王周祥 胡曼麗 陳 蕓，2 丁 一 趙德明 賀爭鳴 張 鑫 萬 娟

(1.贛南創(chuàng)新與轉(zhuǎn)化醫(yī)學研究院 心腦血管疾病防治教育部重點實驗室 贛南醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院 贛南醫(yī)學院，贛州 341000) (2.中國農(nóng)業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所，上海 200241)(3.華中農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，武漢 430070) (4.中國農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，北京 100193)(5.中國食品藥品檢定研究院，北京 100050)

在人類醫(yī)學和動物醫(yī)學研究中，貓是具有重大研究價值的實驗動物，尤其在神經(jīng)學、生理學、藥理學等領(lǐng)域具有突出優(yōu)勢[1]。因此，隨著生物醫(yī)藥和動物科學的發(fā)展，實驗貓的需求日益增加。從19世紀末開始貓便被用于醫(yī)學實驗研究，但是直至目前貓作為實驗動物的規(guī)范化程度仍然較低，遠不能滿足科學研究的需求。此外，由于貓作為伴侶動物的社會標簽日益凸顯，用缺乏實驗動物標準的貓來開展動物實驗也存在著巨大的輿論壓力[2]。因此，推進貓的實驗動物標準化工作迫在眉睫[3]。本次研究作者重點聚焦于探究健康貓的生理生化指標范圍，并分析不同性別、不同年齡階段貓生理生化指標的差異性，推進貓的生理學指標范圍的建立，對于推進貓作為實驗動物的規(guī)范化具有重大意義。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1實驗動物：以武漢市招募家貓作為研究對象，篩選出75只(38只雄性，37只雌性)健康(狀態(tài)良好且無報告疾病史)的貓作為研究目標。本研究經(jīng)過贛南醫(yī)學院生物醫(yī)學研究倫理委員會審批通過，倫理審批號：2021329。

1.1.2試劑與儀器：一次性采血針、2 mL注射器、EDTA-K2抗凝管(均成都瑞琦醫(yī)療科技有限責任公司)、肝素鋰抗凝管(成都瑞琦醫(yī)療科技有限責任公司)、生化檢測試劑盒(上?？迫A生物工程股份有限公司)；Abaxis VetScan HM5五分類血細胞計數(shù)儀(Abaxis有限公司)、日立3110全自動生化分析儀[日立診斷產(chǎn)品(上海)有限公司]、Therom Micro 17高速離心機(Thermo Fisher Scientific有限公司)、Eppendorf移液器(Eppendorf有限公司)。

1.2 方法

1.2.1血液標本采集與處理：所有貓均在安靜環(huán)境中的正常機能狀態(tài)下經(jīng)右前肢頭靜脈采集全血1.5 mL，標本送往惠康動物檢測(武漢)有限公司醫(yī)學檢驗實驗室進行檢測，其中0.5 mL裝于EDTA-K2抗凝管，充分混勻后4 h內(nèi)用Abaxis VetScan HM5五分類血細胞計數(shù)儀進行血細胞計數(shù)檢測；另外1 mL全血裝于肝素鋰抗凝管中充分混勻后5 000 r/min離心10 min，取上清血漿，4 h內(nèi)用日立3110全自動生化分析儀進行生化的檢測，所有樣本流轉(zhuǎn)均在4 ℃環(huán)境下進行。

1.2.2生理生化指標檢測：血細胞計數(shù)指標包括白細胞數(shù)(WBC)、淋巴細胞數(shù)(LYM)、單核細胞數(shù)(MON)、中性粒細胞數(shù)(NEU)、嗜酸粒細胞數(shù)(EOS)、嗜堿粒細胞數(shù)(BAS)、淋巴細胞百分比、單核細胞百分比、中性粒細胞百分比、嗜酸粒細胞百分比、嗜堿粒細胞百分比、紅細胞數(shù)(RBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細胞比容(HCT)、平均紅細胞體積(MCV)、紅細胞平均血紅蛋白含量(MCH)、紅細胞平均血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細胞分布寬度標準差(RDWs)、紅細胞分布寬度變異系數(shù) (RDWc)、血小板計數(shù)(PLT)、血小板壓積(PCT)、平均血小板體積(MPV)、血小板分布寬度標準差(PDWs)、血小板分布寬度變異系數(shù)(PDWc)。血清生化指標包括丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、白球比(A/G)、肌酐(CREA)、尿素氮(UREA)、膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、隨機血糖(GLU)、胰淀粉酶(AMY)、磷(PHOS)、鈣離子(Ca2+)、鉀離子(K+)、鈉離子(Na+)、氯離子(CL-)。

1.3 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1 貓生理生化指標數(shù)值范圍分析

本次研究共檢測了75只貓血細胞計數(shù)的24項指標，血生化的20項指標，根據(jù)統(tǒng)計學分析，以95%置信區(qū)間為界定，計算出貓的血細胞計數(shù)范圍和血生化指標范圍，血細胞計數(shù)指標數(shù)值見表1，血生化指標數(shù)值見表2。

表1 貓血細胞計數(shù)指標范圍Table 1 Range of indicators for completeblood count in cats

表2 貓血生化指標范圍Table 2 Range of indicators for biochemical in cats

2.2 不同性別貓生理生化指標數(shù)值對比分析

本次研究的75只貓中38只為雄性、37只為雌性，對比不同性別貓的血細胞計數(shù)和生化指標的差異性。本次研究結(jié)果表明，雄性貓和雌性貓的血細胞計數(shù)指標P值均>0.05，均無統(tǒng)計學差異；雄性貓和雌性貓的血生化指標中天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶指標P<0.05，有統(tǒng)計學差異，其他指標均無統(tǒng)計學差異。不同性別血細胞計數(shù)指標對比見表3，血生化指標對比見表4。

表3 不同性別貓的血細胞計數(shù)指標對比分析Table 3 Comparative analysis of complete bloodcount in cats of different

2.3 不同年齡階段貓生理生化指標數(shù)值對比分析

將納入本次研究的75只貓按照年齡分為3組(≤1歲29只；1～5歲31只；≥5歲14只；其中一只年齡信息不詳未納入統(tǒng)計)，對比不同年齡階段貓的生理生化指標的差異性。本次研究結(jié)果表明，年齡因素對于貓的部分血細胞計數(shù)指標和血生化指標具有一定的影響：白細胞數(shù)、單核細胞數(shù)、中性粒細胞數(shù)等指標明顯高于成年貓(>1歲)(P<0.05)，紅細胞比容、紅細胞平均血紅蛋白濃度、紅細胞分部寬度標準差、血紅蛋白等指標幼年貓低于成年貓(P<0.01、P≤0.01、P<0.01、P<0.05)。其他血細胞計數(shù)指標未見統(tǒng)計學差異(表5)。

表4 不同性別貓的血生化指標對比分析Table 4 Comparative analysis of in cats of different genders

表5 不同年齡階段貓的血細胞計數(shù)指標對比分析Table 5 Comparative analysis of complete blood count in cats of different age group

不同年齡階段貓的血生化指標對比分析中，幼年貓的堿性磷酸酶、磷、鈣離子明顯高于成年貓(P<0.001，P<0.05)，并且隨著年齡的增加而呈下降的趨勢；幼年貓肌酐、膽固醇、隨機血糖、球蛋白等指標明顯低于成年貓(P<0.001，P<0.05)，且隨著年齡的增長呈上升趨勢。其他血生化指標對比無統(tǒng)計學差異(表6)。

表6 不同年齡階段貓的血生化指標對比分析Table 6 Comparative analysis of biochemical in cats of different age group

3 討論

3.1 貓生理生化指標數(shù)值范圍分析

血液細胞計數(shù)指標和血生化指標是反映動物機體新陳代謝和生理機能狀態(tài)最為重要的檢測指標，生理生化指標的范圍界定直接決定了人們對動物健康標準和遺傳穩(wěn)定的判斷，同時也對臨床動物疾病診療和動物科學研究提供重要的判斷依據(jù)[4]，因此，建立貓的生理生化指標范圍具有重大的科研價值和臨床意義[5]。本次研究以75只貓作為研究對象，對其血細胞計數(shù)指標和血生化指標進行全面檢測，以95%的置信區(qū)間作為界定，初步得出貓的血細胞計數(shù)指標和血生化指標的范圍，給后續(xù)開展貓相關(guān)的科學研究工作提供依據(jù)。

3.2 不同性別貓生理生化指標數(shù)值對比分析

性別因素是動物科學研究不可忽略的因素之一，探究性別因素對于生理生化指標是否產(chǎn)生影響具有重要意義。通過對20只不同性別的四川白兔的研究中發(fā)現(xiàn)雌雄間多數(shù)生理生化值基本一致,不受性別因素的影響[6]。有研究[7]通過對6只英國短毛貓的研究提示在血細胞計數(shù)方面，5月齡雄性英國短毛貓的白細胞計數(shù)和淋巴細胞計數(shù)均高于同齡雌貓(P<0.05，P<0.01)，而雌性膽固醇低于雄貓(P<0.05)，但其研究樣本量偏低，難以真實反應(yīng)臨床普遍情況。本次研究筆者對比分析了38只雄性貓與37只雌性貓的血細胞計數(shù)指標和血生化指標，通過研究可以發(fā)現(xiàn)天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶在雌貓和雄貓之間具有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，在此之前有研究者對不同性別的SD大鼠的生理生化指標進行對比研究同樣發(fā)現(xiàn)了性別因素對于天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶指標的影響[8]，而在家貓中尚無相關(guān)報道，本次研究首次發(fā)現(xiàn)性別因素對于家貓?zhí)扉T冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶指標的差異性影響，后續(xù)將進一步擴大樣本基數(shù)，深入探究其原因。除天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶外，其他所檢測的血細胞計數(shù)指標和血生化指標性別對比的P值均大于0.05，無統(tǒng)計學差異。綜合以上結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，除天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶指標需要注意性別因素之外，性別因素對于貓的生理生化指標的影響作用較小。

3.3 不同年齡階段貓生理生化指標數(shù)值對比分析

年齡因素同樣是動物科學研究中必須要考慮的因素之一。本次研究將研究目標分成3個年齡階段展開，結(jié)果發(fā)現(xiàn)年齡因素對于部分生理生化指標具有較大的影響。通過本次研究發(fā)現(xiàn)幼年貓(≤1歲)血細胞計數(shù)指標中的白細胞計數(shù)、單核細胞計數(shù)、中性粒細胞計數(shù)等指標明顯高于成年貓(>1歲)(P<0.05)，所以推測這一現(xiàn)象與幼貓的胸腺等免疫器官尚未退化完全有關(guān)。幼年貓紅細胞比容、紅細胞平均血紅蛋白濃度、紅細胞分部寬度標準差、血紅蛋白等指標低于成年貓(P<0.01，P<0.05)。由于紅細胞相關(guān)指標與機體的營養(yǎng)狀態(tài)密切相關(guān)[9]，因此這一現(xiàn)象可能是因為成年貓相較于幼年貓有著更好的營養(yǎng)物質(zhì)吸收和轉(zhuǎn)化效率，這一推測結(jié)論也與參考文獻[7]提出的紅細胞增齡性升高吻合。

在血生化方面，本次研究發(fā)現(xiàn)幼年貓的堿性磷酸酶、磷、鈣離子明顯高于成年貓(P<0.001，P<0.05)，并且隨著年齡的增加而呈下降的趨勢，這一現(xiàn)象提示了貓幼年期，血液中與成骨過程相關(guān)的離子含量顯著高于成年貓，在幼年期的貓飼喂上需要注意這部分營養(yǎng)的補充，同時也應(yīng)注意鈣磷的比例[10]；此外，幼年貓肌酐、膽固醇、隨機血糖、球蛋白等指標明顯低于成年貓(P<0.001，P<0.05)，且隨著年齡的增長呈上升趨勢，因此適當補充多不飽和脂肪酸和優(yōu)質(zhì)動物蛋白有助于調(diào)控貓隨年齡增長的膽固醇和肌酐[11]。此外，貓肌酐、膽固醇、隨機血糖等指標與貓的肌肉量、體脂含量以及代謝速率相關(guān)，幼年貓相較于成年貓肌肉組織較少、體脂量較低、代謝速率更快[12]，因此在幼貓的飼養(yǎng)過程中應(yīng)當注意飼喂多不飽和脂肪酸、高優(yōu)質(zhì)蛋白、營養(yǎng)物質(zhì)豐富的易消化吸收的食物，同時在飼喂時間上也要注意少食多餐飼喂，縮短時間間隔，避免幼貓低血糖事故的發(fā)生。另外本研究還發(fā)現(xiàn)，幼年貓的球蛋白低于成年貓，這一現(xiàn)象提示了幼年貓的體內(nèi)抗體水平低于成年貓，因此在幼貓時期更加要注意飼養(yǎng)環(huán)境的清潔，及時接種疫苗，避免收到病原微生物的侵害。

3.4 本研究的意義和局限性分析

本次研究通過對貓的生理生化指標檢測初步探究出了貓的血細胞計數(shù)指標和血生化指標的正常范圍，并且通過對不同性別和不同年齡階段的貓進行橫向?qū)Ρ?，發(fā)現(xiàn)了性別因素和年齡因素對于貓正常生理機能指標的影響，為推進貓作為實驗動物的標準化工作打下良好的基礎(chǔ)。然而本次研究也存在著樣本基數(shù)較小，樣本來源單一等局限性，同時也未進一步對貓的品種、生長環(huán)境、飲食習慣等其他干擾因素進行分析，還需進一步從多個角度入手，增加樣本基數(shù)，從更多的方面來探究貓的生理機能狀態(tài)。