得閾值P＜0.001［12］的生物學(xué)過(guò)程和通路根據(jù)富集基因數(shù)目由多到少進(jìn)行降序排列，選取富集基因數(shù)目位居前列的生物學(xué)過(guò)程和通路作為本次研究的主要討論對(duì)象。

1.7 潛在作用靶點(diǎn)與關(guān)鍵通路網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

得到參與兒童肺炎的20 條KEGG 通路后，與中藥-疾病共同靶點(diǎn)均按照數(shù)據(jù)、屬性文件進(jìn)行數(shù)據(jù)編排后形成txt 格式文件，將其共同輸入到Cytoscape 3.7.2 軟件中，構(gòu)建潛在作用靶點(diǎn)與KEGG 通路網(wǎng)絡(luò)關(guān)系。

2 結(jié)果

2.1 桑白皮-地骨皮活性成分的篩選

通過(guò)TCMSP 與BATMAN-TCM 在線預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)共檢索得到桑白皮化學(xué)成分194 個(gè)，地骨皮化學(xué)成分37 個(gè)，以O(shè)B≥30%和DL≥0.18 兩個(gè)參數(shù)為限定條件進(jìn)一步篩選后，最終得到桑白皮的潛在活性成分31 個(gè)，地骨皮潛在活性成分13 個(gè)，見(jiàn)表1。

表1 桑白皮-地骨皮的潛在活性成分Tab 1 Potential active components of Mori cortex - Lycii cortex

2.2 桑白皮-地骨皮成分抗炎的潛在作用靶點(diǎn)預(yù)測(cè)

在TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)中查找上述活性成分對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)蛋白，剔除重復(fù)和無(wú)效靶點(diǎn)后，得到桑白皮活性成分的作用靶點(diǎn)173 個(gè)，地骨皮活性成分的作用靶 點(diǎn)69 個(gè)。通 過(guò)PubMed、GeneCards 以 及Drug-Bank 數(shù)據(jù)庫(kù)，檢索兒童肺炎的作用靶點(diǎn)，最終得到兒童肺炎疾病的作用靶點(diǎn)3 271 個(gè)。利用在線韋恩圖繪制平臺(tái)進(jìn)行計(jì)算并繪制韋恩圖（圖1），獲得共同基因134 個(gè)，其中歸屬于桑白皮的有127 個(gè)，歸屬于地骨皮的有38 個(gè)，二藥與疾病共同靶點(diǎn)為31 個(gè)，分 別 為SLC6A3、ADRB2、NOS2、AR、CASP3、CASP8、FASLG、PPARG、EGFR、AKT1、VEGFA、CCND1、MMP9、IL6、SOD1、ERBB2、MYC、ICAM1、IL1B、CCL2、VCAM1、NOS3、IL2、SERPINE1、COL1A1、IL1A、MPO、CRP、CXCL10、CD40LG、MAPK8。上述提示桑白皮與地骨皮既有各自的關(guān)鍵作用靶點(diǎn)對(duì)肺炎發(fā)揮治療作用，二者又有共同的關(guān)鍵作用靶點(diǎn)以協(xié)同發(fā)揮抗肺炎作用。

圖1 兒童肺炎靶點(diǎn)基因與桑白皮-地骨皮靶點(diǎn)基因匹配的韋恩圖Fig 1 Venn diagram of target genes of pneumonia in children matched with target genes of Mori cortex - Lycii cortex

2.3 活性成分-關(guān)鍵靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

桑白皮與兒童肺炎作用靶點(diǎn)相關(guān)的活性成分有24 個(gè)，為sexangularetin、iristectorigenin（9CI）、moracin B、moracin C、moracin D、moracin F、glabrone、campest-5-en-3beta-ol、7-methoxy-5，4'-dihydroxyflavanonol、cyclomulberrochromene、dimethyl（methylenedi-4，1-phenylene）biscarbamate、moracin A、moracin O、mairin、mulberroside C_qt、sanggenone F、sanggenone H、sanggenone M、3，5，7-trihydroxy-2-（3-hydroxyphenyl）chromone、quercetin、beta-sitosterol、kaempferol、pelargonidin、sanguinarine；地骨皮與兒童肺炎作用靶點(diǎn)相關(guān)的活性成分有11個(gè)，為 hederagenin、beta-sitosterol、stigmasterol、CLR、OIN、linoleyl acetate、acacetin、scopolin、atropine、sugiol、aurantiamide acetate，兩者共同活性成分為beta-sitosterol。將活性成分、中藥與疾病共同的關(guān)鍵靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2 軟件進(jìn)行可視化的網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建（圖2）。網(wǎng)絡(luò)顯示，藥物活性成分連接值在前5 的 為quercetin、kaempferol、acacetin、beta-sitosterol、iristectorigenin（9CI）、glabrone（并列第五）；關(guān)鍵靶點(diǎn)基因連接值在前5 的為PTGS2、HSP90AA 1、PTGS1、AR、PRSS1。上述成分和靶點(diǎn)是桑白皮-地骨皮治療兒童肺炎的重要活性成分和重要靶點(diǎn)基因，在桑白皮-地骨皮藥對(duì)治療兒童肺炎中具有重要意義。

圖2 中藥活性成分-疾病關(guān)鍵作用靶點(diǎn)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)Fig 2 Regulatory network of key targets of interaction between active ingredients of TCM and diseases

2.4 共有蛋白的PPI 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將交叉的31 個(gè)靶基因上傳至STRING 平臺(tái)，根據(jù)高級(jí)篩選條件“high confidence（0.7）”進(jìn)行PPI 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建，即最低要求交互分?jǐn)?shù)為0.7，得到蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)圖（圖3）。該網(wǎng)絡(luò)圖中共有31 個(gè)節(jié)點(diǎn)，171 條邊，主要涉及到白細(xì)胞介素6（IL-6）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A（VEGFA）、蛋白激酶（AKT1）、絲裂原活化蛋白激酶8（MAPK8）、基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）、白 細(xì) 胞 介 素1B（IL-1B）、趨 化 因 子2（CCL2）等。

圖3 桑白皮-地骨皮治療兒童肺炎相關(guān)基因的蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)Fig 3 Protein interaction network of treatment of pneumonia in children with Mori cortex - Lycii cortex

2.5 網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治?/h3>

為了進(jìn)一步探究桑白皮-地骨皮藥對(duì)治療兒童肺炎的藥理機(jī)制，將共有的靶基因輸入Cytoscape 3.7.2 軟件的BisoGenet 插件中進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)分析，然后打開(kāi)CytoNCA 插件，初步獲得一個(gè)有3 035 個(gè)節(jié)點(diǎn)、70 307 條邊的PPI 網(wǎng)絡(luò)，以Degree 值＞61 進(jìn)行2次篩選，獲得一個(gè)有704 個(gè)節(jié)點(diǎn)、28 530 條邊的PPI網(wǎng)絡(luò)，再以Betweenness 值＞800 進(jìn)行3 次篩選，獲得 一 個(gè) 有121 個(gè) 節(jié) 點(diǎn)、2 582 條 邊 的PPI 網(wǎng) 絡(luò)，具 體篩選過(guò)程見(jiàn)圖4。

圖4 PPI 網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治鯢ig 4 Analysis of PPI network topology

2.6 GO 功能分析與KEGG 通路富集分析結(jié)果

在GO 功能分析結(jié)果中在P＜0.001 基礎(chǔ)上選取BP、MF、CC 富集基因數(shù)目位居前10 的生物學(xué)過(guò)程，顯示桑白皮-地骨皮藥對(duì)治療兒童肺炎主要涉及對(duì)細(xì)菌來(lái)源分子的反應(yīng)、調(diào)控細(xì)胞凋亡、T 細(xì)胞活化等生物過(guò)程；細(xì)胞因子受體結(jié)合、受體配體活性、蛋白磷酸酶結(jié)合等分子功能；膜筏、細(xì)胞外基質(zhì)、囊泡腔等細(xì)胞組分，詳見(jiàn)表2。同樣，KEGG 分析共得到121 條信號(hào)通路，根據(jù)P值大小和富集基因數(shù)目篩選出前20 條信號(hào)通路，主要涉及到腫瘤壞死因子信號(hào)通路、磷脂酰肌醇3-激酶/絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶信號(hào)通路、甲型流感、絲裂原活化蛋白激酶信號(hào)通路、IL-17 信號(hào)通路和低氧誘導(dǎo)因子-1 信號(hào)通路等，將上述信號(hào)通路利用R 語(yǔ)言軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)可視化處理得到氣泡圖（圖5），其中氣泡的顏色代表富集顯著性，顏色越紅，富集程度越高；氣泡大小代表該通路富集的基因數(shù)量，氣泡越大，富集基因越多。

表2 桑白皮-地骨皮調(diào)控兒童肺炎的核心網(wǎng)絡(luò)GO 功能分析Tab 2 GO function analysis of core network for treatment of pneumonia in children with Mori cortex - Lycii cortex

圖5 KEGG 信號(hào)通路可視化結(jié)果Fig 5 Visualization of KEGG signal pathway

2.7 潛在作用靶點(diǎn)-關(guān)鍵通路網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建結(jié)果

將關(guān)鍵信號(hào)通路與桑白皮-地骨皮藥對(duì)的潛在作用靶點(diǎn)進(jìn)行一一映射，構(gòu)建潛在作用靶點(diǎn)與關(guān)鍵通路關(guān)系網(wǎng)絡(luò)，具體見(jiàn)圖6。其中，信號(hào)通路以菱形節(jié)點(diǎn)示之，潛在作用靶點(diǎn)以矩形節(jié)點(diǎn)示之。由網(wǎng)絡(luò)圖可知，桑白皮-地骨皮藥對(duì)治療兒童肺炎涉及的關(guān)鍵 作 用 靶 點(diǎn) 主 要 包 括AKT1、IL-6、CASP3、MAPK8、IL-1B 等24 個(gè)；上述靶標(biāo)主要涉及TNF、PI3K/AKT、Inlfuenza A、MAPK 等信號(hào)通路。

圖6 潛在作用靶點(diǎn)-關(guān)鍵通路關(guān)系網(wǎng)絡(luò)Fig 6 Relation network between potential targets and key pathways

3 討論

藥對(duì)因具有增效減毒的作用，在中醫(yī)臨證過(guò)程中常將兩味相對(duì)固定的中藥共同搭配使用，臨床療效頗佳。中藥作用于疾病的機(jī)制尚并不完全明確，缺乏可以清晰闡釋中藥作用機(jī)制的科學(xué)依據(jù)。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的問(wèn)世為研究中藥作用于疾病的機(jī)制提供了一種新的方法和思路，它能夠從整體聯(lián)系到微觀，從多個(gè)層面系統(tǒng)地分析分子作用機(jī)制，這與中醫(yī)整體觀念和辨證論治思想相統(tǒng)一［13］。桑白皮-地骨皮藥對(duì)出自宋代《小兒藥證直訣》中的瀉白散，二藥配伍具有清瀉肺熱、止咳平喘的功效，在現(xiàn)代臨床中仍被廣泛應(yīng)用。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明桑白皮、地骨皮的抗炎作用顯著［6，7］，而炎癥反應(yīng)始終貫穿于兒童肺炎的整個(gè)病理過(guò)程，且具有熱、咳、痰、喘的臨床表現(xiàn)，這與桑白皮-地骨皮藥對(duì)的功效主治極為匹配，因此本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，從微觀角度探討桑白皮-地骨皮藥對(duì)作用于兒童肺炎的具體分子機(jī)制。

通過(guò)分析結(jié)果顯示，桑白皮-地骨皮藥對(duì)主要通過(guò)槲皮素、山奈酚、金合歡素、β-谷甾醇等活性成分對(duì)兒童肺炎進(jìn)行干預(yù)。有研究顯示，槲皮素可通過(guò)降低金黃色葡萄球菌小鼠血清IL-6、IL-1β 及TNFα 含量，下調(diào)小鼠肺組織NF-κB、IKK 及IκBα mRNA和蛋白的表達(dá)水平，從而抑制小鼠炎癥反應(yīng)［14］。山奈酚同樣具有較強(qiáng)的抗炎作用，主要與調(diào)節(jié)炎癥相關(guān)基因表達(dá)及促炎酶的活性，抑制黏附分子、轉(zhuǎn)錄因子以及基質(zhì)金屬蛋白酶等作用機(jī)制相關(guān)［15］。金合歡素不僅能減少細(xì)胞間黏附分子-1、IL-6 和IL-8等炎癥因子，還通過(guò)減輕氣道高反應(yīng)和嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)等機(jī)制發(fā)揮抗炎作用［16，17］。β-谷甾醇是植物甾醇的重要組成成分，通過(guò)降低炎癥細(xì)胞活力和吞噬能力，抑制TNF-α、NO 的生成從而減輕炎癥反應(yīng)癥狀［18］。

蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)結(jié)果顯示，桑白皮-地骨皮藥對(duì)的有效成分可能是通過(guò)IL-6、VEGFA、AKT1、MAPK8、MMP9、IL-1B、CCL2 等關(guān)鍵靶點(diǎn)發(fā)揮作用。在肺炎感染中，IL-6 作為一種非特異性炎癥細(xì)胞因子，能夠誘導(dǎo)T 細(xì)胞分化，促進(jìn)炎性細(xì)胞因子釋放，參與肺部炎癥病理過(guò)程［19］。MMP9 是細(xì)胞外基質(zhì)降解的一種蛋白酶，它能夠通過(guò)金屬鈣或鋅離子等介導(dǎo)從而對(duì)呼吸系統(tǒng)的細(xì)胞外基質(zhì)及基底膜造成損傷和降解，使正常的呼吸系統(tǒng)結(jié)構(gòu)被破壞，進(jìn)而參與氣道炎癥反應(yīng)［20］。除此之外，蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治鲲@示，該調(diào)控過(guò)程還與ICAM1、CASP3、EGFR、AR、CRP 等相關(guān)，充分驗(yàn)證了桑白皮-地骨皮藥對(duì)治療兒童肺炎是多分子、多靶點(diǎn)的作用機(jī)制。

KEGG 結(jié)果顯示，桑白皮-地骨皮藥對(duì)可能通過(guò)作用于腫瘤壞死因子信號(hào)通路、磷脂酰肌醇3-激酶/絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶信號(hào)通路、甲型流感、絲裂原活化蛋白激酶信號(hào)通路、IL-17 信號(hào)通路和低氧誘導(dǎo)因子-1 信號(hào)通路等通路發(fā)揮治療作用。有研究表明，PI3K-Akt 信號(hào)通路通過(guò)調(diào)節(jié)樹(shù)突狀細(xì)胞及巨噬細(xì)胞表達(dá)在促炎和抗炎因子方面發(fā)揮著重要作用［21］，也有實(shí)驗(yàn)研究表明，桑白皮總黃酮和總多糖成分可能通過(guò)調(diào)控RSV 肺炎小鼠PI3K/Akt 信號(hào)通路及調(diào)節(jié)血清IFN-γ、IL-4 表達(dá)等機(jī)制發(fā)揮減輕炎癥反應(yīng)、防治肺炎的作用［22］。MAPK 信號(hào)通路主要參與調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化和凋亡。程健等［23］發(fā)現(xiàn)桑白皮的活性成分槲皮素可通過(guò)抑制MAPK 通路標(biāo)志蛋白p38、p44/p42、SAPK/JNK 的表達(dá)，進(jìn)而降低炎性因子的釋放，最終減輕炎癥反應(yīng)程度，抗炎作用與MAPK 通路關(guān)系密切。亦有研究表明，MAPK 和PI3K 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路均參與調(diào)節(jié)炎癥介質(zhì)的表達(dá)［24］，山奈酚能夠有效抑制由LPS 誘導(dǎo)的人單核細(xì)胞THP-1 的MAPK 信號(hào)通路的表達(dá)，可降低巨噬細(xì)胞衍生趨化因子、IP-10 和IL-8 等炎癥因子產(chǎn)生，從而有效阻止炎癥的發(fā)生［25］。

綜上所述，本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對(duì)桑白皮-地骨皮藥對(duì)作用于兒童肺炎的活性成分、作用靶點(diǎn)及信號(hào)通路進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)桑白皮-地骨皮藥對(duì)中的槲皮素、山奈酚、β-谷甾醇和金合歡素等成分很可能通過(guò)AKT1、IL-6、MAPK8 和MMP9 等靶點(diǎn)作用于TNF、PI3K/AKT、MAPK 信號(hào)通路等多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路從而發(fā)揮抗炎作用。因此，桑白皮-地骨皮藥對(duì)是通過(guò)多成分、多靶點(diǎn)、多途徑來(lái)治療兒童肺炎。本研究可為進(jìn)一步探討其作用機(jī)制提供參考，但本研究?jī)H是在分子機(jī)制層面進(jìn)行的預(yù)測(cè)探討，其具體的作用機(jī)制仍需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)予以驗(yàn)證。

作者貢獻(xiàn)度說(shuō)明：

研究設(shè)計(jì)、數(shù)據(jù)分析、成文由第一作者完成；文獻(xiàn)檢索、圖片處理由第二作者完成；研究指導(dǎo)、修改校正由第三、第四作者完成；文字翻譯由第五作者完成；通訊作者負(fù)責(zé)文章終稿審校。