陳劍

研究發(fā)現(xiàn)[1]，宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展涉及到多基因的異常調(diào)控。微小RNA（miRNA）是一類能參與疾病調(diào)控的短鏈非編碼RNA，其可通過靶向識別mRNA的非翻譯區(qū)，調(diào)控轉(zhuǎn)錄后水平，進(jìn)而影響靶基因的表達(dá)[2]。miRNA參與多種復(fù)雜生物學(xué)過程，且不同腫瘤具有不同的miRNA的表達(dá)譜。miRNA-21是在膠質(zhì)瘤中發(fā)現(xiàn)的一種促癌基因，通過抑制細(xì)胞凋亡來促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展[3]。研究發(fā)現(xiàn)[4]，miRNA-218在乳腺癌、肝癌、胃癌及神經(jīng)膠質(zhì)瘤等多種惡性腫瘤中表達(dá)下調(diào)。本研究擬分析宮頸癌患者外周血清中miRNA-21及miRNA-218的表達(dá)水平及與預(yù)后的關(guān)系。報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2015年8月至2017年8月浙江省金華廣福醫(yī)院收治的宮頸癌患者140例（觀察組），納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）確診為原發(fā)性宮頸癌；（2）未經(jīng)歷過藥物、手術(shù)及放療等治療；（3）不合并其他腫瘤患者；（4）均行手術(shù)治療者。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）肝、腎及心等重要器官功能障礙者；（2）精神類疾病者；（3）不能配合術(shù)后隨訪者。其中年齡29～60歲，平均（45.1±14.1）歲；FIGO臨床分期為I型91例，II型28例，III型21例；病理類型為鱗癌65例，腺癌37例，鱗腺癌38例；分化程度為高分化24例，中分化85例，低分化31例；脈管浸潤程度為一半及以上浸潤75例，其余65例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移77例，無轉(zhuǎn)移63例。

另選同期本院行子宮全切手術(shù)治療的子宮肌瘤患者30例設(shè)為對照組，納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）術(shù)后宮頸篩查無癌變且無宮頸癌家族史患者；（2）無合并其他腫瘤或肝腎心等重要器官功能障礙者；（3）無精神類疾病者。其中年齡28～59歲，平均（44.3±13.8）歲。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批批準(zhǔn)，入組患者及其家屬均同意并在知情同意書上簽字。

1.2 方法 采集觀察組術(shù)前及手術(shù)1周后空腹靜脈血5 ml，對照組術(shù)前空腹靜脈血5 ml，室溫靜置1 h后以3 000 r/min離心10 min，分離血清并置于―70℃下保存，待測。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）法測量血清內(nèi)miRNA-21和miRNA-218的表達(dá)水平：將抽提的細(xì)胞總RNA經(jīng)嚴(yán)格遵守試劑盒操作，根據(jù)A260定量結(jié)果進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，并根據(jù)目標(biāo)基因mRNA序列引物設(shè)計(jì)原則，用軟件primer express3.0設(shè)計(jì)合并qPCR檢測引物及探針。miRNA-21和miRNA-218引物序列見表1，目標(biāo)基因探針和內(nèi)參基因探針均為5’端采用FAM報(bào)告熒光標(biāo)記，3’采用TAMRA淬滅熒光標(biāo)記。采用2-Ct法計(jì)算miRNA的相對表達(dá)量。本研究試劑盒均采購于美國Applied Biosystems公司。

表1 miR-21和miR-218的引物序列

1.3 隨訪 觀察組出院后采用電話及復(fù)查等多種形式隨訪36個(gè)月，3個(gè)月/次，隨訪期間記錄患者生存情況。以下情況之一視為隨訪終點(diǎn)：36個(gè)月內(nèi)患者死亡；36個(gè)月內(nèi)患者退出該項(xiàng)目；36個(gè)月隨訪結(jié)束。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0軟件分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用2檢驗(yàn)；生存分析采用Kaplan-Meier生存曲線；影響因素分析采用Logistic分析。P＜0.05為差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清miRNA-21和miRNA-218表達(dá)水平比較術(shù)前及術(shù)后，觀察組血清miRNA-21表達(dá)水平均高于對照組（均P＜0.05），miRNA-218表達(dá)水平均低于對照組（均P＜0.05）。兩組手術(shù)前后血清miRNA-21和miRNA-218表達(dá)水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t≥4.18，均P＜0.05）。見表2。

表2 兩組血清miRNA-21和miRNA-218表達(dá)水平

2.2 血清miRNA-21和miRNA-218與臨床特征的關(guān)系 觀察組miRNA-21表達(dá)水平中位數(shù)為4.56，miRNA-218表達(dá)中位數(shù)為3.34，以此為依據(jù)，將觀察組分為miRNA-21高表達(dá)組（miRNA-21表達(dá)≥4.56，n=85）和miRNA-21低表達(dá)組（miRNA-21表達(dá)＜4.56，n=55），miRNA-218高表達(dá)組（miRNA-218≥3.34，n=90）和miRNA-218低表達(dá)組（miRNA-218＜3.34，n=50）。

miRNA-21高、低表達(dá)組FIGO分期、脈管浸潤程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；miRNA-218高、低表達(dá)組FIGO分期、脈管浸潤程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表3。

表3 血清miRNA-21和miRNA-218表達(dá)與臨床特征的關(guān)系 例

2.3 血清miRNA-21和miRNA-218表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系 miRNA-21高表達(dá)組36個(gè)月總生存率顯著低于低表達(dá)組（52.9%vs 76.4%，2=11.55，P＜0.05）；miRNA-218低表達(dá)組36個(gè)月總生存率顯著低于高表達(dá)組（55.3%vs 72.7%，2=6.40，P＜0.05）。見封二彩圖3～4。

2.4 宮頸癌預(yù)后獨(dú)立危險(xiǎn)因素分析 Logistics回歸分析顯示，F(xiàn)IGO期、淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移、miRNA-21高表達(dá)及miRNA-218低表達(dá)均是影響宮頸癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（均P＜0.05）。見表4。

表4 宮頸癌預(yù)后獨(dú)立危險(xiǎn)因素Logistics回歸分析

3 討論

miRNA表達(dá)水平被認(rèn)為與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[5]，其通過調(diào)控RNA的轉(zhuǎn)錄水平、調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)編碼基因的表達(dá)，而使目的基因mRNA翻譯上調(diào)、下降或降解。研究顯示，在宮頸癌組織及正常宮頸組織中miRNA具有不同的表達(dá)特征。miRNA-21是發(fā)現(xiàn)最早，研究較多的一種小分子RNA，王紅等[6]通過總結(jié)近年來對miRNA-21的研究中發(fā)現(xiàn)，其在生長發(fā)育、癌癥發(fā)生、免疫反應(yīng)和骨分化等生物過程中均發(fā)揮重要作用。萬淑瓊等[7]在檢測宮頸癌變組織中miRNA含量時(shí)發(fā)現(xiàn)，宮頸癌組織中HPV陽性區(qū)域miRNA-21含量顯著高于HPV陰性區(qū)域，證實(shí)了miRNA-21在宮頸癌變組織中的作用。本研究結(jié)果顯示，術(shù)前及術(shù)后，觀察組血清miRNA-21表達(dá)水平均高于對照組（均P＜0.05）。

近年來，多項(xiàng)國外研究證實(shí)miRNA與惡性腫瘤的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤及預(yù)后等臨床特征密切相關(guān)。Karakatsanis等[8]研究指出，肝癌腫瘤分期和預(yù)后情況與miRNA-21高表達(dá)相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，miRNA-21高、低表達(dá)組FIGO分期、脈管浸潤程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

近年來miRNA-218在腫瘤組織中的異常表達(dá)引起研究者的廣泛關(guān)注。Liu等[9]研究顯示，miRNA-218在腫瘤的發(fā)生過程中起到了抑癌基因的作用。Gao等[10]認(rèn)為HPV高危型感染可以下調(diào)miRNA-218的表達(dá)水平，且其低表達(dá)水平可能與宮頸癌發(fā)病機(jī)制相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，本研究結(jié)果顯示，術(shù)前及術(shù)后，觀察組血清miRNA-218表達(dá)水平均低于對照組（均P＜0.05）。同時(shí)在研究miRNA-218與臨床癥狀關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)，miRNA-218表達(dá)的高低與宮頸癌FIGO分期、脈管浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有密切聯(lián)系。

研究顯示[11]，年齡、腫瘤大小、脈管浸潤程度、宮旁浸潤程度及FIGO分期等均為影響宮頸癌預(yù)后的相關(guān)因素。本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)IGO期、淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移、miRNA-21高表達(dá)及miRNA-218低表達(dá)均是影響宮頸癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（均P＜0.05）。其中miRNA-21高表達(dá)組36個(gè)月總生存率顯著低于低表達(dá)組（P＜0.05），miRNA-218低表達(dá)組36個(gè)月總生存率顯著低于高表達(dá)組（P＜0.05）。結(jié)果提示miRNA-21高表達(dá)與miRNA-218低表達(dá)與宮頸癌預(yù)后情況密切相關(guān)。

綜上所述，宮頸癌患者血清miRNA-21呈表達(dá)上調(diào)，血清miRNA-218表達(dá)下調(diào)，二者表達(dá)量與FIGO分期、淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移及宮頸癌患者術(shù)后36個(gè)月生存率密切相關(guān)。