何永歡，朱歐奇，曹 濱，陶湘煒，張雨生，丁 勇，居小兵，劉 欣**

（1靖江市人民醫(yī)院泌尿外科，江蘇 214500；2江蘇省人民醫(yī)院泌尿外科）

腎上腺腫瘤是較常見的泌尿系統(tǒng)腫瘤，按有無內(nèi)分泌功能分為非功能性腫瘤和功能性腫瘤。尋找腎上腺腫瘤的生物學(xué)靶標(biāo)對早期診斷、早期治療有著重要意義。目前關(guān)于腎上腺腫瘤的發(fā)病機制尚未明確，雖然很多人具有相同的危險因素，但最終僅有少數(shù)人發(fā)生腎上腺腫瘤，提示個體易感性存在差異。已發(fā)現(xiàn)與腎上腺腫瘤發(fā)生相關(guān)的多種基因，如Plkl、VEGF[1-2]、VHL[3]、SHDH[4]和p53[5]等。近年來促紅細(xì)胞生成素（EPO）基因在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用受到廣泛研究[6-7]。最近報道位于EPO啟動子區(qū)的單核苷酸多態(tài)性rs1617640G＞T與肝癌發(fā)病的易感性相關(guān)[8]。本研究收集靖江市人民醫(yī)院及江蘇省人民醫(yī)院2015—2019年診治的腎上腺腫瘤患者144例，探究EPO rs1617640G＞T多態(tài)性與中國人群腎上腺腫瘤易感性的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 腎上腺腫瘤患者144例為觀察組，228例正常人為對照組，均為漢族。觀察組中男性71例，女性73例；年齡26～81歲，平均47.1±12.6歲，<48歲74例，≥48歲70例；有吸煙史38例，飲酒史112例。對照組中男性113例，女性115例；年齡28～79歲，平均48.3±9.9歲，<48歲110例，≥48歲118例；有吸煙史60例，飲酒史54例。兩組一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。本研究通過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批，獲得患者或其親屬參加本研究的知情同意。

1.2 基因型分析 抽取兩組研究對象5 mL外周靜脈血，使用蛋白酶K消化，苯酚-氯仿法提取基因組DNA貯存于-20℃冰箱備用。采用Taqman MGB探針檢測方法，分析EPO rs1617640各種基因型。相應(yīng)位點的TaqMan引物及探針由美國Applied Biosystems公司合成和校驗，DNA擴增使用384孔Applied Biosystems 7900HT快速實時PCR儀，SDS 2.3軟件用于樣本等位基因分型。為了保證基因分型的準(zhǔn)確性，每次檢測設(shè)置兩個空白對照及兩個重復(fù)樣本作為陽性對照，隨機抽取10%樣本進行盲法復(fù)測，檢測結(jié)果一致率為100%。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析處理。計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以頻數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗。采用Logistic回歸進行影響EPO rs1617640多態(tài)性與腎上腺腫瘤發(fā)病風(fēng)險關(guān)系的多因素分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組EPO rs1617640G＞T等位基因頻率及基因型分布 觀察組中EPO rs1617640位點等位基因GG、GT、TT頻率分別為65.97%、29.86%、4.17%，對照組中GG、GT、TT頻率分別為77.63%、20.17%、2.20%，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。以GG基因型為對照，顯示GT基因型腎上腺腫瘤的發(fā)病風(fēng)險明顯增加（OR=1.25，95%CI=1.13～2.24），而TT基因型發(fā)病風(fēng)險降低（OR=0.72，95%CI=0.68～4.02）。與GG基因型比較，GT+TT基因型腎上腺腫瘤的發(fā)病風(fēng)險明顯增加（OR=1.19,95%CI=1.13～2.21），差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1 兩組EPO rs1617640等位基因頻率及基因型分布 例（%）

2.2 影響EPO rs1617640多態(tài)性與腎上腺腫瘤發(fā)病風(fēng)險關(guān)系的多因素分析 對患者年齡、性別、吸煙史、飲酒史等因素對EPO rs1617640多態(tài)性與腎上腺腫瘤發(fā)病風(fēng)險關(guān)系的影響進行分析，發(fā)現(xiàn)在≥48歲（OR=3.36,95%CI=1.75～6.45，P=0.004）、女性（OR=3.98,95%CI=2.12～7.47，P<0.001）、無吸煙史（OR=2.46,95%CI=1.51～4.01，P=0.006）、無飲酒史（OR=2.36,95%CI=1.48～3.77，P=0.007）患者中，EPO rs1617640多態(tài)性與腎上腺腫瘤發(fā)病風(fēng)險具有明顯相關(guān)性，進一步表明GT、TT基因型增加了腎上腺腫瘤的發(fā)病風(fēng)險。見表2。

表2 EPO rs1617640基因型與腎上腺腫瘤發(fā)生風(fēng)險的多因素分析 例

3 討 論

人類促紅細(xì)胞生成素（EPO）基因位于7號染色體長臂，由4個內(nèi)含子和5個外顯子組成，全長3 000個堿基對。EPO與骨髓紅系祖細(xì)胞、幼紅細(xì)胞表面紅細(xì)胞生成素受體（EPOR）結(jié)合，通過JAK/STAT和Ras/MAPK等途徑調(diào)節(jié)紅系增生和分化，增加紅細(xì)胞數(shù)和血紅蛋白生成，穩(wěn)定紅細(xì)胞膜，提高抗氧化酶功能。研究表明，EPO和EPOR在神經(jīng)細(xì)胞、上皮細(xì)胞、心肌、平滑肌、腫瘤等細(xì)胞中也有表達(dá)[9]。腫瘤細(xì)胞可能存在自分泌或旁分泌生長激素刺激EPO/EPOR環(huán)路。EPO通過調(diào)節(jié)原癌基因和抑癌基因的表達(dá)而調(diào)控細(xì)胞代謝、分化、生長和凋亡等過程。ZHAO等[10]研究表明，在腦部腫瘤中EPO經(jīng)Akt路徑激活GATA-1活性及磷酸化。研究證實乳腺癌、腎癌、胃癌及中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤中EPO及其受體高表達(dá)[11-13]。惡性腫瘤組織生長代謝旺盛極易出現(xiàn)局部缺氧，EPO高表達(dá)可以改善腫瘤細(xì)胞在缺氧環(huán)境中的生存。ZHONG等[14]發(fā)現(xiàn)29%原發(fā)乳腺癌和69%乳腺癌轉(zhuǎn)移灶中低氧誘導(dǎo)因子-1（HIF-1）過表達(dá)，而良性腫瘤（乳腺纖維瘤和子宮肌瘤）表達(dá)陰性。

大量研究表明EPO基因啟動子區(qū)域的單核苷酸多態(tài)性可以改變EPO的表達(dá)和功能，進而影響個體對腫瘤的易感性[15]。位于EPO啟動子區(qū)的單核苷酸多態(tài)性rs1617640G＞T和肝癌發(fā)病的易感性相關(guān)，TONG等[16]研究發(fā)現(xiàn)EPOrs1617640G＞T多態(tài)性可以增加EPO表達(dá)，可能與腫瘤易感性及預(yù)后相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，觀察組EPO rs1617640位點等位基因GG、GT、TT頻率分別為65.97%、29.86%、4.17%，對照組中GG、GT、TT頻率分別為77.63%、20.17%、2.20%，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。以GG基因型為對照，顯示GT基因型腎上腺腫瘤的發(fā)病風(fēng)險明顯增加（OR=1.25，95%CI=1.13～2.24），而TT基因型發(fā)病風(fēng)險降低（OR=0.72，95%CI=0.68～4.02）。與GG基因型比較，GT+TT基因型腎上腺腫瘤的發(fā)病風(fēng)險明顯增加（OR=1.19,95%CI=1.13～2.21），差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。年齡≥48歲、女性、無吸煙史、無飲酒史者EPO rs1617640多態(tài)性與腎上腺腫瘤發(fā)病風(fēng)險具有明顯相關(guān)性，均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。說明EPOrs1617640多態(tài)性與國人腎上腺腫瘤易感性相關(guān)，相對于野生等位基因（GG），純合突變基因型及攜帶者（TT/GT）腎上腺腫瘤發(fā)病風(fēng)險明顯增高，腎上腺腫瘤發(fā)病風(fēng)險可能與年齡、性別、煙酒史有關(guān)。

本研究也有不足之處，如樣本量偏少，未檢測EPO表達(dá)水平，有待于今后進一步深入研究。