董閩慧，馬建華，王艷，劉璇

帕金森?。≒arkinson’s disease，PD）是一種與年齡相關(guān)、病程不可逆的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。PD的臨床表現(xiàn)除運(yùn)動(dòng)功能障礙外，還可能合并認(rèn)知功能障礙、情感障礙、睡眠障礙、嗅覺減退、感覺異常、自主神經(jīng)功能紊亂等非運(yùn)動(dòng)癥狀[1]。目前相關(guān)研究認(rèn)為PD 發(fā)病機(jī)制與年齡、氧化應(yīng)激、感染、免疫炎癥等因素相關(guān)[2]。免疫炎癥因素成為近幾年的研究熱點(diǎn)，有證據(jù)表明神經(jīng)炎癥貫穿于PD 的發(fā)病及進(jìn)展過程中，免疫異常不僅存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，也存在于外周免疫系統(tǒng)[3]。近年來對(duì)外周血淋巴細(xì)胞亞群的研究也使PD 的免疫背景受到重視，內(nèi)涵更為廣泛。相關(guān)研究表明非運(yùn)動(dòng)癥狀與神經(jīng)免疫炎癥相關(guān)性更高，如抑郁、疲勞和認(rèn)知障礙[4]。白介素6(interleukin-6，IL-6) 及 白介素 10(interleukin-10，IL-10)為外周血可測(cè)得的細(xì)胞因子。IL-6是由活化的T淋巴細(xì)胞和成纖維細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，為炎性物質(zhì)，可促進(jìn)B淋巴細(xì)胞增殖、分泌抗體，國(guó)內(nèi)外很多實(shí)驗(yàn)室對(duì)IL-6在PD發(fā)生和發(fā)展過程中的作用進(jìn)行探討，但尚未得到一致結(jié)論[5]。IL-10主要由人CD4+的T細(xì)胞分泌，是一種具有多種生物學(xué)活性的細(xì)胞因子，主要功能是抑制和終止炎癥反應(yīng)，因而具有抗炎作用[6]。本次實(shí)驗(yàn)選擇檢測(cè)PD患者及健康人群血清IL-6、IL-10水平，并探索其與PD病程分期及認(rèn)知、抑郁、焦慮、日常生活能力是否存在相關(guān)性，嘗試探討其在PD免疫炎癥發(fā)病機(jī)制中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2019年1月至5月新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科病房治療的PD患者43例（PD組）,均符合英國(guó)帕金森病協(xié)會(huì)腦庫(kù)臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)且征得患者及其家屬同意參與、符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)道德規(guī)范；排除口服非甾體抗炎藥物及糖皮質(zhì)激素患者，患繼發(fā)性帕金森病、多系統(tǒng)萎縮等其他錐體外系疾病者，有反復(fù)頭部外傷史、既往腦炎病史、腫瘤、大動(dòng)脈炎、膠質(zhì)病、血液病、嚴(yán)重肝腎疾病、甲狀腺疾病等可能影響外周血淋巴細(xì)胞因子的免疫系統(tǒng)疾病患者。PD 組中，男 24 例,女 19 例；年齡 39～86歲，平均(64.72±10.37)歲；病程 0.1～15 年，平均(3.68±3.80)年。

選擇同期體檢健康人群41例作為對(duì)照組,排除遺傳性疾病、神經(jīng)系統(tǒng)病史及急慢性炎癥、結(jié)締組織疾病、惡性腫瘤、血液系統(tǒng)疾病、嚴(yán)重肝腎功能損害者。對(duì)照組中，男19例，女22例；年齡39～81歲，平均(61.56±12.61)歲。

1.2 方法

2 組均進(jìn)行全面體格檢查、常規(guī)血液檢查和完整的病史采集。2 組均完成Hoehn&Yahr（H-Y）量表[7,8]、簡(jiǎn)易精神狀態(tài)檢查量表(mini-mental state examination，MMSE)[9]、蒙特利爾認(rèn)知評(píng)估量表(Montreal cognitive assessment,MoCA)[10]、漢密爾頓抑郁量表（Hamilton depression scale，HAMD）[11]、漢密爾頓焦慮量表（Hamilton anxiety scale，HAMA）[12]，日常生活活動(dòng)能力(activity of daily living，ADL)量表測(cè)評(píng)，且由同一名受過訓(xùn)練的臨床醫(yī)生進(jìn)行評(píng)定。

外周靜脈血樣本采集：2 組均在早晨空腹?fàn)顟B(tài)下采集外周靜脈血4 mL，不抗凝，靜置2 h 后于低溫高速離心機(jī)以轉(zhuǎn)速1000 r/min離心20 min，分離血清，提取血清后立即放置于-80℃低溫冰箱儲(chǔ)存待測(cè)。

血清 IL-6、IL-10 水平檢測(cè)：使用 IL-6、IL-10 酶聯(lián)免疫試劑盒（北京博奧森生物技術(shù)有限公司）。嚴(yán)格按照試劑盒說明書采用雙抗體夾心法檢測(cè)。具體步驟：標(biāo)準(zhǔn)品稀釋與加樣，在酶標(biāo)包被板上除空白孔外分別將待測(cè)標(biāo)本（每孔10 μL）或不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品（每孔100 μL）加入相應(yīng)孔中，除空白孔外每孔加入酶標(biāo)試劑50 μL，溫浴30 min，洗滌5 次后每孔加入顯色劑A 50 μL，再加入顯色劑B 50 μL,輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 min 后每孔加入終止液50μL，在加入終止液15 min 內(nèi)，以空白孔調(diào)零，450 nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD）值。 通過CurveExpert1.3 分析軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出血清IL-6、IL-10 水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS21.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)服從正態(tài)分布的計(jì)量資料，使用（）描述，對(duì)不服從正態(tài)分布的計(jì)量資料，使用中位數(shù)和四分位數(shù)間距M（Q1,Q3）進(jìn)行描述，組間比較使用t檢驗(yàn)或非參數(shù)秩和檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料使用例數(shù)和百分率描述，組間比較使用χ2檢驗(yàn)。指標(biāo)關(guān)聯(lián)性分析使用Spearman非參數(shù)檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組一般資料比較

2 組年齡、性別、民族、文化程度、吸煙、飲酒、高血壓史、糖尿病史等基線資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),具有良好的均衡性、可比性，見表1。

表1 2組一般資料比較

2.2 2組血清IL-6和IL-10水平比較

2組血清IL-6和IL-10水平為偏態(tài)分布數(shù)據(jù)，故使用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)探討2組差異，結(jié)果顯示PD組血清IL-6 和IL-10 水平均高于對(duì)照組（P＜0.05），見表2。

表2 2組血清IL-6和IL-10水平比較[ng/L，M(Q1,Q3)]

2.3 2組各項(xiàng)量表評(píng)分比較

2 組MMSE 評(píng)分、MOCA 評(píng)分差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；但PD 組HAMD 評(píng)分和HAMA 評(píng)分均高于對(duì)照組（P＜0.05），ADL 評(píng)分低于對(duì)照組（P＜0.05），見表3。PD 組發(fā)生抑郁（HAMD 評(píng)分≥20 分）22 例（51.2%），發(fā)生焦慮（HAMA 評(píng)分≥14 分）30 例（69.8%），均高于對(duì)照組的5 例和10 例（P＜0.05），見表4。

表3 2組各項(xiàng)量表評(píng)分比較(分)

表4 2組抑郁、焦慮發(fā)生比較[例(%)]

2.4 PD組血清IL-6、IL-10水平與H-Y分期、各量表評(píng)分相關(guān)性分析

PD 組血清 IL-6、IL-10 水平 與 H-Y 分期、MMSE 評(píng)分、MOCA 評(píng)分、HAMD 評(píng)分、HAMA 評(píng)分、ADL 評(píng)分不相關(guān)（P＞0.05），見表5。

3 討論

PD是導(dǎo)致神經(jīng)元進(jìn)行性死亡的不可治愈的神經(jīng)退行性疾病。PD的發(fā)病率不論男女都隨著年齡的增長(zhǎng)而增加，總體發(fā)病率為17/100 000人[13]，發(fā)病率較高。目前臨床工作中對(duì)于PD患者診斷主要依靠臨床表現(xiàn)、藥物試驗(yàn)性治療及正電子發(fā)射斷層掃描（PET）或單光子發(fā)射斷層掃描（SPECT）、放射性核素檢測(cè)。因發(fā)病早期臨床癥狀不典型，PET、SPECT 價(jià)格昂貴，并且難以獲得活檢PD的病理診斷而使PD患者的臨床診斷及治療處于不利地位，故可用于檢測(cè)疾病不同階段的易測(cè)量、可重復(fù)且不受人群的廣泛變化和外部因素影響的指標(biāo)是有臨床價(jià)值的[14]。所以，在外周血中尋找可臨床檢測(cè)、易獲取結(jié)果、可重復(fù)、價(jià)格合適的生物學(xué)標(biāo)記物在臨床工作中非常重要。

表5 PD組血清IL-6、IL-10 水平與H-Y 分期、各量表評(píng)分相關(guān)性分析

本次試驗(yàn)中選擇血清IL-6、IL-10 因子進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示PD 患者外周血血清IL-6、IL-10 水平均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），提示PD 患者體內(nèi)存在炎癥反應(yīng)，PD 的發(fā)生發(fā)展可能與患者自身免疫系統(tǒng)失調(diào)所導(dǎo)致的炎癥因子水平異常相關(guān)。IL-6主要由單核巨噬細(xì)胞分泌，屬于炎癥介質(zhì)，可促進(jìn)B細(xì)胞增殖和分泌抗體，增強(qiáng)NK細(xì)胞活性，目前多項(xiàng)研究[14-16]認(rèn)為IL-6在PD患者外周血中的表達(dá)水平增高。IL-10主要由Th2細(xì)胞分泌，具有抗炎和免疫抑制作用，主要表現(xiàn)為抑制T淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞分泌促炎性因子，并抑制單核巨噬細(xì)胞的活化[17，18]，抑制和終止炎癥反應(yīng),并通過抑制IL-2、IL-6、TNF-α的產(chǎn)生而抑制CD4+T細(xì)胞活性，繼而起到直接抑制T細(xì)胞相關(guān)的致炎作用，可認(rèn)為是PD患者的保護(hù)性因素。在本次試驗(yàn)中，血清IL-6、IL-10水平在PD患者中表現(xiàn)出相同的增高趨勢(shì)，考慮是PD患者發(fā)病過程中免疫炎癥激活及抗炎、免疫抑制在同時(shí)起作用。

H-Y分期反映PD患者的病程進(jìn)展情況并且大致評(píng)估患者運(yùn)動(dòng)癥狀嚴(yán)重程度，本次試驗(yàn)結(jié)果顯示PD 患者外周血血清IL-6、IL-10 水平與H-Y 分期無關(guān)聯(lián)性，考慮是免疫炎癥因素貫穿整個(gè)PD 病程，與PD 本身相關(guān)，不受病程進(jìn)展影響。日常生活能力也可間接反映PD 患者病情進(jìn)展情況，與患者運(yùn)動(dòng)功能關(guān)系密切，本研究PD 患者外周血血清IL-6、IL-10 水平與ADL量表評(píng)分無關(guān)聯(lián)性，顯示PD 患者外周血血清IL-6、IL-10 水平可能與患者運(yùn)動(dòng)癥狀發(fā)生及發(fā)展關(guān)聯(lián)性較低，考慮是PD 患者經(jīng)藥物干預(yù)治療后可滿足基本日常生活需求，另一方面，不能排除是因收集的PD 患者以輕中度病例較多、病程晚期病例較少造成的。

本次試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)PD患者外周血血清IL-10、IL-6水平與認(rèn)知、焦慮、抑郁沒有相關(guān)性，但目前有相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)PD相關(guān)疼痛、抑郁患者的外周血IL-6、IL-10水平較對(duì)照組顯著升高[19-21]，認(rèn)為外周血IL-6、IL-10 水平與PD 患者非運(yùn)動(dòng)癥狀關(guān)聯(lián)性更高[22]。IL-6 通過增加神經(jīng)元還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（nicoti-namide adenine dinucleotide phosphate，NADPH）氧化應(yīng)激相關(guān)的超氧化物量，使γ-氨基丁酸（gamma-aminobutyric acid,GABA）能神經(jīng)元的保護(hù)作用減弱，介導(dǎo)年齡相關(guān)的額葉皮層和海馬GABA 能中間神經(jīng)元的缺失、認(rèn)知功能減低，空間學(xué)習(xí)及記憶功能也受到影響，行為改變。故目前免疫炎癥因素與PD患者非運(yùn)動(dòng)癥狀之間是否存在相關(guān)性仍需進(jìn)一步探究。本次試驗(yàn)雖然未發(fā)現(xiàn)PD 患者血清IL-6、IL-10 水平與認(rèn)知、焦慮、抑郁相關(guān)，但PD 組焦慮、抑郁發(fā)生率明顯高于對(duì)照組，HAMD評(píng)分、HAMA 評(píng)分明顯高于對(duì)照組，MMSE 評(píng)分達(dá)到輕度認(rèn)知障礙水平，另外，MOCA 因存在漢族與少數(shù)民族對(duì)題目理解程度不同而使評(píng)分可靠性較低，且PD-MCI 的診斷標(biāo)準(zhǔn)前尚未完全統(tǒng)一[23]，故不可作為參考依據(jù)。

在免疫炎癥機(jī)制中，中樞神經(jīng)系統(tǒng)及外周炎癥可能均對(duì)PD患者的發(fā)病進(jìn)程產(chǎn)生影響，外周炎癥細(xì)胞、炎癥因子作用于神經(jīng)元、腦內(nèi)皮細(xì)胞和鄰近小膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)而誘發(fā)腦內(nèi)炎癥[24]。且腦內(nèi)增高的炎癥因子可以通過血腦屏障（BBB）進(jìn)入血液循環(huán)，可引起外周血炎癥因子升高。因此，患者外周血血清炎癥因子水平可以間接反映腦內(nèi)炎性反應(yīng)程度，可能有希望為臨床診斷及治療提供依據(jù)[25]。目前針對(duì)PD患者免疫炎癥方面的抗炎治療，仍處于研究階段，尚未得出一致結(jié)論，其中流行病學(xué)研究表明長(zhǎng)期使用非甾體抗炎藥物布洛芬可降低患PD 的風(fēng)險(xiǎn)，故一些研究人員建議使用阿司匹林等非甾體抗炎藥物來調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞的促炎抗炎機(jī)制[26]，這些結(jié)果支持炎癥在PD 發(fā)病中的重要作用。但另一項(xiàng)meta分析[22]顯示非甾體抗炎藥的使用與PD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)，非甾體抗炎藥的效力和累積使用沒有在PD發(fā)病、病程進(jìn)展中起關(guān)鍵作用。故本研究的意義在于可為今后PD患者是否可納入外周血淋巴細(xì)胞相關(guān)因子IL-6、IL-10為診斷及治療依據(jù)提供實(shí)驗(yàn)室研究基礎(chǔ)。

在本試驗(yàn)中存在一定的局限性，如抗PD 藥物對(duì)外周血炎癥因子的影響未作具體分析；納入試驗(yàn)的樣本數(shù)偏小，不同H-Y分期人數(shù)分布不均，未對(duì)PD患者進(jìn)行年齡階段不同分組；未對(duì)PD患者M(jìn)OCA、MMSE各部分減退程度進(jìn)行評(píng)估及與PD病程進(jìn)展進(jìn)行相關(guān)性分析；納入PD 患者時(shí)未對(duì)其震顫為主還是僵硬為主進(jìn)行分組評(píng)估；因在PD 患者中行腰椎穿刺術(shù)后行腦脊液相關(guān)檢查尚未普及，故無法使用外周血血清炎癥因子水平確切評(píng)估腦內(nèi)炎癥情況。