邰 賀，姜曉琳，姚思成，程美佳，宋 囡，武躍華，賈連群

(1. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 沈陽(yáng) 110847；2. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，遼寧 沈陽(yáng) 110034)

急性心肌梗死(AMI)是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的一種急危重表現(xiàn)，高血脂癥是導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的重要原因，影響冠心病的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后[1-2]。合并高血脂癥的AMI患者，心肌微循環(huán)和血管內(nèi)皮損傷嚴(yán)重，會(huì)有明顯的過(guò)氧化損傷，心肌血供恢復(fù)較困難，介入、溶栓等治療的效果較差，且治療過(guò)程中易出現(xiàn)心力衰竭、心律失常，嚴(yán)重者甚至出現(xiàn)心源性休克[3-4]。中醫(yī)藥在AMI與高血脂癥的治療與預(yù)防中使用廣泛，有助于改善AMI預(yù)后[5]。血脂屬于中醫(yī)中的“膏”“脂”，中醫(yī)理論研究認(rèn)為高血脂癥是由于脾失健運(yùn)(運(yùn)化功能降低)后的膏脂傳輸異常導(dǎo)致，高脂輸布障礙進(jìn)而出現(xiàn)痰瘀聚集而生痰，長(zhǎng)時(shí)間出現(xiàn)淫血內(nèi)滯，導(dǎo)致血脈痰瘀，治療上以化瘀祛痰為主[6]。本研究探討了化瘀祛痰方對(duì)高血脂癥合并AMI大鼠心肌組織過(guò)氧化損傷的干預(yù)作用，旨在為今后的臨床實(shí)踐提供一定的理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)SD雄性大鼠90只，購(gòu)自遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司[合格證號(hào)：SCXK(遼)2015-0001]，體質(zhì)量180～220 g，8～10周齡。在恒溫恒濕的動(dòng)物房?jī)?nèi)飼養(yǎng)，溫度(20±3)℃，濕度45%～65%，12 h光照、12 h黑暗。

1.2飼料及藥物 高脂飼料配方：基礎(chǔ)飼料(81.3%)的基礎(chǔ)上添加丙基硫氧嘧啶(0.2%)、膽固醇(3%)、豬油(10%)、膽酸鈉(0.5%)、蔗糖(5%)，購(gòu)自沈陽(yáng)市前民動(dòng)物飼料廠。化瘀祛痰方組方：丹參5 g、茯苓10 g、石菖蒲5 g、郁金5 g、法半夏5 g、絞股藍(lán)15 g、黨參25 g、川芎5 g、黃芪25 g，購(gòu)自遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院制劑室，該方已經(jīng)獲批國(guó)家專(zhuān)利(專(zhuān)利號(hào)：ZL200710010845.9)。將中藥放入水中(液面高于藥材)浸泡1 h后水煮20 min，過(guò)濾后將藥渣去除，反復(fù)煎煮3次，將3次藥液分別濃縮成含生藥量0.45 g/mL、0.9 g/mL、1.8 g/mL的低、中、高濃度的水煎劑，4 ℃下保存。大鼠給藥劑量按照成人一日量6.3倍計(jì)算，低劑量為中劑量的1/2，高劑量為中劑量的2倍。

1.3試劑與儀器 總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)檢測(cè)試劑盒，四川邁克生物科技股份有限公司；肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒，南京建成生物科技有限公司；超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)檢測(cè)試劑盒，南京建成生物科技有限公司。伊文思藍(lán)染料(0.5%)，北京百奧萊博科技有限公司。全自動(dòng)生化分析儀(TBA-120FR型)，日本東芝公司；超低溫冰箱(dW-HL388型)，中國(guó)美菱公司；化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)(5200型)，上海天能科技有限公司。

1.4分組給藥及造模方法 將90只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組，非高脂模型組，高脂模型組，化瘀祛痰方高、中、低劑量組，每組15只。每組大鼠普通飼料喂養(yǎng)2周適應(yīng)環(huán)境后開(kāi)始進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。假手術(shù)組與非高脂模型組給予普通飼料喂養(yǎng)6周，高脂模型組及化瘀祛痰方低、中、高劑量組給予高脂飼料喂養(yǎng)6周。在此過(guò)程中，化瘀祛痰方低、中、高劑量組分別按照4.5，9，18 g/(kg·d)劑量每日灌胃化瘀祛痰方煎液8 mL/(kg·d)，其余組給予8 mL/(kg·d)生理鹽水灌胃，均早晚各1次，持續(xù)2周。末次給藥6 h后(空腹)進(jìn)行造模，假手術(shù)組開(kāi)胸手術(shù)后，僅將絲線穿過(guò)冠狀動(dòng)脈但不結(jié)扎，其余5組行左前降支冠狀動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)制備AMI模型。造模方案參考文獻(xiàn)[7]：腹腔注射7%水合氯醛(5 mL/kg)進(jìn)行麻醉，3～5 min疼痛反射消失后開(kāi)始手術(shù)，固定四肢與頭部，頸前部備皮后消毒皮膚，切開(kāi)皮膚，暴露氣管并分離，接通呼吸機(jī)和心電監(jiān)護(hù)儀。沿左側(cè)鎖骨中線縱向切開(kāi)，在第4與第5肋間分離肌肉開(kāi)胸，將心包剪開(kāi)，暴露心臟，在肺動(dòng)脈圓錐與左心耳間的位置、距離冠狀動(dòng)脈始端2～3 mm處用6/0的絲線結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支，大鼠左室壁變白后將心臟還納回心腔，關(guān)閉胸腔并縫合手術(shù)切口，結(jié)扎后1～5 min心電圖呈現(xiàn)典型的心肌梗死模式(Ⅱ?qū)?lián)出現(xiàn)ST段弓背抬高≥0.1 mV或者出現(xiàn)Q波)代表造模成功。造模后2 h，經(jīng)頸動(dòng)脈注射0.5%的伊文思藍(lán)染料2 mL；造模后24 h，麻醉各組大鼠后剖開(kāi)腹腔取腹主動(dòng)脈血，打開(kāi)胸腔并快速取出心臟-20 ℃保存待檢測(cè)。

1.5指標(biāo)檢測(cè) ①取腹主動(dòng)脈血，以2 000 r/min離心20 min，分離出血清，在生化分析儀上按照試劑盒說(shuō)明檢測(cè)TC、TG、LDL-C、HDL-C水平，采用分光光度計(jì)法按照試劑盒說(shuō)明檢測(cè)血清CK、CK-MB、LDH水平，按照試劑盒說(shuō)明分別檢測(cè)血清SOD、GSH-Px、ROS、MDA水平與未壞死心肌組織中SOD、MDA水平。②沿心臟長(zhǎng)軸切開(kāi)成1 mm的薄片，采用1%的紅四氮唑(TTC)復(fù)染15 min，以4%甲醛固定后通過(guò)圖像分析軟件測(cè)得缺血梗死面積與正常面積，計(jì)算出梗死程度，梗死程度=梗死面積/缺血面積×100%。

2 結(jié) 果

2.1各組大鼠一般情況 各組大鼠在造模前狀態(tài)較好，體型勻稱，毛發(fā)光亮，反應(yīng)迅速，給予高脂飼料喂養(yǎng)后體型肥胖，活動(dòng)減少且敏捷度降低，毛發(fā)光澤度降低，大便變稀且次數(shù)增加(符合脾虛的臨床表現(xiàn))，化瘀祛痰方低、中、高劑量大鼠上述癥狀有所改善。灌胃過(guò)程中化瘀祛痰方低、高劑量組各有1只大鼠死亡；造模過(guò)程中假手術(shù)組死亡1只，非高脂模型組死亡2只，高脂模型組死亡2只，化瘀祛痰方低、中、高劑量組分別死亡2只、2只、3只。

2.2各組大鼠外周血血脂指標(biāo)水平比較 非高脂模型組與假手術(shù)組TC、TG、LDL-C、HDL-C水平比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)；與非高脂模型比較，高脂模型組TC、TG、LDL-C水平均明顯升高(P均<0.05)，HDL-C水平明顯降低(P<0.05)；化瘀祛痰方高、中、低劑量組TC、TG水平和化瘀祛痰方高、中劑量組LDL-C水平均明顯低于高脂模型組(P均<0.05)，化瘀祛痰方高、中、低劑量組HDL-C水平均明顯高于高脂模型組(P均<0.05)；化瘀祛痰方高劑量組TC、TG、LDL-C水平均明顯低于化瘀祛痰方低、中劑量組(P均<0.05)，HDL-C水平均明顯高于化瘀祛痰方低、中劑量組(P均<0.05)。見(jiàn)表1。

2.3各組大鼠外周血氧化應(yīng)激指標(biāo)水平比較 與假手術(shù)組比較，非高脂模型組SOD、GSH-Px水平均明顯降低(P均<0.05)，ROS、MDA水平均明顯升高(P均<0.05)；與非高脂模型組比較，高脂模型組SOD、GSH-Px水平均明顯降低(P均<0.05)，ROS、MDA水平均明顯升高(P均<0.05)；化瘀祛痰方高、中劑量組SOD、GSH-Px水平和化瘀祛痰方低劑量組GSH-Px水平均明顯高于高脂模型組(P均<0.05)，化瘀祛痰方高、中、低劑量組ROS、MDA水平均明顯低于高脂模型組(P均<0.05)；化瘀祛痰方高劑量組SOD、GSH-Px水平均明顯高于化瘀祛痰方低、中劑量組(P均<0.05)，ROS、MDA水平均明顯低于化瘀祛痰方低、中劑量組(P均<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠外周血氧化應(yīng)激指標(biāo)水平比較

2.4各組大鼠心肌組織中氧化應(yīng)激指標(biāo)水平比較與假手術(shù)組比較，非高脂模型組SOD水平明顯降低(P<0.05)，MDA水平明顯升高(P<0.05)；與非高脂模型組比較，高脂模型組SOD水平明顯降低(P<0.05)，MDA水平明顯升高(P<0.05)；與高脂模型組比較，化瘀祛痰方高、中、低劑量組SOD水平明顯升高(P均<0.05)，MDA水平明顯降低(P均<0.05)；化瘀祛痰方高劑量組SOD水平明顯高于化瘀祛痰方低、中劑量組(P均<0.05)，MDA水平明顯低于化瘀祛痰方低、中劑量組(P均<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠心肌組織中氧化應(yīng)激指標(biāo)水平比較

2.5各組大鼠外周血心肌酶譜及梗死程度比較 非高脂模型組CK-MB、CK、LDH水平及梗死程度均明顯高于假手術(shù)組(P均<0.05)；高脂模型組CK-MB、CK、LDH水平及梗死程度均明顯高于非高脂模型組(P均<0.05)；化瘀祛痰方高、中、低劑量組CK-MB、CK、LDH水平及梗死程度均明顯低于高脂模型組(P均<0.05)，且化瘀祛痰方高劑量組明顯低于化瘀祛痰方中、低劑量組(P均<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 各組大鼠外周血心肌酶譜及梗死程度比較

3 討 論

AMI是一種常見(jiàn)的致死性疾病，動(dòng)脈粥樣硬化，冠狀動(dòng)脈供血供氧減少，甚至完全中斷是AMI發(fā)生的主要原因。AMI患者常常合并高血脂癥及糖尿病。高血脂癥可導(dǎo)致炎性因子的生成增加，引起慢性炎性反應(yīng)，促進(jìn)血管內(nèi)皮損傷，加重血管狹窄程度，且血脂異常與氧化與抗氧化失衡有著一定的關(guān)系[8-9]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高血脂癥AMI大鼠血清TC、TG、LDL-C水平均明顯升高，HDL-C水平明顯降低；AMI大鼠無(wú)論是否合并高血脂癥其血清抗氧化物質(zhì)SOD、GSH-Px水平均明顯降低，氧化物質(zhì)ROS與MDA水平均明顯升高，而合并高血脂癥的AMI大鼠SOD、GSH-Px降低與ROS、MDA升高程度更加明顯，且高血脂癥AMI大鼠血清CK-MB、CK、LDH水平及梗死面積均比不合并高血脂癥的AMI大鼠高。說(shuō)明AMI大鼠會(huì)發(fā)生氧化與抗氧化失衡，以合并高血脂癥的AMI大鼠尤為明顯，且高血脂癥加重了心肌梗死程度，進(jìn)一步說(shuō)明氧化與抗氧化失衡程度與心肌梗死程度密切相關(guān)。

AMI的發(fā)生進(jìn)展原因可能如下：①心肌內(nèi)游離Ca2+超載導(dǎo)致心肌收縮與舒張障礙，心肌泵血能力降低，出現(xiàn)心力衰竭[10-11]。②心肌組織持續(xù)缺血、缺氧導(dǎo)致心室重塑，心肌內(nèi)膠原蛋白和基底膜降解，以適應(yīng)重塑，同時(shí)嚴(yán)重降低心室收縮力[12-13]。③AMI發(fā)生后，心臟收縮能力降低，全身臟器血供減少，組織出現(xiàn)無(wú)氧酵解，產(chǎn)生大量自由基，線粒體通透性降低，導(dǎo)致大量ROS進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，進(jìn)而損傷細(xì)胞膜[13]。目前改善AMI損傷的方法主要是抑制心肌鈣離子內(nèi)流、解除平滑肌痙攣狀態(tài)、擴(kuò)張冠脈，此外通過(guò)改善氧化與抗氧化物質(zhì)的失衡也能改善細(xì)胞膜通透性，減輕損傷程度。張?jiān)频萚4]研究報(bào)道，活血安心方可改善AMI氧化與抗氧化失衡，減輕心肌損傷。蘆勤瑋等[14]研究顯示復(fù)方丹參滴丸能通過(guò)改善氧化與抗氧化失衡及血管痙攣發(fā)揮治療作用。

中醫(yī)認(rèn)為冠心病歸屬于“心痛”“胸痹”(卒心痛)范疇，心氣內(nèi)虛、心脈瘀阻是最常見(jiàn)病因，屬于本虛標(biāo)實(shí)、虛實(shí)夾雜之證，本虛包括臟腑、氣血虛衰，而標(biāo)實(shí)主要是痰濁內(nèi)阻、血瘀、氣滯、寒凝、濕熱蘊(yùn)蒸、毒邪郁結(jié)[15-16]。從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)角度分析認(rèn)為與線粒體呼吸鏈功能異常有關(guān)，線粒體呼吸鏈異常，導(dǎo)致能量產(chǎn)生減少，血運(yùn)障礙，進(jìn)而出現(xiàn)“痰濁內(nèi)阻、血瘀、氣滯、毒邪郁結(jié)”等[17]。AMI可以看成是“心痛”與“胸痹”的重癥表現(xiàn)，屬于“真心病”，病機(jī)也為本虛標(biāo)實(shí)，本虛表現(xiàn)為心、腎的血?dú)馓澨?，?biāo)實(shí)表現(xiàn)為氣滯、血瘀等。本研究采用的化瘀祛痰方有較強(qiáng)的化瘀、活血、祛痰作用，前期研究證實(shí)該方可以降低高血脂癥大鼠小而密低密度脂蛋白濃度比,從而降低動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)[6]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，化瘀祛痰方高、中劑量組血清和心肌組織中SOD及血清GSH-Px水平均明顯高于高脂模型組，血清和心肌組織中MDA及血清ROS水平均明顯低于高脂模型組；且化瘀祛痰方高劑量組血清和心肌組織中SOD及血清GSH-Px水平均明顯高于化瘀祛痰方中、低劑量組，血清和心肌組織中MDA及血清ROS、CK-MB、CK、LDH水平和梗死程度均明顯低于化瘀祛痰方中、低劑量組。提示化瘀祛痰方提前干預(yù)，能夠調(diào)節(jié)血脂異常，改善AMI氧化與抗氧化失衡，減輕心肌梗死程度，且以高劑量作用效果最佳。本研究結(jié)果為今后臨床工作奠定了理論基礎(chǔ)，但有關(guān)化瘀祛痰方治療AMI的其他機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。