王蘊穎， 楊 英， 趙 靜， 何亞絨， 張 平， 陳宥藝， 劉 瑩， 張怡冰

1.西安市第四醫(yī)院 生殖醫(yī)學(xué)中心，陜西 西安 714000；2.空軍軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院 婦產(chǎn)科生殖中心,陜西 西安 710032；3.西安交通大學(xué)附屬第一醫(yī)院 生殖醫(yī)學(xué)中心，陜西 西安 710061；4.北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院 衛(wèi)勤部，遼寧 沈陽 110016

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)是連續(xù)出現(xiàn)3次或者3次以上自然性流產(chǎn)[1]。抗心磷脂抗體(anticardiolinpin antibody，ACA)是一種自身免疫性抗體，與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)病存在密切關(guān)系[2-3]。人類白細(xì)胞抗原-G(human leukocyte antigen-G，HLA-G)是一種組織相容性復(fù)合體，可參與到調(diào)控移植排斥反應(yīng)以及逃避免疫應(yīng)答中，在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)中具有重要意義[4]。可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體-1(soluble vascular endothelial growth factor receptor-1，sFlt-1)是一種由胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞分泌的因子，具有促進(jìn)血管生成的效果，但目前在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)中運用仍較少[5]。本研究旨在探討HLA-G、sFlt-1、ACA與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)臨床特征的相關(guān)性。現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取西安市第四醫(yī)院自2017年1月至2020年1月收治的78例復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者為B組。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《中華婦產(chǎn)科學(xué)》[6]中復(fù)發(fā)性流產(chǎn)診斷標(biāo)準(zhǔn)；伴侶雙方染色體正常；年齡>18歲；神經(jīng)意志正常，可配合治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并嚴(yán)重肝腎功能異常；合并遺傳性易栓癥；存在解剖學(xué)畸形因素、宮內(nèi)感染因素；資料不完整。另選取同期于我院體檢的78例健康人群為A組。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2 研究方法 抽取兩組空腹靜脈血2.5 ml，高速離心分層，分離血清。HLA-G選取美國TSZ Biosciences公司的HLA-G檢測試劑盒，采用雙抗原夾心法進(jìn)行檢測。sFlt-1選取江萊生物技術(shù)有限公司的sFlt-1檢測試劑盒進(jìn)行檢測。ACA采用固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗進(jìn)行檢測，根據(jù)待測樣品數(shù)量加入標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需要的板條數(shù)。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加1次，每孔加入底物A、B各50 μl，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10 min，避免光照，取出酶標(biāo)板，迅速加入50 μl終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果，在450 nm波長處測定各孔的光密度(optical density，OD)值。

1.3 觀察指標(biāo) 記錄并比較兩組血清HLA-G、sFlt-1、ACA水平與臨床病理特征。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清HLA-G、sFlt-1與ACA水平比較 B組血清HLA-G、sFlt-1與ACA水平均顯著高于A組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組血清HLA-G、sFlt-1與ACA水平比較

2.2 兩組臨床病理特征比較 A組合并生殖系統(tǒng)感染的比例高于B組，獲得性子宮異常的比例低于B組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組臨床病理特征比較/例(百分率/%)

2.3 血清HLA-G、sFlt-1和ACA水平與患者臨床病理特征相關(guān)性分析 血清HLA-G、sFlt-1、ACA水平均與患者獲得性子宮異常存在明顯正相關(guān)性(r= 0.395、0.488、0.368，P<0.05)。血清HLA-G、sFlt-1、ACA水平均與患者合并生殖系統(tǒng)疾病存在明顯正相關(guān)性(r=0.405、0.373、0.354，P<0.05)。

2.4 血清HLA-G、sFlt-1、ACA對于復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的預(yù)測價值分析 血清HLA-G、sFlt-1、ACA對于復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的靈敏度與特異度均較高。見表3。血清HLA-G、sFlt-1、ACA預(yù)測復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的ROC曲線見圖1。

表3 血清HLA-G、sFlt-1、ACA對于復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的預(yù)測價值分析

圖1 血清HLA-G、sFlt-1、ACA預(yù)測復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的ROC曲線

3 討論

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)為臨床上較常見的妊娠性合并癥之一，在我國的發(fā)病率高達(dá)3%[7-8]。復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)病機制較為復(fù)雜，主要可能與免疫因素有關(guān)，而免疫因素主要包含自身免疫因素以及同種免疫因素[9-10]。有研究發(fā)現(xiàn)，自身免疫異常與流產(chǎn)緊密相連，這可能因為患者機體存在一些危險因子，使機體的免疫功能異常[11-12]。HLA-G為人類白細(xì)胞抗原-G亞型，最開始在做器官移植的患者中檢測到，與患者免疫耐受以及腫瘤的逃逸有關(guān)[13]。HLA-G能夠激活絨毛著床以及血管的生長，在母體妊娠早期具有一定表達(dá)，能夠穩(wěn)定母胎免疫耐受。HLA-G有嚴(yán)格的組織特異性，在母胎界面絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞、女性生殖道以及卵泡液中均有一定的表達(dá)，為參與到胚胎著床的免疫耐受原因之一[14]。sFlt-1是一種內(nèi)源性可溶因子，血管內(nèi)皮生長因子具有較強的親和力，與其結(jié)合后，能夠抑制血管內(nèi)皮生長因子的含量，而血管內(nèi)皮生長因子是胎兒生長過程中重要的因子，其水平的缺失會引起流產(chǎn)[15-16]。

本研究結(jié)果表示，B組血清HLA-G、sFlt-1與ACA水平均顯著高于A組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。過高的HLA-G水平會抑制T細(xì)胞以及NK細(xì)胞，對胎兒免受母體免疫系統(tǒng)起到過度作用；異常的血管內(nèi)皮生長因子會對胚胎血管生成造成嚴(yán)重影響，并引發(fā)流產(chǎn)。本研究結(jié)果顯示，A組合并生殖系統(tǒng)感染的比例高于B組，獲得性子宮異常的比例低于B組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。這表明，女性在懷孕以前需要排查生殖道和內(nèi)分泌系統(tǒng)的異常，盡量降低風(fēng)險。有研究發(fā)現(xiàn)，絨毛外滋養(yǎng)層HLA-G表達(dá)異?；蛘咴谂cHLA-C發(fā)生接觸時出現(xiàn)分泌因子障礙，會導(dǎo)致滋養(yǎng)層受到免疫攻擊進(jìn)而引發(fā)流產(chǎn)。本研究表示，血清HLA-G對于患者發(fā)生復(fù)發(fā)性流產(chǎn)特異性和靈敏度均較高。這可能因為HLA-G水平下降會引起NK細(xì)胞與T淋巴細(xì)胞的結(jié)合，會引發(fā)抑制性信號轉(zhuǎn)入障礙，進(jìn)而使出現(xiàn)母體發(fā)起免疫攻擊，引發(fā)流產(chǎn)。本研究結(jié)果顯示，血清sFlt-1對于患者發(fā)生復(fù)發(fā)性流產(chǎn)特異性與靈敏度均較高。ACA作為一種自身免疫性抗體作用在滋養(yǎng)層表面的磷脂依賴抗原，對于其粘附和融合造成一定影響，使合體滋養(yǎng)層細(xì)胞的生成受到抑制，會引起子宮對于胚胎的接納性下降，同時ACA作用在胎盤血管內(nèi)皮細(xì)胞膜的磷脂上，會造成胎盤血栓生成，同時收縮血管，引發(fā)胎兒缺氧死亡。

綜上所述，HLA-G、sFlt-1、ACA均與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)緊密相關(guān)，且與患者發(fā)生生殖系統(tǒng)感染以及獲得性子宮異常具有相關(guān)性，對于患者發(fā)生復(fù)發(fā)性流產(chǎn)具有較高的預(yù)測價值。