張樂

摘 要： 為建立一種阿苯達(dá)唑原料藥含量測(cè)定的高效液相方法，采用方法：色譜條件：Agilent ODS C18（5μm，3.0×150mm）色譜柱;以甲醇為流動(dòng)相A;磷酸二氫鈉水溶液（11g→800ml）為流動(dòng)相B，甲醇—磷酸二氫鈉水溶液=65：35時(shí)，流速為0.8ml/min，阿苯達(dá)唑?qū)φ掌分鞣灞Ａ魰r(shí)間為3.044min;分離度良好，掃描波長(zhǎng)為292nm，柱溫：30℃，結(jié)果阿苯達(dá)唑原料及溶劑峰均得到良好分離。阿苯達(dá)唑在2μg/ml～1200μg/ml濃度范圍內(nèi)線性良好（R2=0.99999，n=6），平均回收率98.0%，RSD為0.5%，定量限為0.1μg/ml，并得出結(jié)論：高效液相色譜法靈敏、準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，可用于阿苯達(dá)唑原料藥含量的測(cè)定及質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞： 阿苯達(dá)唑 高效液相色譜法 紫外分光光度法 含量測(cè)定

阿苯達(dá)唑（Abendazole）是一種抗寄生蟲的廣譜藥物，對(duì)阿苯達(dá)唑線蟲、棘球蚴、絳蟲、吸蟲等具有較好的驅(qū)除作用[1-2]，在獸醫(yī)臨床廣泛應(yīng)用。我們通常會(huì)采用高氯酸滴定法和紫外分光光度法來(lái)測(cè)定阿苯達(dá)唑原料粉的含量，這兩種方法在《中華人民共和國(guó)獸藥典》[3]中都有提到，但高氯酸滴定法和紫外分光光度法[4]受環(huán)境因素的影響較大，使得結(jié)果的專屬性較差，準(zhǔn)確度偏低。并且在獸藥廠生產(chǎn)時(shí)可以看到，有些不良商家以次充好，僅僅用滴定法或紫外的方法都不能準(zhǔn)確、有效地檢測(cè)原料含量，所以本文利用高效液相色譜法[5-6]，建立一種檢測(cè)阿苯達(dá)唑原料藥的方法。本文通過(guò)實(shí)際應(yīng)用表明該方法可以準(zhǔn)確快速地測(cè)定阿苯達(dá)唑原料藥的含量，并且更有效地排除其他外界因素的影響，更好地通過(guò)含量測(cè)定控制阿苯達(dá)唑原料藥的質(zhì)量。本方法專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性高，可以為阿苯達(dá)唑原料藥含量測(cè)定提供新的參考。

1.材料

1.1試劑。阿苯達(dá)唑?qū)φ掌罚ㄖ袊?guó)藥品生物制品檢定所）;阿苯達(dá)唑原料（連云港市亞輝醫(yī)藥化工有限公司，批號(hào)：9011237）;甲醇，色譜級(jí);磷酸二氫鈉;高氯酸，分析純;水，自制超純水。

1.2儀器。LC-20A島津高效液相色譜儀;Agilent ODS C18（5μm，3.0×150mm）色譜柱;FA1004型電子天平;μV-5500PC型紫外可見光光度計(jì);DHG-9030A電熱鼓風(fēng)干燥箱。

2.方法與結(jié)果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。Agilent ODS C18（5μm，3.0×150mm）色譜柱;以甲醇為流動(dòng)相A;磷酸二氫鈉水溶液（11g→800ml）為流動(dòng)相B，通過(guò)篩選不同比例的流動(dòng)相，得出當(dāng)甲醇—磷酸二氫鈉水溶液=65：35時(shí)，流速為0.8ml/min，阿苯達(dá)唑?qū)φ掌分鞣灞Ａ魰r(shí)間為3.044min;拖尾因子1.00;分離度為3.3，表明主峰和雜質(zhì)峰分離度良好，因此選擇其作為最佳的色譜條件;通過(guò)紫外分光光度計(jì)在200nm～400nm處掃描，得出在292nm處有最大紫外吸收，故確定掃描波長(zhǎng)為292nm;柱溫：30℃;進(jìn)樣量：10μl。理論板數(shù)阿苯達(dá)唑峰計(jì)算不低于2000。

2.2對(duì)照品溶液的制備。取阿苯達(dá)唑?qū)φ掌吩陔娮犹炱缴暇_稱定10mg置200ml量瓶中，移取5ml冰乙酸使對(duì)照品溶解，再用流動(dòng)相稀釋至刻度線處，將定容后的對(duì)照品溶液超聲50min，配得0.05mg/ml對(duì)照品溶液。

2.3原料藥供試品溶液的制備。稱取阿苯達(dá)唑供試品原料0.1g，用流動(dòng)相A稀釋制成每1ml中約含1mg的溶液，搖勻。將搖勻定容的溶液超聲10min，精確移取，用流動(dòng)相B稀釋制成1ml中約含0.05mg/ml的溶液。

2.4重復(fù)性實(shí)驗(yàn)。取0.05mg/ml阿苯達(dá)唑?qū)φ掌啡芤?0μl，注入液相色譜儀，檢測(cè)其峰面積，重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)6次，計(jì)算6次峰面積的RSD值為0.4%，表示其重復(fù)性良好。

2.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。取0.05mg/ml阿苯達(dá)唑?qū)φ掌啡芤悍胖?、4、6、8、12、24、36、48h，注入液相色譜儀進(jìn)樣，計(jì)算各時(shí)間的色譜峰面積的RSD值為0.5%，說(shuō)明在常溫放置條件48小時(shí)內(nèi)，溶液穩(wěn)定性良好。

2.6定量限。將2.2項(xiàng)下的對(duì)照品溶液用無(wú)水乙醇逐級(jí)稀釋，信噪比10：1時(shí)，檢出濃度為0.1μg/ml為定量限。

2.7線性及范圍。將2.2項(xiàng)下配制的阿苯達(dá)唑?qū)φ掌啡芤簼舛葹?、2、3、4、5、6、10μg/mL分別進(jìn)樣20μL測(cè)定峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以對(duì)照品峰面積對(duì)其濃度進(jìn)行線性回歸，回歸方程：Y=381274.4237X+5349.3，R2=0.99999，表明2μg/ml-1200μg/ml濃度范圍內(nèi)峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.8加樣回收率。分別精確量取原料品溶液配制的1mg/ml供試品溶液3ml置6個(gè)100ml容量瓶中，再精密量取對(duì)照品溶液配制的1mg/ml對(duì)照品溶液2ml和5ml各3份，分別加入該6個(gè)容量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度。超聲15min，用0.45μl微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣為10μl，測(cè)定各自的阿苯達(dá)唑含量，計(jì)算回收率、平均回收率及RSD值，測(cè)定結(jié)果見表一：

2.9含量測(cè)定。按2.3實(shí)驗(yàn)步驟配制0.10mg/ml供試品溶液，用外標(biāo)法測(cè)定阿苯達(dá)唑含量（高效液相色譜圖見圖一，圖二），并將測(cè)定結(jié)果紫外分光光度法測(cè)定結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。表二數(shù)據(jù)表明，我們所建立的高效液相色譜法能夠準(zhǔn)確測(cè)定阿苯達(dá)唑百分含量。

3.結(jié)果與討論

3.1本文通過(guò)使用紫外分光光度法進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，得出阿苯達(dá)唑原料在292nm處有最大吸收波長(zhǎng)，從而作為最佳波長(zhǎng)掃描范圍。

3.2本文通過(guò)研究不同的流動(dòng)相比例和流速，最終確定在甲醇—磷酸二氫鈉水溶液=60：40時(shí)，流速為0.8ml/min，主峰和有關(guān)物質(zhì)分離度良好，因此選擇其作為最佳的色譜條件。

3.3本文所建立的方法優(yōu)點(diǎn)在于：通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對(duì)照，專屬性強(qiáng)，耗時(shí)短，出峰時(shí)間早，主峰和雜質(zhì)峰分離度良好，可以很清晰地看出有關(guān)物質(zhì)的存在，在獸藥廠進(jìn)行原料藥檢測(cè)時(shí)，可以很好地發(fā)現(xiàn)不良商家的以壞充好的意圖。傳統(tǒng)的滴定分析法和紫外分光光度法，僅說(shuō)明被測(cè)物質(zhì)可能是阿苯達(dá)唑，不能確定就是阿苯達(dá)唑原料，可能其他一類或混合物質(zhì)也有可能具有相同的吸收波長(zhǎng)，專屬性和準(zhǔn)確度都相對(duì)低于高效液相色譜法。本文建立的方法可以更準(zhǔn)確地測(cè)定阿苯達(dá)唑原料藥的含量及更好地控制阿苯達(dá)唑原料藥的質(zhì)量。

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