蔡小紅 盧燕波 吳軍華 邱海燕

川崎病（Kawasaki disease，KD）是一種小兒常見(jiàn)病，其發(fā)病率逐年上升，已經(jīng)取代風(fēng)濕熱成為北美、歐洲、日本等發(fā)達(dá)國(guó)家或地區(qū)兒童后天獲得性心臟病的主要原因[1]。然而，該病的病因和發(fā)病機(jī)制尚不明確，目前臨床上尚無(wú)特異性試驗(yàn)和生物標(biāo)志物可用于診斷KD，臨床組織樣本取材困難也進(jìn)一步限制了人們對(duì)KD的深入研究。因此，構(gòu)建出符合KD臨床特征的小鼠模型顯得極為重要，現(xiàn)就近年來(lái)關(guān)于構(gòu)建KD小鼠模型的國(guó)內(nèi)外研究新進(jìn)展作一綜述。

1 KD概述

KD又稱(chēng)為黏膜皮膚淋巴結(jié)綜合征，是一種以全身性血管炎為病理變化的急性自限性、發(fā)熱性疾病，好發(fā)于5歲以下嬰幼兒[2]。其臨床典型特征包括持續(xù)5 d以上的高熱且抗生素治療無(wú)效、非化膿性頸部淋巴結(jié)腫大、眼結(jié)合膜充血、唇充血皸裂、草莓舌、手足硬性水腫、皮疹（包括原卡介苗接種部位紅斑）等[3]。KD可損害患兒的心臟和冠狀動(dòng)脈，表現(xiàn)為冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張、冠狀動(dòng)脈瘤，甚至可導(dǎo)致缺血性心臟病和猝死的發(fā)生[2]。研究表明，未經(jīng)治療的KD患兒發(fā)展為冠狀動(dòng)脈瘤的風(fēng)險(xiǎn)可高達(dá)25%，在及時(shí)接受高劑量靜脈注射免疫球蛋白（intravenous immunoglobulin，IVIG）治療患兒中，這一比例可下降至4%左右，但仍有10%～20%的患兒對(duì)IVIG治療無(wú)反應(yīng)，導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈瘤的加速發(fā)展[2]。有研究認(rèn)為KD患兒的心血管后遺癥可延續(xù)到成年[4]。

流行病學(xué)資料提示，鏈球菌、腺病毒、反轉(zhuǎn)錄病毒等多種病原體感染可能為KD的病因，但均未得到證實(shí)。有研究認(rèn)為，川崎病是由免疫介導(dǎo)的，遺傳易感因素與多種感染因子相互作用的結(jié)果[5]。

2 KD小鼠模型

近年來(lái)，許多學(xué)者采用小鼠、幼豬、幼兔和犬等動(dòng)物成功構(gòu)建了KD動(dòng)物模型，由于小鼠品系較多，取材較為方便，誘導(dǎo)方式較豐富，成本也比其他實(shí)驗(yàn)動(dòng)物更低，所以目前國(guó)內(nèi)外研究大多選用小鼠來(lái)構(gòu)建KD動(dòng)物模型。

2.1 干酪乳桿菌細(xì)胞壁成分（lactobacillus casei cell wall extract，LCWE）誘導(dǎo)的KD模型 干酪乳桿菌是一種革蘭陽(yáng)性菌，在人和動(dòng)物的胃腸道和泌尿生殖道中均有定植[6]。LCWE主要由肽聚糖組成，含有豐富的鼠李糖，可以對(duì)抗溶菌酶的降解[7]。1985年，Lehman等[7]將制備的LCWE單次腹腔注射于不同的近交系小鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)LCWE可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生局灶性冠狀動(dòng)脈炎，且冠狀動(dòng)脈損傷在組織學(xué)上與臨床KD患兒相似。

LCWE誘導(dǎo)的小鼠模型在組織學(xué)上與人類(lèi)KD有許多相似之處，主要包括以下幾個(gè)方面。

LCWE誘導(dǎo)的KD模型與人類(lèi)KD在血管損傷病理過(guò)程中的相似之處。臨床尸檢研究顯示，KD血管損傷包括連續(xù)相關(guān)的3個(gè)病理過(guò)程：急性自限性壞死性動(dòng)脈炎、亞急性/慢性血管炎和腔內(nèi)肌成纖維細(xì)胞增殖（luminal myofibroblast proliferation，LMP）[8]。Noval等[9]通過(guò)研究表明，LCWE誘導(dǎo)模型特征是主動(dòng)脈根部炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和細(xì)胞外基質(zhì)的破壞、冠狀動(dòng)脈中壞死性動(dòng)脈炎的發(fā)展、LMP引起冠狀動(dòng)脈部分或完全阻塞，可基本概括上述人類(lèi)KD的3個(gè)病理過(guò)程。LCWE誘導(dǎo)模型也可模擬KD冠狀動(dòng)脈狹窄，其特征是冠狀動(dòng)脈狹窄、嚴(yán)重的冠狀動(dòng)脈炎和彈性蛋白降解，且LMP在冠狀動(dòng)脈狹窄的形成過(guò)程中至關(guān)重要[10]，這與伴有冠狀動(dòng)脈瘤的KD患兒的組織學(xué)特征相似[8,11]。

KD是一種巨噬細(xì)胞相關(guān)的血管性疾病，促炎性M1型巨噬細(xì)胞可在急性KD的血管損傷中發(fā)揮重要作用[12-13]。研究表明，LCWE誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)也參與了KD小鼠模型的血管損傷[14-15]，而巨噬細(xì)胞功能缺陷的C3H/HeJ小鼠在注射LCWE后不能誘導(dǎo)冠狀動(dòng)脈炎的發(fā)生[7]。

LCWE誘導(dǎo)的KD模型與人類(lèi)KD在心肌損傷過(guò)程中的相似之處。KD患兒冠狀動(dòng)脈血栓閉塞可導(dǎo)致缺血性心臟病的發(fā)生[11]，在LCWE誘導(dǎo)小鼠的冠狀動(dòng)脈中也可觀察到類(lèi)似的組織血栓閉塞[5]。KD患兒的心肌炎可致心肌功能障礙和纖維化，并可導(dǎo)致其長(zhǎng)期心血管后遺癥。LCWE誘導(dǎo)模型不僅可觀察到小鼠急性心肌炎的發(fā)生，在誘導(dǎo)KD血管炎后于恢復(fù)期給予腎上腺素能刺激也可誘發(fā)小鼠的心肌纖維化和心肌功能障礙[16]。與臨床KD相似，LCWE誘導(dǎo)小鼠也表現(xiàn)出電生理、心電圖異常和心臟神經(jīng)重塑，并可通過(guò)IL-1受體拮抗劑阿那白滯素（Anakinra）得到有效預(yù)防或改善[17-18]。

基于KD臨床特征，許多學(xué)者發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞、IL-1、TNF和1,4,5-三磷酸肌醇3激酶C（inositol 1,4,5-trisphosphate 3-kinase C，ITPKC）等在LCWE誘導(dǎo)模型致病過(guò)程中發(fā)揮重要作用，具體如下：

LCWE誘導(dǎo)模型依賴于T細(xì)胞，CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞都存在于LCWE誘導(dǎo)的冠狀動(dòng)脈病變中，CD8+T細(xì)胞耗竭治療可防止LCWE誘導(dǎo)小鼠的血管炎進(jìn)展，RNA測(cè)序也發(fā)現(xiàn)了與CD8+T細(xì)胞細(xì)胞毒性功能相關(guān)的基因表達(dá)增加，而CD4+T細(xì)胞缺乏并不影響LCWE誘導(dǎo)KD血管炎的發(fā)生、發(fā)展[9]。Schulte等[19]分別向RAG1-/-小鼠、B cellnull小鼠和野生型小鼠單次腹腔注射LCWE，發(fā)現(xiàn)所有RAG1-/-小鼠均未發(fā)生冠狀動(dòng)脈炎，而70%的野生型小鼠和所有B cellnull小鼠發(fā)生了冠狀動(dòng)脈病變，這進(jìn)一步表明T細(xì)胞在LCWE誘導(dǎo)的KD冠狀動(dòng)脈炎中起重要作用。

LCWE誘導(dǎo)模型也依賴于完整的Toll樣受體2（toll-like receptor 2，TLR2）和髓樣分化因子 88（myeloid differentiation factor 88，MyD88）信號(hào)以及 IL-1β、IL-6和TNF等促炎細(xì)胞因子的釋放[14]。Lee等[15]發(fā)現(xiàn)半胱氨酸蛋白酶（Caspase）-1和IL-1β在該模型冠狀動(dòng)脈損傷中發(fā)揮關(guān)鍵作用，其冠狀動(dòng)脈損傷可被IL-1受體拮抗劑阻斷。TNF-α在LCWE誘導(dǎo)的冠狀動(dòng)脈炎和動(dòng)脈瘤形成過(guò)程中也至關(guān)重要[20]，TNF受體的遺傳消耗或TNF信號(hào)通路的藥物阻斷可保護(hù)小鼠避免血管炎的發(fā)生[15,21]。

LCWE誘導(dǎo)模型也證實(shí)了ITPKC在KD發(fā)展過(guò)程中的重要作用，ITPKC可通過(guò)控制細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度來(lái)介導(dǎo)核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域（nucleotide-binding oligomerization domain，Nod）樣受體家族含pyrin結(jié)構(gòu)域蛋白 3（Nod-like receptor family pyrin domain-containing protein 3，NLRP3）炎癥體的激活、調(diào)節(jié)NLRP3的表達(dá)及隨后IL-1β和IL-18的產(chǎn)生，從而影響高危ITPKC基因型患者的治療效果[22]。

2.2 白色念珠菌提取物誘導(dǎo)的KD模型 白色念珠菌是一種條件致病性真菌，在一定條件下可在免疫受損宿主中轉(zhuǎn)化為誘導(dǎo)炎癥的病原體[5]。有研究認(rèn)為KD發(fā)病與對(duì)流層風(fēng)模式有關(guān)，在KD高發(fā)季節(jié)，對(duì)流層與地面氣溶膠的微生物群有很大差異，其中念珠菌是高空樣本中的優(yōu)勢(shì)真菌，占所有真菌菌株的54%，表明念珠菌可能是KD的一個(gè)致病因素，念珠菌動(dòng)物模型具有一定可靠性[23]。

1979年，Murata[24]從KD患兒糞便中成功分離出白色念珠菌，并將培養(yǎng)上清液中的白色念珠菌堿性提取物（candida albicans derived substances，CADS）在第 1周和第6周連續(xù)5 d注射入小鼠腹腔，成功誘導(dǎo)了小鼠的冠狀動(dòng)脈炎，這種動(dòng)脈炎在組織病理學(xué)上與KD患者非常相似。隨后，Takahashi等[25]重復(fù)了該實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)有66%的CD-1小鼠發(fā)生了動(dòng)脈炎，最常累及部位是冠狀動(dòng)脈近端區(qū)域和主動(dòng)脈根部。組織學(xué)上，動(dòng)脈炎特征是典型的增生性和肉芽腫性炎癥，伴有大量巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，還可觀察到血管內(nèi)纖維層增厚、內(nèi)彈性層和中層破壞，與人類(lèi)KD的冠狀動(dòng)脈病變類(lèi)似。

連續(xù)腹腔注射白色念珠菌細(xì)胞壁提取物也可誘發(fā)C57BL/6小鼠冠狀動(dòng)脈、頸動(dòng)脈、腹腔動(dòng)脈、髂動(dòng)脈和腹主動(dòng)脈等處的炎性病變，且c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）在該模型的血管炎發(fā)展中至關(guān)重要，JNK抑制劑可顯著降低小鼠病變的發(fā)生率，并可在組織學(xué)上阻止血管炎癥和組織破壞[26]。

2.3 白色念珠菌水溶物（candida albicans water-soluble fraction，CAWS）誘導(dǎo)的KD模型 CAWS是白色念珠菌培養(yǎng)上清液中釋放的水溶性多糖成分，主要由α-甘露糖蛋白和β-葡聚糖復(fù)合物組成[27]。

2004年，Nagi-Miura等[27]研究表明，與CADS相比，CAWS誘導(dǎo)小鼠的KD冠狀動(dòng)脈炎發(fā)病率更高，且不同品系小鼠的冠狀動(dòng)脈炎發(fā)病率也有所差異，DBA/2、C57BL/6和C3H/HeN品系的所有小鼠均發(fā)生了冠狀動(dòng)脈炎，其中以DBA/2小鼠冠狀動(dòng)脈炎最嚴(yán)重，死亡率最高，而CBA/J小鼠的冠狀動(dòng)脈炎發(fā)病率僅有10%。

近年來(lái)，許多學(xué)者研究了IL-1、TNF、樹(shù)突狀細(xì)胞相關(guān)C型凝集素-2（dendritic cell-associated C-type lectin-2，Dectin-2）和IL-10等在CAWS誘導(dǎo)模型中發(fā)揮的促炎或抗炎作用，具體如下。

IL-1β的釋放需要兩個(gè)信號(hào)：?jiǎn)?dòng)NLRP3炎癥體誘導(dǎo)NLRP3和前IL-1β的表達(dá)，激活炎癥體將前IL-1β切割成成熟形式。CAWS可通過(guò)Dectin-2/脾酪氨酸激酶（spleen tyrosine kinase，Syk）/JNK/NF-κB 途徑誘導(dǎo)NLRP3炎癥體的啟動(dòng)，并通過(guò)Dectin-2/Syk/JNK/線粒體活性氧（mitochondrial reactive oxygen species，mtROS）途徑激活NLRP3炎癥體，而IL-1β-/-、凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白（apoptosis-associated speck like protein containing a caspase recruiting domain，ASC）-/-（ASC參與NLRP3炎癥體的組成）和NLRP3-/-小鼠不會(huì)誘發(fā)血管炎，表明NLRP3炎癥體驅(qū)動(dòng)的IL-1β產(chǎn)生是血管炎發(fā)生所必需的[28]，而抗IL-1β抗體可明顯減輕CAWS誘導(dǎo)的血管炎[29]。

KD心臟炎癥的特征是彌漫性心肌炎發(fā)生在冠狀動(dòng)脈血管炎發(fā)展之前，Stock等[30]重復(fù)CAWS誘導(dǎo)模型發(fā)現(xiàn)，TNF和IL-1在KD發(fā)病過(guò)程中的作用時(shí)機(jī)不同，其中TNF在急性心肌炎的發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用，TNF受體缺陷小鼠不能成功誘發(fā)急性心肌炎。而IL-1對(duì)急性心肌炎之后的冠狀動(dòng)脈炎的發(fā)展至關(guān)重要，盡管IL-1-/-小鼠在CAWS誘導(dǎo)后會(huì)發(fā)生廣泛的心肌炎，但不會(huì)進(jìn)展為冠狀動(dòng)脈炎和主動(dòng)脈炎。

趨化因子配體 2（chemokine ligand 2，CCL2）-趨化因子受體 2（chemokine receptor 2，CCR2）軸在此模型的血管炎發(fā)展中起重要作用，CCR2基因失活對(duì)CAWS誘發(fā)的小鼠主動(dòng)脈炎和冠狀動(dòng)脈炎具有保護(hù)作用[31]。

天然免疫反應(yīng)也參與了KD血管炎的發(fā)展，在CAWS誘導(dǎo)模型中，心臟成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的粒細(xì)胞/巨噬細(xì)胞集落刺激因子（granulocyte/macrophage colonystimulating factor，GM-CSF）可激活組織巨噬細(xì)胞，促進(jìn)中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞等免疫細(xì)胞向心臟募集，從而導(dǎo)致心臟炎癥，而阻斷GM-CSF可有效阻止心臟炎癥的進(jìn)展[32]。

Dectin-2是一種C型凝集素受體，Miyabe等[33]研究表明，在CAWS誘導(dǎo)模型中，駐留在主動(dòng)脈根部的巨噬細(xì)胞中的Dectin-2信號(hào)可誘導(dǎo)CCL2的產(chǎn)生及主動(dòng)脈根部和冠狀動(dòng)脈中CCR2+炎性單核細(xì)胞（inflammatory monocytes，IMos）的募集。IMos在血管壁中分化為單核細(xì)胞來(lái)源的樹(shù)突狀細(xì)胞并通過(guò)Dectin-2/Syk/NLRP3炎癥體依賴途徑誘導(dǎo)IL-1β的釋放。隨后IL-1β激活心肌內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)CXC趨化因子配體1（C-X-C motif chemokine ligand 1，CXCL1）、CCL2 和黏附分子，誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞和IMos在主動(dòng)脈根部和冠狀動(dòng)脈中的進(jìn)一步募集和積聚，從而引發(fā)血管炎癥。在CADS和CAWS模型基礎(chǔ)上，Oharaseki等[34]發(fā)現(xiàn)，在白色念珠菌細(xì)胞壁多糖誘導(dǎo)的KD樣血管炎模型中，野生小鼠和Dectin-1-/-小鼠血管炎發(fā)生率為100%，而Dectin-2-/-小鼠均未發(fā)生血管炎，這證實(shí)Dectin-2對(duì)α-甘露聚糖的識(shí)別是白色念珠菌細(xì)胞壁多糖誘導(dǎo)的KD樣小鼠血管炎發(fā)病的關(guān)鍵。

Nakamura等[35]研究了IL-10在CAWS誘導(dǎo)模型中的作用，發(fā)現(xiàn)GM-CSF可通過(guò)上調(diào)Dectin-2增加巨噬細(xì)胞對(duì)CAWS的敏感性。IL-10不能抑制Dectin-2的表達(dá)，但可抑制下游細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases，ERK）-1/2 的 激 活 和 IL-6、TNF-α等炎癥因子的表達(dá)，減少Dectin-2+CD11b+炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，減輕小鼠主動(dòng)脈根部和冠狀動(dòng)脈中的血管炎癥和纖維化，改善心臟功能障礙和致死性，表明IL-10在KD患者治療中具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

2.4 克柔念珠菌細(xì)胞壁甘露糖蛋白（mannoprotein，MN）部分誘導(dǎo)的KD模型 基于CADS和CAWS模型的研究基礎(chǔ)，2020年，Yanai等[36]將克柔念珠菌菌株放在天然或化學(xué)合成培養(yǎng)基中培養(yǎng)2 d，并提取其MN部分連續(xù)5 d注射入小鼠腹腔，發(fā)現(xiàn)克柔念珠菌MN部分可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生血管炎，且菌株MN部分在天然培養(yǎng)基中含量更高、活性更強(qiáng)，誘導(dǎo)的冠狀動(dòng)脈炎更嚴(yán)重。

對(duì)克柔念珠菌結(jié)構(gòu)進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，其主鏈為α-1,2-、α-1,3-、α-1,6-甘露糖鏈。Dectin-2 是 α-甘露糖特異性凝集素受體，克柔念珠菌MN部分對(duì)Dectin-2有強(qiáng)烈反應(yīng)性，表明克柔念珠菌MN部分存在大量的α-甘露糖結(jié)構(gòu)，與CAWS模型相似，其誘導(dǎo)的血管炎也是通過(guò)Dectin-2信號(hào)介導(dǎo)的[36-37]。

在27℃的中性pH下制備的CAWS因存在大量β-1,2-甘露糖殘基而不會(huì)誘發(fā)小鼠血管炎[38]。與CAWS相似，在克柔念珠菌MN部分的核磁共振譜中也沒(méi)有檢測(cè)到β-連接甘露糖信號(hào)，進(jìn)一步證實(shí)了克柔念珠菌細(xì)胞壁MN部分誘導(dǎo)KD血管炎模型的可靠性[36-37]。

Tanaka等[37]比較了不同念珠菌MN部分誘導(dǎo)的DBA/2小鼠血管炎發(fā)生情況，發(fā)現(xiàn)各種念珠菌MN部分誘導(dǎo)小鼠在第200天的死亡率分別為：克柔念珠菌（100%）、白色念珠菌（84%）、都柏林念珠菌（47%）、近平滑念珠菌（44%）、光滑念珠菌（32%）、吉利蒙念珠菌（20%）和熱帶念珠菌（20%），這表明MN部分誘導(dǎo)的KD血管炎強(qiáng)烈依賴于念珠菌的種類(lèi)和菌株。

2.5 Nod1配體誘導(dǎo)的KD模型 Nod1是一種胞內(nèi)模式識(shí)別受體，可參與許多疾病的炎癥反應(yīng)，在天然免疫中發(fā)揮重要作用[39]。

2011年，Nishio等[39]通過(guò)研究表明，皮下注射或口服FK565（一種合成的Nod1配體）可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生冠狀動(dòng)脈炎，且脂多糖可增強(qiáng)FK565的誘導(dǎo)作用。其冠狀動(dòng)脈炎組織病理學(xué)特征為全動(dòng)脈炎、彌漫性炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，主要為中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，并有冠狀動(dòng)脈彈性纖維斷裂，不伴有纖維素樣壞死，與KD急性期相似。而Nod1-/-小鼠不能誘導(dǎo)動(dòng)脈炎的發(fā)生。

在此實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，Ohashi等[40]對(duì)Nod1配體和CAWS兩種誘導(dǎo)模型進(jìn)行了比較，他們認(rèn)為，與CAWS誘導(dǎo)模型中的主動(dòng)脈根部、主動(dòng)脈瓣和冠狀動(dòng)脈的彌漫性炎癥病變不同，Nod1配體誘導(dǎo)模型主要累及雙側(cè)冠狀動(dòng)脈，具有位點(diǎn)特異性，與KD急性期的冠狀動(dòng)脈炎更為相似，因此Nod1配體誘導(dǎo)的動(dòng)脈炎模型可能更適于分析KD患者心血管損傷的組織病理學(xué)變化，但值得注意的是，與臨床KD患者不同，Nod1配體誘導(dǎo)小鼠并不會(huì)導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈瘤的發(fā)生。與CAWS組觀察到的IL-6、IL-13、粒細(xì)胞集落刺激因子（granulocytecolony-stimulating factor，G-CSF）、IFN-γ 和 TNF-α 濃度升高不同，Nod1配體組主要表現(xiàn)為IL-1α、IL-1β、IL-5等炎癥因子濃度升高，且IL-1β水平似乎與FK565誘導(dǎo)小鼠的炎癥區(qū)域呈正相關(guān)。因此CAWS組和Nod1配體組動(dòng)脈炎的組織病理學(xué)差異可能是由于其不同的細(xì)胞因子表達(dá)譜。

心臟CD11c+巨噬細(xì)胞的積聚在Nod1配體誘導(dǎo)的小鼠急性冠狀動(dòng)脈炎中起核心作用[41]。嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷小鼠可出現(xiàn)較弱但明顯的動(dòng)脈炎，表明獲得性免疫部分也參與了純Nod1配體引起的炎癥反應(yīng)[39]。在注射FK565后，脂多糖誘導(dǎo)的RAG-1-/-小鼠仍會(huì)發(fā)生大動(dòng)脈炎和冠狀動(dòng)脈炎，因此T細(xì)胞、B細(xì)胞和自然殺傷T細(xì)胞在此模型中似乎是非必要的[41]。

2.6 卡介苗（bacillus calmette-guérin，BCG）誘導(dǎo)的 KD模型 BCG接種部位的皮膚損傷是KD患者早期特異性臨床癥狀之一，約30%～50%的KD患者存在BCG接種部位的局部炎癥再活化[42]。

2007年，Nakamura等[43]向C57BL/6J小鼠皮內(nèi)接種BCG，4周后再次接種胞內(nèi)分枝桿菌粗提取物（crude extract from Mycobacterium intracellulare，cMI）成功誘導(dǎo)了小鼠的冠狀動(dòng)脈炎，動(dòng)脈壁周?chē)袉魏思?xì)胞浸潤(rùn)，而僅接種cMI或BCG的小鼠未發(fā)生冠狀動(dòng)脈炎。同樣，靜脈注射過(guò)氧化還原酶Ⅱ抗體也可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生冠狀動(dòng)脈炎，但也僅限于事先接種過(guò)BCG后。

隨后，Chun等[44]證實(shí)，腹部皮內(nèi)注射兩次（間隔4周）BCG可誘導(dǎo)程序性死亡（programmed death，PD）-1-/-小鼠產(chǎn)生KD樣特征，包括持續(xù)發(fā)熱5 d以上、腳底紅斑腫脹、尾部皮膚脫屑和膽囊積水，冠狀動(dòng)脈炎癥細(xì)胞聚集和內(nèi)膜增生、動(dòng)脈壁水腫，也可觀察到肝動(dòng)脈、腎動(dòng)脈和膽管等器官的炎癥反應(yīng)。同樣，腹部皮內(nèi)注射兩次（間隔 4周）熱休克蛋白（heat shock protein，HSP）65也可誘導(dǎo)PD-1-/-小鼠產(chǎn)生與用BCG誘導(dǎo)相似的KD樣特征，表明PD-1基因可能是KD的易感基因之一，含有HSP65結(jié)構(gòu)的抗原可能是KD的觸發(fā)因素。

2.7 牛血清白蛋白誘導(dǎo)的KD模型 2020年，齊雙輝等[45]通過(guò)間斷性腹腔注射10%牛血清白蛋白溶液成功誘導(dǎo)了BALB/C小鼠的KD冠狀動(dòng)脈損傷，其組織學(xué)特點(diǎn)為動(dòng)脈內(nèi)膜明顯增厚、水腫及變性，內(nèi)皮細(xì)胞排列紊亂，胞質(zhì)內(nèi)大量小空泡，周?chē)仔约?xì)胞浸潤(rùn)。

3 小結(jié)

近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者采用多種誘導(dǎo)劑構(gòu)建了KD小鼠模型，其中誘導(dǎo)劑以LCWE、CAWS、白色念珠菌提取物等為主，研究方向多在探討各種小鼠模型是否能模擬KD病理過(guò)程。雖然各種誘導(dǎo)模型僅能模仿KD的部分臨床特征，目前也尚未建立一種公認(rèn)可靠的KD小鼠模型，但在KD病因尚不十分清楚、發(fā)病機(jī)制尚未完全明確的背景下，小鼠模型仍然是研究人類(lèi)KD病因、病理和治療等方面的寶貴工具，通過(guò)動(dòng)物模型研究可極大加強(qiáng)人們對(duì)KD病理學(xué)的理解，推動(dòng)導(dǎo)致心血管并發(fā)癥的細(xì)胞和分子免疫機(jī)制的研究，為KD的治療方法提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。