戴建清

（福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所/特色食用菌繁育與栽培國(guó)家地方聯(lián)合工程研究中心，福建 福州 350014）

0 引言

【研究意義】雙孢蘑菇（Agaricus bisporus）是世界上目前栽培地域最廣、生產(chǎn)規(guī)模最大、產(chǎn)量最多的一種著名食用菌，有“世界菇”之稱(chēng)[1]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2018年我國(guó)的雙孢蘑菇年產(chǎn)量達(dá)300多萬(wàn)t，所需栽培種用量近7.2萬(wàn)t。雙孢蘑菇W192是采用同核不育株間雜交技術(shù)選育而成，高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)形狀表現(xiàn)穩(wěn)定，適合工廠化栽培，于2012年獲得福建省新品種認(rèn)定（閩認(rèn)菌2012007）[2]。目前，雙孢蘑菇菌種主要通過(guò)母種、原種、栽培種三級(jí)固體菌種進(jìn)行逐級(jí)擴(kuò)繁。相對(duì)固體菌種，液體菌種具有培養(yǎng)時(shí)間短、發(fā)菌快、菌齡整齊一致、接種方便等優(yōu)點(diǎn)，利于食用菌自動(dòng)化、工廠化、規(guī)模化生產(chǎn)。近年來(lái)，液體菌種被廣泛地應(yīng)用在工廠化食用菌生產(chǎn)如金針菇、杏鮑菇、海鮮菇等[3?5]，與自動(dòng)化接種設(shè)備相結(jié)合，推動(dòng)了食用菌產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展。國(guó)內(nèi)外食用菌研發(fā)機(jī)構(gòu)和生產(chǎn)企業(yè)加大了對(duì)液體菌種的投入和研發(fā)力度[6]。因此，為提高雙孢蘑菇制種自動(dòng)化、工廠化生產(chǎn)水平，豐富雙孢蘑菇菌種生產(chǎn)工藝，對(duì)雙孢蘑菇液體菌種的研究具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】1948年，Humfeld[7]和Dijkstra等[8]對(duì)蘑菇開(kāi)展了液體發(fā)酵培養(yǎng)的研究，并指出液體培養(yǎng)的菌絲體適宜作為蘑菇培養(yǎng)的菌種。目前雙孢蘑菇液體菌種的研究，如液體培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的優(yōu)化等[9?13]，已較為清楚，但尚未全面系統(tǒng)地掌握雙孢蘑菇液體培養(yǎng)過(guò)程中生理生化變化規(guī)律，進(jìn)而液體菌種作為原種擴(kuò)繁栽培種也僅限于實(shí)驗(yàn)室條件下的小規(guī)模使用?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】搖瓶菌種作為一級(jí)菌種，是發(fā)酵罐培養(yǎng)獲得活力旺盛的二級(jí)液體菌種的關(guān)鍵。雙孢蘑菇液體培養(yǎng)過(guò)程中的生理生化指標(biāo)反映菌絲體物質(zhì)代謝情況，根據(jù)生理生化指標(biāo)，判斷出菌絲體所處的生長(zhǎng)階段。通過(guò)分析雙孢蘑菇搖瓶菌種的生理生化指標(biāo)，掌握搖瓶液體發(fā)酵培養(yǎng)的液體種子生長(zhǎng)規(guī)律，突破液體菌種在實(shí)驗(yàn)室條件下的瓶頸，為在工廠化條件下利用液體菌種大規(guī)模擴(kuò)繁生產(chǎn)雙孢蘑菇栽培種奠定基礎(chǔ)?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】本研究通過(guò)對(duì)雙孢蘑菇W192液體種子搖瓶培養(yǎng)過(guò)程中的菌絲體生物量、菌絲球數(shù)量和直徑、發(fā)酵液pH值、還原糖和氨基氮含量、胞外酶活性等主要生理指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定分析，判斷培養(yǎng)終點(diǎn)，以期獲得菌絲體生物量大、菌絲球數(shù)量多、質(zhì)量好、活力強(qiáng)的液體種子用于發(fā)酵罐深層發(fā)酵培養(yǎng)二級(jí)液體原種。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供 試 菌 株 雙 孢 蘑 菇（Agaricus bisporus）W 192，由福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所育種室提供。

1.1.2 液體種子培養(yǎng)基配方 葡萄糖5 g·L?1，小米粉7.5 g·L?1，蛋白胨2 g·L?1，黃豆粉5 g·L?1，MgSO4·7 H2O 0.75 g·L?1，KH2PO42 g·L?1。

1.1.3 主要儀器 奧林巴 斯顯微 鏡CX22LEDRFS1、奧豪斯pH計(jì)STARTER3100、紫外分光光度計(jì)UV-1300、電子分析天平FA1104、潔凈工作臺(tái)SW-CJ-2 F、恒溫?fù)u床BSD-YX2200、生化培養(yǎng)箱SPX-250B-Z。

1.1.4 試驗(yàn)試劑 無(wú)水葡萄糖、硫酸鎂、磷酸二氫鉀 等，分析純，西隴化工股份有限公司生產(chǎn)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 菌種活化 從保藏的試管菌種中切出0.2 cm×0.2 cm大小的菌塊接種于PDA平皿，24 ℃恒溫培養(yǎng) 20 d。

1.2.2 液體種子培養(yǎng) 250 mL三角瓶裝液量100 mL，于121 ℃、0. 12 MPa 壓力下滅菌30 min，冷卻后將活化的PDA母種用打孔器打出直徑1 cm大小的菌塊，每瓶接2塊菌塊，在24 ℃、180 r·min?1的培養(yǎng)振蕩器上旋轉(zhuǎn)振蕩培養(yǎng)，每隔2 d隨機(jī)取3瓶檢測(cè)各項(xiàng)指 標(biāo)。

1.2.3 菌絲體生物量測(cè)定 取10 mL發(fā)酵液，在10 000 r·min?1下，離心10 min，棄上清液，菌絲體經(jīng)蒸餾水洗滌3次后，將菌絲體在60 ℃烘干至恒重，電子分 析天平稱(chēng)重，重復(fù)3次，取平均數(shù)。

1.2.4 菌絲球數(shù)量測(cè)定 精密吸取1 mL培養(yǎng)液，用蒸餾水稀釋10倍，再?gòu)闹形? mL懸浮液置于平皿中，皿下襯黑白相間方格紙計(jì)數(shù)，重復(fù)3次，取平 均數(shù)。

1.2.5 菌絲球直徑測(cè)定 吸取0.1 mL稀釋10倍的懸浮液置于載玻片上，用光學(xué)顯微鏡在低倍鏡（4×10）下隨機(jī)選取，測(cè)量菌絲球最長(zhǎng)長(zhǎng)度和最短長(zhǎng)度，以菌絲球最長(zhǎng)長(zhǎng)度加最短長(zhǎng)度的二分之一長(zhǎng)度 即為菌絲球直徑，重復(fù)3次，取平均數(shù)。

1.2.6 培養(yǎng)液pH值測(cè)定 用pH計(jì)直接置于培養(yǎng)液中 測(cè)量，重復(fù)3次，取平均數(shù)。

1.2.7 還原糖含量的測(cè)量 取不同培養(yǎng)時(shí)間的培養(yǎng)液，采用DNS法[14]測(cè)定還原糖含量，重復(fù)3次，取平 均數(shù)。

1.2.8 氨基氮含量的測(cè)量 取不同培養(yǎng)時(shí)間的培養(yǎng)液，采用茚三酮比色法[15]測(cè)定氨基氮含量，重復(fù)3 次，取平均數(shù)。

1 .2.9 培養(yǎng)液胞外酶活的測(cè)定

1.2.9.1 羧甲基纖維素酶（CMCase）活性測(cè)定 根據(jù)參考文獻(xiàn)[16]羧甲基纖維素酶活力單位為: 以每毫升培養(yǎng)液中的酶量與底物作用30 min釋放出1 mg葡萄 糖為1活力單位（U）。

1.2.9.2 淀粉酶活性測(cè)定 根據(jù)參考文獻(xiàn)[16]淀粉酶活力單位定義為: 以每毫升培養(yǎng)液中的酶量與底物作用3 0 min 釋放出1 mg葡萄糖為1活力單位（U）。

1.2.9.3 酸性蛋白酶活性測(cè)定 根據(jù)參考文獻(xiàn)[17]酸性蛋白酶活力單位為：以每毫升培養(yǎng)液中的酶量與底物作用10 min 引起0.01個(gè)吸光值改變?yōu)?活力單位 （U）。

1.2.9.4 漆酶活性測(cè)定 根據(jù)參考文獻(xiàn)[18]漆酶活力單位為:以每毫升培養(yǎng)酶液與底物作用30 min內(nèi)改變0 .1個(gè)吸光值為1活力單位（U）。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)時(shí)間菌絲體生物量的變化情況

培養(yǎng)基接種后，按照2、4、6、8、10、12 d培養(yǎng)時(shí)間，分別測(cè)量不同培養(yǎng)時(shí)間菌絲體干重生物量。結(jié)果表明培養(yǎng)初期，由于雙孢蘑菇PDA母種菌絲塊接入液體培養(yǎng)基，菌絲塊沉沒(méi)在培養(yǎng)液中體積變大，伴隨回旋振蕩釋放菌絲片段，菌絲片段開(kāi)始在培養(yǎng)液中萌發(fā)生長(zhǎng)。從圖1可以看出，培養(yǎng)時(shí)間0～4 d菌絲體生物量增長(zhǎng)緩慢；培養(yǎng)至4～6 d，隨著菌絲片段不斷增多，菌絲球不斷增大，菌絲體增長(zhǎng)旺盛。培養(yǎng)至第8 d菌絲體生物量達(dá)到最高峰，達(dá)到9.7 mg·mL?1，與其他培養(yǎng)時(shí)間的菌絲生物量差異顯著（P＜0.05）；隨著發(fā)酵液中營(yíng)養(yǎng)成分的減少、代謝產(chǎn)物的累積及菌絲活性的衰弱，導(dǎo)致部分菌絲體 發(fā)生自溶現(xiàn)象，菌絲體生物量逐漸下降。

圖 1 不同培養(yǎng)時(shí)間菌絲體生物量的變化Fig. 1 Changes on fungal biomass in flask culture

2.2 不同培養(yǎng)時(shí)間菌絲球數(shù)量的變化情況

作為液體種子，菌絲球的數(shù)量決定萌發(fā)點(diǎn)的數(shù)量，是液體菌種的重要生理指標(biāo)。在2、4、6、8、10、12 d培養(yǎng)時(shí)間，分別統(tǒng)計(jì)不同培養(yǎng)時(shí)間的菌絲球數(shù)量，圖2表明，培養(yǎng)時(shí)間0～4 d菌絲球數(shù)量增加緩慢；培養(yǎng)至4～6 d，隨著從菌絲塊斷裂成菌絲片段增多，菌絲片段生長(zhǎng)成菌絲球，菌絲球邊緣菌絲再斷裂在培養(yǎng)液中，每個(gè)菌絲片段變成生長(zhǎng)點(diǎn)，繁殖形成新的菌絲球，此時(shí)培養(yǎng)液中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)還很豐富，菌絲體的生長(zhǎng)不受限制，表現(xiàn)為菌絲體生長(zhǎng)旺盛期。到第8 d菌絲體數(shù)量達(dá)到最高峰，達(dá)880個(gè)·mL?1，與其他培養(yǎng)時(shí)間的菌絲球數(shù)量差異顯著（P＜0.05），之后隨著培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)成分的減少及菌絲活性的下降，部分菌絲體自溶，菌絲球數(shù)量逐漸下降。

圖 2 不同培養(yǎng)時(shí)間菌絲球數(shù)量的變化Fig. 2 Changes on number of mycelium pellets in flask culture

2.3 不同培養(yǎng)時(shí)間菌絲球直徑的變化情況

按照2、4、6、8、10、12 d培養(yǎng)時(shí)間，分別測(cè)量不同培養(yǎng)時(shí)間的菌絲球直徑，圖3顯示，培養(yǎng)時(shí)間0～4 d菌絲球平均直徑較小，主要是以菌絲片段出現(xiàn)，此時(shí)菌絲體生長(zhǎng)處于遲滯期；培養(yǎng)時(shí)間4～6 d菌絲球平均直徑逐漸增大，此時(shí)菌絲體處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，表現(xiàn)為新生的菌絲團(tuán)直徑不斷增大，且邊緣形成絨毛狀菌絲；培養(yǎng)時(shí)間6～8 d菌絲球平均直徑趨于穩(wěn)定，培養(yǎng)時(shí)間第8 d，菌絲球平均直徑達(dá)0.809 mm，與其他培養(yǎng)時(shí)間的菌絲球平均直徑差異顯著（P＜0.05），此時(shí)菌絲體生長(zhǎng)處于平衡期，表現(xiàn)為菌絲球密集，邊緣呈絨毛狀突刺；隨后菌絲球直徑有所減小，此時(shí)處于衰退期，菌絲有自溶現(xiàn)象發(fā)生，菌絲體逐漸老化，菌球邊緣變光滑。

2.4 不同培養(yǎng)時(shí)間培養(yǎng)液pH值的變化情況

pH值影響培養(yǎng)液營(yíng)養(yǎng)成分及中間代謝物的解離、菌絲體細(xì)胞膜所帶電荷和胞外酶酶活性，是雙孢蘑菇液體培養(yǎng)的重要生化指標(biāo)。按照培養(yǎng)時(shí)間，分別測(cè)定2、4、6、8、10、12 d的培養(yǎng)液pH值，根據(jù)測(cè)定結(jié)果，繪制雙孢蘑菇W192液體種子生長(zhǎng)過(guò)程中pH值的變化曲線圖。圖4顯示，發(fā)酵液的pH值呈現(xiàn)先上升，后下降，再上升的變化規(guī)律。這可能是因?yàn)榕囵B(yǎng)液初期由于菌絲對(duì)液體培養(yǎng)基質(zhì)代謝產(chǎn)生堿性產(chǎn)物導(dǎo)致pH值略微上升，隨后6～10 d培養(yǎng)時(shí)間，菌絲體對(duì)基質(zhì)的分解生成部分有機(jī)酸，導(dǎo)致pH值略微下降；到培養(yǎng)末期，還原糖大量被消耗，同時(shí)菌絲球老化、自溶產(chǎn)生氨基氮等物質(zhì)，從而使培養(yǎng)液的pH值有所升高。

圖 3 不同培養(yǎng)時(shí)間菌絲球直徑的變化Fig. 3 Changes on mycelium pellet diameter in flask culture

圖 4 不同培養(yǎng)時(shí)間培養(yǎng)液pH值的變化Fig. 4 Changes on medium p H in flask culture

2.5 不同培養(yǎng)時(shí)間還原糖含量變化情況

利用DNS法測(cè)定不同時(shí)間培養(yǎng)液還原糖含量，繪制培養(yǎng)液還原糖含量的變化曲線圖。結(jié)果如圖5所示，培養(yǎng)時(shí)間2～8 d，隨著菌絲體生物量不斷增加，菌絲體代謝生成的還原糖大于消耗的還原糖，表現(xiàn)為還原糖含量不斷增加趨勢(shì)；培養(yǎng)時(shí)間第8 d，培養(yǎng)液還原糖含量最高，與其他培養(yǎng)時(shí)間的培養(yǎng)液還原糖含量差異顯著（P＜0.05），培養(yǎng)時(shí)間8～12 d，隨著菌絲體生物量到達(dá)最大，隨后培養(yǎng)液中碳源物質(zhì)不斷被消耗，表現(xiàn)為還原糖含量不斷下降趨勢(shì)。

2.6 不同培養(yǎng)時(shí)間培養(yǎng)氨基氮含量變化情況

利用茚三酮法測(cè)定不同時(shí)間培養(yǎng)液氨基氮含量，繪制培養(yǎng)液氨基氮含量的變化曲線圖。結(jié)果如圖6所示，當(dāng)培養(yǎng)至2 d，菌絲體生物量較少，分泌的胞外蛋白酶也較少，菌絲體主要利用培養(yǎng)液中的原始氨基氮，代謝消耗培養(yǎng)液中的原始氨基氮大于分解培養(yǎng)液中氮源物質(zhì)生成的氨基氮，表現(xiàn)為氨基氮含量不斷下降趨勢(shì)；培養(yǎng)至6 d，培養(yǎng)液中氨基氮含量最低，隨著菌絲體生物量不斷增加，菌絲體分泌的胞外蛋白酶增多，為了滿(mǎn)足菌絲體對(duì)氮源需求，代謝培養(yǎng)液中的氮源物質(zhì)生成的氨基氮大于消耗的氨基氮，表現(xiàn)為氨基氮含量升高；培養(yǎng)至8 d，培養(yǎng)液中氨基氮含量最高，與其他培養(yǎng)時(shí)間的培養(yǎng)液氨基氮含量差異顯著（P＜0.05），培養(yǎng)時(shí)間8～12 d，隨著菌絲體生物量到達(dá)最大，隨后培養(yǎng)液中含氮物質(zhì)不斷被消耗，表現(xiàn)為氨基氮含量不斷下降趨勢(shì)。

圖 5 不同培養(yǎng)時(shí)間培養(yǎng)液還原糖含量的變化Fig. 5 Changes on reducing sugar in medium in flask culture

圖 6 不同培養(yǎng)時(shí)間培養(yǎng)液氨基氮含量的變化Fig. 6 Changes on amino nitrogen in medium in flask culture

2.7 不同培養(yǎng)時(shí)間胞外酶酶活變化情況

按照2、4、6、8、10、12 d培養(yǎng)時(shí)間，分別測(cè)定培養(yǎng)液中羧甲基纖維素酶、淀粉酶、酸性蛋白酶和漆酶的酶活，根據(jù)測(cè)定結(jié)果，繪制雙孢蘑菇W192液體種子生長(zhǎng)過(guò)程中酶活性的變化曲線，如圖7所示。結(jié)果表明，菌絲體分泌的羧甲基纖維素酶、淀粉酶和漆酶活性在8 d到達(dá)峰值，酸性蛋白酶在10 d到達(dá)峰值。在深層培養(yǎng)的2～4 d內(nèi)，菌絲體處于萌發(fā)狀態(tài)，對(duì)胞外酶的分泌處于調(diào)整期，胞外酶酶活的增長(zhǎng)比較緩慢。在培養(yǎng)4～6 d內(nèi)，菌絲體開(kāi)始進(jìn)入生長(zhǎng)旺盛期，此時(shí)菌絲的分裂增殖速度加快，分泌大量的胞外酶以分解培養(yǎng)液中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，此時(shí)的胞外酶酶活開(kāi)始增加，培養(yǎng)到第8 d，羧甲基纖維素酶、淀粉酶和漆酶活性達(dá)到峰值，此時(shí)羧甲基纖維素酶酶活為0.69 U，淀粉酶酶活為2.11 U，漆酶酶活為15.02 U，其中第8 d的漆酶活性與其他培養(yǎng)時(shí)間的漆酶活性差異顯著（P＜0.05）。第8 ～10 d，菌絲體處于生長(zhǎng)的平衡時(shí)期，氮源成分被大量消耗，通常認(rèn)為蛋白酶是在基質(zhì)中可吸收氮源缺乏的情況下,為了獲得蛋白質(zhì)中的氮素而產(chǎn)生的[19]。因此，酸性蛋白酶被大量誘導(dǎo)出來(lái)，活性達(dá)到峰值，酶活為2.93 U，其他胞外酶活性逐漸減弱。隨后菌絲體進(jìn)入生長(zhǎng)衰亡期，對(duì)胞外酶活的分泌也急速下降，此時(shí)菌絲球的活力逐漸減弱。

圖 7 不同培養(yǎng)時(shí)間胞外酶酶活性的變化Fig. 7 Changes on extracellular enzyme activities in flask culture

2.8 液體種子活力驗(yàn)證

分別將2、4、6、8、10、12 d培養(yǎng)時(shí)間的液體種子轉(zhuǎn)接至250 mL三角瓶裝液量為100 mL的液體培養(yǎng)基中進(jìn)行模擬發(fā)酵罐液體菌種培養(yǎng)，接種量1%，在24 ℃、180 r·min?1的培養(yǎng)振蕩器上旋轉(zhuǎn)振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)6 d，計(jì)算菌絲球數(shù)量和菌絲體生物量，試驗(yàn)結(jié)果如圖8、9所示，培養(yǎng)8 d的液體種子轉(zhuǎn)接液體培養(yǎng)基獲得的菌絲球數(shù)量最多，達(dá)115個(gè)·mL?1，與培養(yǎng)時(shí)間為2、4、6、10、12 d的液體種子對(duì)液體菌種菌絲球數(shù)的影響呈顯著性差異（P＜0.05）；同時(shí)，培養(yǎng)8 d的液體種子轉(zhuǎn)接液體培養(yǎng)基獲得的菌絲體生物量最大，達(dá)7.56 mg·mL?1，雖與培養(yǎng)6 d的液體種子轉(zhuǎn)接液體培養(yǎng)基獲得的菌絲體生物量的差異不顯著（P＞0.05），但與培養(yǎng)時(shí)間為2、4、10、12 d的液體種子獲得的菌絲體生物量的差異顯著（P＜0.05）。驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明，培養(yǎng)8 d的液體種子活力最強(qiáng)，可作為發(fā)酵罐培養(yǎng)的種源擴(kuò)繁液體原種。

圖 8 不同培養(yǎng)時(shí)間的液體種子對(duì)液 菌種菌絲球數(shù)量的影響Fig. 8 Effect of culture time on number of mycelium pellets

圖 9 不同培養(yǎng)時(shí)間的液體種子對(duì)液體菌種菌絲生物量的影響Fig. 9 Effect of culture time on fungal biomass

3 討論與結(jié)論

雙孢蘑菇W192液體種子搖瓶培養(yǎng)過(guò)程中，菌絲體生物量、菌絲球數(shù)量、平均直徑、還原糖和氨基氮含量等生理生化指標(biāo)在第8 d均達(dá)到峰值，隨后隨著培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)成分的減少以及菌絲活性的減弱，以上5種生理指標(biāo)開(kāi)始下降，到第12 d，菌絲體老化，并產(chǎn)生自溶現(xiàn)象，這符合雙孢蘑菇液體培養(yǎng)的一般生長(zhǎng)規(guī)律，也反映出第8 d的雙孢蘑菇菌絲體活力最高，若繼續(xù)培養(yǎng)則菌絲體活力下降。同時(shí)羧甲基纖維素酶、淀粉酶、酸性蛋白酶和漆酶的酶活性生化指標(biāo)也具有相同的變化趨勢(shì)，說(shuō)明胞外酶的酶活變化規(guī)律與菌絲體生長(zhǎng)趨勢(shì)基本符合。在整個(gè)搖瓶培養(yǎng)過(guò)程中，甲基纖維素酶、淀粉酶和酸性蛋白酶活性的變化不明顯，而漆酶活性變化明顯。漆酶是降解木質(zhì)素大分子物質(zhì)的主要酚氧化酶，能加速木質(zhì)素芳香族高分子化合物的分解，提供菌絲所需的營(yíng)養(yǎng)，漆酶活性越高，菌株分解能力越強(qiáng)[19]。因此，漆酶活性可作為反映雙孢蘑菇菌絲體活性的指標(biāo)，也可作為有效可靠的檢測(cè)指標(biāo)。孫建華等[20]對(duì)絲狀真菌發(fā)酵過(guò)程中的形態(tài)學(xué)研究指出：菌絲體

形態(tài)的變化影響其在液體培養(yǎng)環(huán)境下?tīng)I(yíng)養(yǎng)的消耗和攝氧率，進(jìn)而影響菌絲體繼續(xù)生長(zhǎng)以及代謝產(chǎn)物的生成，因此后續(xù)研究有必要從生理形態(tài)學(xué)角度研究菌絲生長(zhǎng)規(guī)律及形態(tài)變化和各生理指標(biāo)的關(guān)系。綜上所述，本試驗(yàn)結(jié)果為雙孢蘑菇W192液體種子搖瓶培養(yǎng)過(guò)程的控制提供了比較可靠的技術(shù)參數(shù)，并確定培養(yǎng)終點(diǎn)為第8 d，可以獲得菌絲活力旺盛、生物量大的液體種子用于擴(kuò)繁發(fā)酵罐液體菌種。