田 玉 河南省葉縣人民醫(yī)院婦產(chǎn)科 467200

宮頸癌是女性發(fā)病率最高的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，近年來(lái)發(fā)病呈年輕化趨勢(shì)[1]。目前臨床對(duì)宮頸癌治療以手術(shù)聯(lián)合放化療為主，盡早發(fā)現(xiàn)并評(píng)估患者病情對(duì)選擇合理的治療方案，改善預(yù)后具有重要意義[2]。腫瘤的轉(zhuǎn)移過(guò)程包括腫瘤細(xì)胞增殖、對(duì)基膜的侵襲和破壞、血管新生、從原發(fā)部位脫離進(jìn)入外周循環(huán)、至轉(zhuǎn)移臟器著床，多種細(xì)胞因子參與其中[3]。研究者發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞分泌的白細(xì)胞介素-8(IL-8)能夠作用于免疫細(xì)胞，抑制宿主的局部免疫過(guò)程，通過(guò)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子介導(dǎo)的血管生成，為浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移創(chuàng)造有利條件[4]。基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)具有降解胞外基質(zhì)的活性，在腫瘤浸潤(rùn)過(guò)程中發(fā)揮重要作用[5]。Ezrin蛋白通過(guò)影響?zhàn)じ揭蜃踊钚?，參與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[6]。本文中檢測(cè)了IL-8、MMP-2、Ezrin蛋白在宮頸癌前病變與早期宮頸癌組織中的表達(dá)，探討其在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用，旨在為早期宮頸癌的診治及預(yù)后判斷提供參考。

1 對(duì)象與方法

1.1 觀察對(duì)象 收集2017年6月—2019年4月在本院婦產(chǎn)科行手術(shù)切除的宮頸組織石蠟標(biāo)本。其中正常宮頸組織30例、上皮內(nèi)瘤變56例，早期宮頸癌80例。依據(jù)FIGO標(biāo)準(zhǔn)對(duì)宮頸癌進(jìn)行臨床分期和組織學(xué)分級(jí)，其中Ⅰ期30例、Ⅱ期50例，高分化10例、中分化34例、低分化36例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移24例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移56例。納入本研究的患者術(shù)前均無(wú)放化療、免疫治療史，臨床資料完整。年齡31～68歲，平均年齡(46.20±9.75)歲。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，告知患者并簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法 宮頸組織標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，脫蠟至水，高溫、高壓修復(fù)抗原，滴加鼠抗人IL-8單克隆抗體(1∶500)、鼠抗人MMP-2單克隆抗體(1∶500)、鼠抗人MMP-2單克隆抗體(1∶200)，4℃過(guò)夜，滴加HRP標(biāo)記的山羊抗鼠IgG(1∶1 000)，室溫下孵育30min，DAB顯色、蘇木素復(fù)染、脫水、封片，檢測(cè)試劑購(gòu)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。光學(xué)顯微鏡下取5個(gè)高倍鏡視野判斷結(jié)果。每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)比例：<5%、5%～25%、26%～50%、>50%依次記0～3分。細(xì)胞染色強(qiáng)度：無(wú)色、黃色、棕黃色、黃褐色分別記0～3分。二者評(píng)分相乘，0分(-)、1～3分(+)、4～5分(++)、≥6分(+++)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS18.0軟件處理數(shù)據(jù)，以率表示計(jì)數(shù)資料，行χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組IL-8、MMP-2、Ezrin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較 早期宮頸癌組織中IL-8、MMP-2、Ezrin蛋白陽(yáng)性率明顯高于上皮內(nèi)瘤變組織和正常宮頸組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；上皮內(nèi)瘤變組織中IL-8、MMP-2、Ezrin蛋白陽(yáng)性率明顯高于正常宮頸組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組IL-8、MMP-2、Ezrin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較[n(%)]

2.2 IL-8、MMP-2、Ezrin蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)特點(diǎn) 宮頸癌組織中IL-8主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，在細(xì)胞膜存在少量表達(dá)，以彌漫性分布為主；在腫瘤周?chē)g質(zhì)中以成纖維肌細(xì)胞、炎性細(xì)胞為主，且染色較深。MMP-2陽(yáng)性表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，呈片狀彌散性分布，以中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)為主，在腫瘤周?chē)g質(zhì)中呈弱陽(yáng)性或中陽(yáng)性表達(dá)，巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞中也存在表達(dá)。Ezrin蛋白陽(yáng)性表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，以彌漫性分布為主；在腫瘤周?chē)g質(zhì)可見(jiàn)成纖維細(xì)胞、炎性細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞。見(jiàn)圖1。

圖1 宮頸癌組織中IL-8、MMP-2、Ezrin蛋白表達(dá)的免疫組化檢測(cè)(SP法，×200)

2.3 不同臨床病理指標(biāo)的宮頸癌患者IL-8、MMP-2、Ezrin蛋白表達(dá)水平比較 IL-8、MMP-2、Ezrin蛋白表達(dá)在不同臨床分期、組織學(xué)分級(jí)的宮頸癌患者中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者病灶組織中IL-8、MMP-2、Ezrin蛋白陽(yáng)性表達(dá)明顯強(qiáng)于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表2。

表2 不同臨床病理指標(biāo)的宮頸癌患者IL-8、MMP-2、Ezrin蛋白表達(dá)水平比較[n(%)]

3 討論

IL-8是具有廣泛生物學(xué)活性的細(xì)胞因子，可表達(dá)于多種腫瘤組織和細(xì)胞中，影響腫瘤細(xì)胞的增殖、分化[7]。但在不同類(lèi)型的腫瘤組織和細(xì)胞中IL-8發(fā)揮的生物學(xué)作用不盡相同，如在乳腺癌、肺癌細(xì)胞中IL-8具有抑癌活性，而在前列腺癌、多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中IL-8具有增強(qiáng)活性的作用[8]。本文結(jié)果顯示，宮頸癌組織中IL-8陽(yáng)性率明顯高于上皮內(nèi)瘤變組織和正常宮頸組織，上皮內(nèi)瘤變組織明顯高于正常宮頸組織，提示IL-8高表達(dá)可能促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展。合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者中IL-8陽(yáng)性表達(dá)明顯增強(qiáng)，結(jié)合宮頸癌組織中IL-8表達(dá)特點(diǎn)可推測(cè)腫瘤細(xì)胞分泌的IL-8可能通過(guò)作用于成纖維肌細(xì)胞、炎性細(xì)胞來(lái)調(diào)節(jié)局部免疫反應(yīng)，促進(jìn)新生血管生成，為癌細(xì)胞的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移提供有利條件。

腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲能力與其分泌的蛋白酶降解細(xì)胞外基質(zhì)的能力有關(guān)，MMPs是其中一組重要的蛋白水解酶，MMP-2是MMPs家族的主要成員之一，能夠降解Ⅳ型膠原，破壞腫瘤細(xì)胞基膜完整性，促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移[9]。Ezrin蛋白表達(dá)水平與腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移、吞噬能力密切相關(guān)[10]。研究者發(fā)現(xiàn)，具有強(qiáng)轉(zhuǎn)移和吞噬能力的黑色素瘤組織中Ezrin蛋白高表達(dá)，下調(diào)Ezrin蛋白表達(dá)后腫瘤細(xì)胞吞噬能力消失[11]。本文結(jié)果顯示，早期宮頸癌組織中MMP-2、Ezrin蛋白陽(yáng)性率明顯高于上皮內(nèi)瘤變組織和正常宮頸組織，上皮內(nèi)瘤變組織明顯高于正常宮頸組織，提示MMP-2、Ezrin蛋白高表達(dá)可能促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展。合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者中MMP-2、Ezrin蛋白陽(yáng)性表達(dá)明顯增強(qiáng)，可能與MMP-2作用于巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞，Ezrin蛋白作用于成纖維細(xì)胞、炎性細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞，影響宿主的免疫功能，促進(jìn)腫瘤組織新生血管形成，促進(jìn)癌細(xì)胞的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移。