羅娜 王雪 黃麗佳 陳建雯 馮國華 郭亞東 鄧亮

摘要：目的?建立梔子中綠原酸含量的測定方法。方法?采用紫外分光光度法，以60%乙醇為空白，在波長329nm處測定綠原酸含量。結(jié)果?綠原酸在（2.5-15）μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（r=0.9993），回歸方程y=0.0457x+0.0005，平均加樣回收率為98.1%，RSD為2.7%。結(jié)論?紫外分光光度法操作簡便、準確、重復(fù)性好，可作為梔子中綠原酸含量測定的方法。

關(guān)鍵詞：梔子;綠原酸;紫外分光光度法，含量測定

中圖分類號：R927.2?文獻標志碼：A?文章編號：1007-2349（2020）06-0067-03

Determination of Chlorogenic Acid in Gardenia by Ultraviolet Spectrophotometry

LUO Na1， WANG Xue1， HUANG Li-jia1， CHEN Jian-wen2， FENG Guo-hua3， GUO Ya-dong1， DENG Liang1

（1.?School of Pharmacy， Kunming Medical University and Key Laboratory of Natural Medicineand Pharmacology of Yunnan Province， Kunming 650500， China; 2.?Honghe Vocational College of Health， Mengzi 661101， China; 3.?Biomedical Engineering Center， Kunming Medical University， Kunming 650500， China）

【Abstract】Objective： To establish a method for determining the content of chlorogenic acid in gardenia.?Methods： Ultraviolet spectrophotometry was used with 60% ethanol as the blank to measure the chlorogenic acid content at a wavelength of 329 nm.?Results： Chlorogenic acid had a good linear relationship （r=0.9993） in the range of 2.5 to15 μg/mL.?Regression equation was y=0.0457x+0.0005 and the average sample recovery rate was 98.1%， and RSD was 2.7%.?Conclusion： Ultraviolet spectrophotometry is simple and accurate with good reproducibility and can be used as a method for the determination of chlorogenic acid in gardenia.

【Key words】gardenia， chlorogenic acid， ultraviolet spectrophotometry， content determination

梔子是茜草科植物山梔Gardenia jasminoides Ellis 的果實，性苦寒，具有保肝，降血糖，瀉火除煩、清熱利尿、涼血解毒之功效，梔子屬植物中含有多種化學(xué)成分，如黃酮類、環(huán)烯醚萜類、三萜類、有機酸酯類、西紅花苷類、揮發(fā)油等[1-2]。中國藥典對梔子藥材只測定梔子苷的含量[3]，綠原酸是梔子中的有效成分之一，其含量較高，具有抗氧化、清除自由基、降血脂等活性。文獻報道測定梔子中綠原酸含量的方法主要是高效液相色譜[4-5]，少數(shù)采用紫外分光光度法測定其含量[6]，本文用紫外分光光度法測定了不同產(chǎn)地的梔子中綠原酸含量，并進行了系統(tǒng)的樣品提取方法學(xué)的研究。

1?儀器與試藥

1.1?儀器和試劑?紫外一可見分光光度計（TU1810，北京普析），超聲提取器（SK3200H，上海儀器制造廠），CP225D電子天平（德國Sartorius公司）。

綠原酸標準品（純度≥98%，中國食品藥品檢驗研究院），水為純凈水，其他試劑為分析純。

1.2?樣品?梔子樣品購自當(dāng)?shù)蒯t(yī)藥公司，經(jīng)粉碎后過100目篩。

2?方法與結(jié)果

2.1?溶液的制備

2.1.1?對照品溶液的制備?精密稱取綠原酸對照品7.5 mg于25 mL容量瓶中，加60%乙醇制成300μg/mL 的對照品溶液。

2.1.2?供試品溶液的制備?稱取干燥梔子粉末各1.0 g，放入錐形瓶中，加入60%乙醇25 mL，超聲處理25 min，放冷，過濾，濾液全部轉(zhuǎn)移于100 mL容量瓶中定容，即得供試品溶液。

2.2?吸收波長的選擇及標準曲線制作?用60%乙醇分別配制梔子供試品溶液和對照品溶液。用紫外分光光度計在波長為（200-400）nm進行掃描，結(jié)果見圖1。綠原酸在329 nm波長處有最大吸收。

分別吸取不同體積的300 μg/mL 的對照品溶液用60%乙醇稀釋后得到濃度為2.5，5，7.5，10，12.5，15 μg/mL的系列對照品溶液，以60%乙醇為空白，在329 nm波長處測定吸光度，以綠原酸濃度C（μg/mL）為橫坐標x，吸光度A為縱坐標y作圖，繪制標準曲線，得回歸方程：y=0.0475x-0.0075，r=0.9993，表明在2.5-15 μg/mL范圍內(nèi)，綠原酸的吸光度與濃度之間有良好的線性關(guān)系。

2.3?單因素實驗?影響提取效率的因素主要有乙醇濃度、提取時間、料液比等。

2.3.1?乙醇濃度對梔子中綠原酸提取率的影響?稱取3份梔子粉末各1.0 g，置于3個錐形瓶中，分別加入25 mL的50%、60%、70%的乙醇，超聲提取25 min，過濾，用60%乙醇稀釋定容至100 mL，適當(dāng)稀釋后在329 nm處測定吸光度，用回歸方程計算綠原酸的提取率，用50%、60%、70%的乙醇所得的綠原酸的提取率分別為1.91%，2.01%和1.92%，可見60%乙醇的提取效果最好。

2.3.2?提取時間對梔子中綠原酸提取率的影響?稱取3份梔子粉末各1.0 g，置于3個錐形瓶中，各加入25 mL的60%的乙醇，分別超聲提取15、25和35 min，過濾，用60%乙醇稀釋定容至100 mL，適當(dāng)稀釋后在329 nm處測定吸光度，用回歸方程計算綠原酸的提取率，測得提取時間為15 mim、25 mim和35 mim時綠原酸的提取率分別為2.16%、2.01%和2.14%，可見15 min的超聲時間提取效果最好。

2.3.3?料液比對梔子中綠原酸提取得率的影響?稱取3份梔子粉末各1.00 g，置于3個錐形瓶中，分別按1：20、1：25、1：30的料液比加入60%乙醇，超聲提取25 min，過濾，用60%乙醇定容至100 mL，適當(dāng)稀釋后在329 nm處測定吸光度，用回歸方程計算綠原酸的提取率，當(dāng)料液比為1：20、1：25和1：30時，綠原酸的提取率分別為1.91%、2.03%和2.01%，可見1：25 的料液比提取效果最好。

2.4?正交試驗設(shè)計

2.4.1?正交試驗的設(shè)計?在提取單因素實驗的基礎(chǔ)上，采用正交實驗優(yōu)化提取條件。以乙醇濃度、提取時間、料液比3個因素作為考察對象，每個因素選用3個水平。選用L9（34）表，安排實驗優(yōu)化工藝條件，因素水平見表1。

2.4.2?正交試驗結(jié)果及分析?試驗結(jié)果及分析見表2 和表3。從表2可以看出，最佳工藝組合是 A3B3C2，即乙醇濃度70%，提取時間25 min，料液比1：25。對極差貢獻最大的是A因素，其次是C因素，B因素影響最小。

從方差分析的結(jié)果看，A、B、C三個因素對提取率沒有顯著性差異。

2.5?精密度試驗?取對照品溶液，在329nm波長處測定吸光度值，重復(fù)6 次，測得RSD為1.2%。

2.6?重復(fù)性實驗?精密稱取6份梔子粉末各0.50 g，按2.1.2項下供試品溶液的制備方法平行制備6份供試品溶液，329nm測定吸光度，測得的RSD為2.3%。

2.7?加樣回收率試驗?精密稱取已經(jīng)測定含量的梔子粉末6份各0.5 g，放入錐形瓶中，分別加入60%乙醇25 mL，各加入濃度為300 μg/mL對照品溶液4 mL，超聲處理25 min，放冷，過濾，全部轉(zhuǎn)移于100 mL容量瓶中定容，適當(dāng)稀釋后，于329 nm測定吸光度值。計算平均加樣回收率為98.1%，RSD為2.7%。

2.9?綠原酸含量測定?取不同產(chǎn)地的梔子樣品，用70%乙醇超聲提取，過濾，稀釋后于329 nm測定吸光度，由回歸方程計算樣品中綠原酸的含量，結(jié)果：江西1.64%，云南1.54%，貴州1.75%，安徽1.89%，河南2.16%，廣西1，57%，四川1.10%。

3?討論

3.1?提取方法的考察?以乙醇為溶劑，比較熱回流、超聲、浸泡等方法進行提取，以梔子中綠原酸的提取量為考察指標，結(jié)果表明超聲提取法簡便，快速，效果好。

3.2?通過正交實驗考察了超聲提取時乙醇濃度，提取時間和料液比的影響，最佳提取條件是70%乙醇濃度，提取時間25 min時，料液比1：25。

3.3?綠原酸是梔子中的重要活性成分，測定其含量可用于對梔子藥材的質(zhì)量控制，用紫外分光光度法來測定綠原酸的含量，該方法簡便、準確、重復(fù)性好.可作為梔子中綠原酸含量的測定方法。

參考文獻：

[1]任治軍，張立明，何開澤.梔子主要成分的提取工藝及藥理研究進展[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2005，17（6）：831-836.

[2]于洋，高昊，戴毅，等.梔子屬植物化學(xué)成分的研究進展[J].中草藥，2010，41（1）：148-153.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典.一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：248.

[4]關(guān)皎，朱鶴云，李菁，等.UFLC 法同時測定梔子中4種活性成分的含量，中藥新藥與臨床藥理[J].2017，28（2）：219-222.

[5]王先敏，曹馨元，毛婷，等.HPLC 同時測定梔子中的4種成分[J].華西藥學(xué)雜志，2017，32（4）∶436-438.

[6]陳亮，林培玲，丁春花，等.梔子綠原酸含量的紫外-分光光度法測定[J].福建中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2013，23（5）：36-37.

（收稿日期：2020-01-13）