熊 杰，蔣成偉，張昕彤，蒲楊柳，陳富忠，胡生富，魏春梅

(1.四川省攀枝花市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 攀枝花 617000；2.四川省攀枝花市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，四川 攀枝花 617000；3.河南省武陟縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，河南 武陟 454950)

豬瘟(Classical swine fever,CSF)是由豬瘟病毒引起的，急性、烈性和高度接觸性傳染病，以高熱、出血和白細(xì)胞缺損為主要特征[1]。臨床表現(xiàn)有：病豬體溫高達(dá)42 ℃，皮膚發(fā)紺，耳、鼻、腋下出現(xiàn)明顯紫斑[2]，結(jié)膜發(fā)炎；部分豬發(fā)生嘔吐，初期便秘，后期腹瀉，糞便帶粘液或血液；懷孕母豬可出現(xiàn)流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、弱胎和木乃伊胎。典型病理特征有全身性出血，“麻雀蛋樣”腎(雀斑腎)，脾臟出血性梗死灶，回腸末端及盲腸出現(xiàn)紐扣狀壞死、潰瘍，纖維素性肺炎等。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將其列入必須上報(bào)的動(dòng)物疫病目錄，我國(guó)將其列為一類動(dòng)物疫病，是《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃(2012-2020年)》明確的優(yōu)先防治病種[3]。本文就2019年2月某養(yǎng)豬場(chǎng)發(fā)生豬瘟的發(fā)病情況、臨床癥狀、病理變化、實(shí)驗(yàn)室診斷提出思考和分析。

1 發(fā)病情況及臨床癥狀

攀枝花某養(yǎng)豬場(chǎng)，存欄生豬68頭；2018年12月-2019年1月，陸續(xù)從場(chǎng)外購(gòu)入仔豬40頭。2019年2月初，豬陸續(xù)發(fā)病，出現(xiàn)發(fā)熱、體表發(fā)紺、呼吸困難等癥狀，10天內(nèi)死亡24頭，死亡率達(dá)22.22%。

2 病理變化

對(duì)瀕臨死亡的病豬進(jìn)行解剖，發(fā)現(xiàn)頜下淋巴結(jié)水腫，腹股溝淋巴結(jié)水腫出血，腸系膜淋巴結(jié)水腫，肺心葉發(fā)生胰變，腎臟表面出現(xiàn)針尖狀壞死點(diǎn)，回腸、大腸粘膜面出現(xiàn)康麩樣潰瘍面，回盲瓣出現(xiàn)鈕扣狀潰瘍，胃粘膜出血、壞死，小腸和膀胱內(nèi)膜出血。主要病理變化見(jiàn)圖1-圖4。

圖1 皮膚發(fā)紺

圖2 肺臟胰變

圖3 大腸紐扣狀潰瘍、壞死

圖4 淋巴結(jié)出血、腫大

對(duì)臨床癥狀和病理變化分析，初診為豬瘟或非洲豬瘟病毒感染；現(xiàn)場(chǎng)采集肝、腎、淋巴結(jié)、脾、肺、全血，實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行熒光定量RT-PCR和熒光定量PCR檢測(cè)。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 樣品處理及核酸提取

將現(xiàn)場(chǎng)采集的肝、腎、淋巴結(jié)等組織研磨勻漿后，8000 rpm離心2 min取上清液，按照核酸提取說(shuō)明書(shū)，采用吸附法，提取組織DNA和RNA。

3.2 熒光定量RT-PCR和熒光定量PCR檢測(cè)

對(duì)提取的RNA，按照北京世紀(jì)元亨豬瘟病毒通用型實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒(生產(chǎn)批號(hào)：CSF20181128P)說(shuō)明書(shū)，進(jìn)行豬瘟病毒(CSFV)檢測(cè)；將提取的DNA，按照北京世紀(jì)元亨非洲豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒(生產(chǎn)批號(hào)：ASF20181005P)說(shuō)明書(shū)，進(jìn)行非洲豬瘟病毒(ASF)檢測(cè)。

4 結(jié)果

4.1 豬瘟病毒(CSFV)檢測(cè)結(jié)果

陽(yáng)性對(duì)照CT值≤30，出現(xiàn)特異性擴(kuò)增曲線，陰性對(duì)照無(wú)CT值并且無(wú)特異性擴(kuò)增曲線，實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立。所有被檢樣品CT值≤30并出現(xiàn)特異性擴(kuò)增曲線，表明所有樣品為CSFV陽(yáng)性(圖5、表1)。

4.2 非洲豬瘟病毒(ASF)檢測(cè)結(jié)果

陽(yáng)性對(duì)照CT值<30并出現(xiàn)特異性擴(kuò)增曲線，陰性對(duì)照無(wú)CT值并且無(wú)特異性擴(kuò)增曲線，實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立。所有被檢樣品無(wú)CT值且無(wú)特異性擴(kuò)增曲線，表明所有樣品ASF陰性(圖6、表1)

圖5 豬瘟病毒(CSFV)實(shí)時(shí)熒光RT-PCR擴(kuò)增曲線

圖6 非洲豬瘟病毒(ASF)實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增曲線

表1 檢測(cè)結(jié)果

5 討論與結(jié)論

我國(guó)于2007年-2017年將豬瘟免疫列入強(qiáng)制免疫計(jì)劃[4]，經(jīng)過(guò)10年的強(qiáng)制免疫，全國(guó)豬瘟疫情得到了有效控制。丁亮等2018年對(duì)全國(guó)21個(gè)豬場(chǎng)63份樣品進(jìn)行豬瘟抗原檢測(cè)，樣品陽(yáng)性率為6.35%[5]；楊漢春等2019年采用RT-PCR方法對(duì)全國(guó)252份臨床病料進(jìn)行檢測(cè)，豬瘟病毒核酸陽(yáng)性檢出率為3.97%，與2018年(9.42%)相比，明顯下降[6]；王賽賽牧通網(wǎng)數(shù)據(jù)顯示，2019年檢測(cè)了全國(guó)32個(gè)豬場(chǎng)共70份病料，豬瘟病毒核酸陽(yáng)性檢出率為5.7%[7]。這些資料表明，我國(guó)近年生豬養(yǎng)殖場(chǎng)豬瘟病毒檢出率較低，但仍有部分豬場(chǎng)存在發(fā)生豬瘟疫情的風(fēng)險(xiǎn)。

豬瘟易與其他疫病混合感染，并且與非洲豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病、豬丹毒等疫病相似，從臨床癥狀、解剖病變很難區(qū)別，必須采取實(shí)驗(yàn)室診斷方法進(jìn)行鑒別診斷。目前豬瘟的實(shí)驗(yàn)室診斷方法主要有病毒分離鑒定、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、膠體金免疫層析試驗(yàn)、環(huán)介導(dǎo)等溫技術(shù)(LAMP)、熒光抗體試驗(yàn)(FAT)、RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光RT-PCR和微滴式數(shù)字PCR等方法[8,9]，實(shí)時(shí)熒光RT-PCR方法用時(shí)短、特異性強(qiáng)、靈敏度高、是目前普遍采用的豬瘟病毒快速診斷方法。目前市場(chǎng)上適用于豬病的熒光定量檢測(cè)試劑盒種類齊全、價(jià)格適中，并且有同時(shí)完成豬瘟和高致病性豬藍(lán)耳病等多種常見(jiàn)豬病病原檢測(cè)的多重?zé)晒釸T-RCR檢測(cè)試劑盒，能有效縮減檢測(cè)時(shí)間，適用縣級(jí)以上獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室。另外，各地政府應(yīng)加大對(duì)基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室設(shè)施設(shè)備的投入和技術(shù)人員的培養(yǎng)，一旦發(fā)現(xiàn)疫情,能第一時(shí)間做出診斷并采取行動(dòng)，大大降低疫情擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)，將農(nóng)戶和養(yǎng)殖場(chǎng)的損失降到最低。