常欣魁,賀靜,宋揚(yáng)△,鄭光輝,見碩（.北京大學(xué)口腔醫(yī)院,北京 0008;.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院,北京 00070;.北京市海淀區(qū)婦幼保健院,北京 00080）

念珠菌作為一類寄生在人體各個部位的真菌，口腔是其常見寄生部位，對維持口腔中的菌群平衡起到重要的作用，屬于正常菌群[1]?？谇荒钪榫腥緦儆谝环N真菌感染，主要表現(xiàn)為口干、發(fā)黏、口腔黏膜疼痛、有燒灼感、味覺減退等癥狀，如果不能及時采取有效的治療，不僅會加重癥狀，還會有誘發(fā)癌變的風(fēng)險，為患者的身體、心理上帶來巨大的影響[2]。隨著廣譜抗菌素、糖皮質(zhì)激素等免疫抑制劑的應(yīng)用，器官移植及化學(xué)治療的廣泛開展以及HIV的流行，口腔念珠菌病的患病率呈現(xiàn)不斷攀升的趨勢[3]。雖然白色念珠菌仍然是口腔念珠菌病最常見的致病菌，但非白色念珠菌種，尤其是少見念珠菌近年來存在上升的趨勢[4]。本研究旨在探究目前歸類為少見念珠菌分布情況，為口腔念珠菌病的臨床治療提供更多證據(jù)和幫助。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2021年7-10月北京大學(xué)口腔醫(yī)院黏膜科就診且開具唾液真菌培養(yǎng)鑒定檢查項(xiàng)目的患者共1376人。對他們的培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行篩選，選取分離培養(yǎng)結(jié)果中含有少見念珠菌的樣本作為本實(shí)驗(yàn)研究對象。

1.2 樣本采集菌種 患者留取足量唾液樣本至帶蓋無菌容器中，用一次性吸管轉(zhuǎn)種0.5ml患者樣本至沙保羅培養(yǎng)基中，在30℃恒溫孵箱中培養(yǎng)48小時。有念珠菌生長的培養(yǎng)基的樣本作為陽性樣本，然后把該平皿上的念珠菌轉(zhuǎn)種至科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基中，于35℃恒溫孵箱中培養(yǎng)48小時后根據(jù)顏色篩選出除白色念珠菌、熱帶念珠菌、克柔念珠菌和光滑念珠菌以外的其他少見念珠菌。

1.3 鑒定 將分離所得的全部少見念珠菌分純，使用法國生物梅里埃公司的API 20C進(jìn)行生化反應(yīng)鑒定，對于鑒定率不高的個別真菌選擇用全自動快速微生物質(zhì)譜檢測系統(tǒng)VITEK MS進(jìn)行補(bǔ)充鑒定，所得鑒定結(jié)果概率為99.9%認(rèn)為可以接受。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 將所得全部少見念珠菌的鑒定及藥敏結(jié)果錄入Excel表格中進(jìn)行匯總。分別計(jì)算每種念珠菌占少見念珠菌整體的百分比。

2 結(jié)果

在2021年7-10月內(nèi)從1376位患者體內(nèi)分離出的117株少見念珠菌中，近平滑念珠菌60株，占51.28%；季也蒙念珠菌25株，占21.37%；葡萄牙念珠菌8株，占6.84%；平常念珠菌2株，占1.71%；海洋酵母菌4株，占3.42%；無名念珠菌1株，占0.85%；變隱念珠菌5株，占4.27%；挪威念珠菌1株，占0.85%；粗狀念珠菌2株，占1.71%；朗比可念珠菌1株，占0.85%；蜜蜂克勒克酵母菌1株，占0.85%；木蘭念珠菌1株，占0.85%；檸檬克勒克酵母菌3株，占2.56%；擬平滑念珠菌1株，占0.85%；勞倫氏念珠菌1株，占0.85%；霍氏念珠菌1株，占0.85%。統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1。

表1 少見念珠菌結(jié)果分布

3 結(jié)論

通過結(jié)果可以看到，在2021年7-10月內(nèi)1376位患者體內(nèi)分離出的117株少見念珠菌中，分離比例最高的前三位依次是近平滑念珠菌、季也蒙念珠菌和葡萄牙念珠菌。其中近平滑念珠菌最多，占全部少見念珠菌的51.28%，季也蒙念珠菌其次，占21.37%，葡萄牙念珠菌第三，占6.84%。此外包括平常念珠菌在內(nèi)的其他13種少見念珠菌雖也有檢出，但它們分布比例較為平均且顯著低于前三位少見念珠菌，因此不作為分析討論的重點(diǎn)。

4 討論

念珠菌屬廣泛存在于自然環(huán)境、體表、消化道及口腔黏膜上，是重要的條件致病菌[5]?？谇荒钪榫“Z口瘡、念珠菌口角炎、急慢性萎縮性口炎、慢性增生性念珠菌病等臨床類型，以鵝口瘡最為多見，易感者包含艾滋?。ˋIDS）、惡性腫瘤、長期廣譜抗細(xì)菌藥物或糖皮質(zhì)激素應(yīng)用等免疫功能低下的群體，同時經(jīng)常伴有消化道念珠菌病和播散性念珠菌病[6]?？谇荒钪榫腥静粌H會造成黏膜病變和口腔癌前病變，還會造成消化道感染，進(jìn)而有引發(fā)胃癌的風(fēng)險[7]。根據(jù)既往研究，自2015年-2019年，在我院分離口腔念珠菌中，雖然分離率最高的種類依然是白色念珠菌和熱帶念珠菌，但是其他少見念珠菌比例呈現(xiàn)逐年上升的趨勢，且目前國內(nèi)外對于這些少見念珠菌對人體尤其是口腔部位的影響研究較少，所以對于少見念珠菌的分離鑒定探究就顯得越來越具有臨床意義[4]。此外在先前的研究中，通過對2015年-2019年來我院黏膜科就診的全部共27162例口腔念珠菌病患者唾液中的真菌種類和菌量的分離統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，白色念珠菌、熱帶念珠菌、光滑念珠菌感染的樣本中均以菌落數(shù)≥200CFU/mL的菌株為主，而克柔念珠菌、其他念珠菌菌落數(shù)≥200CFU/mL的菌株比例低于白念珠菌、熱帶念珠菌和光滑念珠菌，而菌落數(shù)≤30CFU/mL的菌株比例明顯高于白念珠菌、熱帶念珠菌和光滑念珠菌[4]。在對所有口腔念珠菌病患者的觀察中發(fā)現(xiàn)，被少見念珠菌感染的患者往往只需要更少的菌量，就可出現(xiàn)與大量非少見念珠菌感染相近似的臨床癥狀，而對于非少見念珠菌感染的患者，往往只有當(dāng)菌量達(dá)到很大的時候才會出現(xiàn)臨床表現(xiàn)，還有部分患者會處于白色念珠菌的無癥狀攜帶狀態(tài)，這些都側(cè)面反映了少見念珠菌在致病性方面要顯著高于其他種類的念珠菌。

在臨床上，白色念珠菌是口腔念珠菌病的主要致病菌。但是有文獻(xiàn)報道，以近平滑念珠菌和季也蒙念珠菌等少見念珠菌的分離率也在升高[8-9]。由于對于念珠菌所需的鑒定和藥敏結(jié)果時間普遍較長，所以臨床通常會在得到分離鑒定結(jié)果前先進(jìn)行經(jīng)驗(yàn)用藥治療。對于最常見的白色念珠菌的常規(guī)治療一般首選氟康唑或伏立康唑，既往報道表明白色念珠菌對這兩種藥的敏感率分別為99%和98.8%[10,12]。根據(jù)其他學(xué)者的研究，筆者此次重點(diǎn)研究的少見念珠菌的耐藥率要明顯高于最常見的白色念珠菌。在本次研究中分離率最高的近平滑念珠菌，對于氟康唑和伏立康唑的耐藥率分別為6.4%和2.7%，其中氟康唑耐藥菌株中41.6%對伏立康唑交叉耐藥，這可能由于唑類藥物作用靶酶編碼基因ERG11發(fā)生突變導(dǎo)致[11]。分離率第二的季也蒙念珠菌對于氟康唑和伏立康唑的耐藥率分別為24.3%和8.1%，交叉耐藥率為8.1%[12]。鑒于少見念珠菌的耐藥率均高于白色念珠菌，因此分離并鑒定少見念珠菌對于臨床抗菌藥物的選擇具有積極指導(dǎo)意義。今后下一步研究方向?qū)⑦M(jìn)一步擴(kuò)大樣本數(shù)量進(jìn)行分析，并對于分離菌種進(jìn)行藥敏分析，進(jìn)而豐富研究結(jié)果。