高賢嫻 ，張 宸 ，楊 楠 ，王丹妮 ，洪 鐵 ，

（1.吉林大學(xué)藥學(xué)院藥理教研室，長春130021；2.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，長春130012）

慢性腎功能衰竭（Chronic renal failure，CRF）是指由各種腎臟疾病引起的緩慢進行性腎功能損害，已在全球范圍內(nèi)成為繼心血管、腫瘤、糖尿病之后的常見疾病，嚴(yán)重的威脅著人類的健康[1]。益腎降濁膠囊是吉林省中醫(yī)科學(xué)院臨床專家以傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，在長期臨床實踐中總結(jié)出的方劑。全方由熟地、杜仲、補骨脂、白術(shù)、女貞子、淫羊藿、黃芪等十二味中藥組成。通過長期的臨床觀察，發(fā)現(xiàn)益腎降濁膠囊能夠明顯改善患者的慢性腎衰患者的腎功能肌酐、尿素氮等指標(biāo)，能夠改善患者的水腫、蛋白尿、胃腸道的一些不適癥狀等。本研究探討了益腎降濁膠囊對腺嘌呤誘導(dǎo)的大鼠慢性腎衰的影響，為益腎降濁膠囊治療慢性腎衰提供理論依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 實驗動物

成年SD大鼠，雄性，體質(zhì)量180～200g，由遼寧長生生物技術(shù)有限公司提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK（遼）2015-0001。大鼠飼養(yǎng)于SPF級清潔環(huán)境中，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，自由進食，適應(yīng)5天。

1.2 實驗藥物和試劑

益腎降濁膠囊由吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院提供；腎衰寧膠囊由云南理想藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；腺嘌呤由上海源葉生物科技公司生產(chǎn)；BCA蛋白濃度測定試劑盒由碧云天生物技術(shù)研究所提供；Scr測定試劑盒、BUN測定試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。

1.3 儀器

代謝籠，上海澤雅科教儀器有限公司；BS-124S電子天平，北京塞多利斯系統(tǒng)有限公司；微量移液器，賽默飛世爾儀器有限公司；代謝籠，上海澤雅科教儀器有限公司；超純水系統(tǒng)（AFZ-1002-U），艾科普儀器有限公司；TGL-16B離心機，上海安亭科學(xué)儀器廠；全波長酶標(biāo)儀，Biotek公司；倒置顯微鏡，德國LEICA公司。

2 實驗方法

2.1 分組及給藥

SD鼠60只，按體重隨機分為6組，每組10只，分別為空白對照組、模型組、陽性藥物腎衰寧組、益腎降濁膠囊大、中、小劑量組。 各組每天上午（9∶30～10∶30）灌胃一次，給藥組灌胃給予相應(yīng)劑量的受試物及陽性藥，空白對照組和CRF模型組給予相應(yīng)體積蒸餾水，連續(xù)給藥4周。

2.2 動物模型的建立

根據(jù)參照文獻[2、3]的操作方法構(gòu)建CRF大鼠模型：25%腺嘌呤溶液[250mg/(kg·d)]連續(xù)灌胃21天，制備CRF大鼠模型，正常對照組正常飲食與飲水。

2.3 檢測指標(biāo)

實驗結(jié)束的前一天，將大鼠置于代謝籠中，禁食不禁水，收集24h尿液并記錄尿量，采集的尿液用BCA試劑盒測定尿蛋白濃度，計算24h尿蛋白量。實驗結(jié)束時稱量大鼠體質(zhì)量并記錄，腹主動脈取血后，摘取大鼠右側(cè)腎臟，迅速稱重并記錄，計算大鼠腎臟指數(shù)（腎臟指數(shù)=右側(cè)腎臟質(zhì)量/體質(zhì)量）。對血液樣品進行處理，檢測血清中肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）等生化指標(biāo)，同時測量體重、腎重，并計算腎指數(shù)。取稱重后的腎臟置于4%的多聚甲醛中固定后，進行石蠟包埋、切片、展片和脫蠟處理，然后對腎臟對腎組織進行H&E染色，并于光學(xué)顯微鏡下觀察腎組織形態(tài)結(jié)構(gòu)變化。

2.4 統(tǒng)計方法

收集數(shù)據(jù)，采用SPSS17.0軟件進行分析，根據(jù)檢驗數(shù)據(jù)資料的正態(tài)性和方差齊性，定量資料以x±s表示，組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05時差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 對大鼠體重、腎重和腎指數(shù)的影響

與空白對照組比較，CRF模型組小鼠體重明顯減輕，腎重和腎指數(shù)顯著增加（P＜0.05）。與模型組比較，益腎降濁膠囊高、中、低劑量組的體重顯著增加，腎重顯著減少，腎指數(shù)顯著降低（P＜0.05），結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠的體質(zhì)量、腎重和腎指數(shù)的比較

3.2 對大鼠24h尿量、24h尿蛋白含量的影響

與空白對照組比較，模型組大鼠的24h尿量及24h尿蛋白含量顯著增加（P＜0.05）；與模型組比較，益腎降濁膠囊高、中、低劑量組24h尿量均較模型組均顯著降低（P＜0.05），益腎降濁膠囊高、中劑量組的24h尿蛋白含量顯著降低（P＜0.05）結(jié)果見圖1。

圖1 益腎降濁膠囊對CRF大鼠結(jié)腸組織24h尿量、24h尿蛋白含量的影響。（與空白對照組比較：P##＜0.01；與 CRF 模型組相比：P*＜0.05，P**＜0.01）

3.3 對大鼠血清中Scr和BUN的影響

與空白對照組相比，CRF模型組大鼠Scr與血清中BUN含量顯著增加（P＜0.05）；與模型組相比，益腎降濁膠囊給藥組組均能降低CRF模型大鼠的Scr和BUN 的含量，具有顯著性差異（P＜0.05），結(jié)果見表 2。

表2 益腎降濁膠囊對CRF大鼠血清中Scr和BUN的影響

3.4 對大鼠腎組織病理學(xué)的影響

通過觀察各組大鼠腎臟染色病理切片，觀察到空白對照組大鼠的腎小球、腎小管及間質(zhì)區(qū)組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)均未見異常。與空白對照組相比，CRF模型組大鼠腎組織結(jié)構(gòu)紊亂腎小球固縮，大量炎性細(xì)胞浸潤，經(jīng)益腎降濁膠囊治療4周后，能夠明顯改善CRF大鼠的腎臟組織病變，以益腎降濁高劑量組最為顯著，結(jié)果見圖2。

圖2 益腎降濁膠囊組對CRF大鼠病理變化的影響（HE染色，400）

4 討論

慢性腎衰竭（CRF）是多種腎臟疾病發(fā)展的最終結(jié)果，該疾病的病程較長，是嚴(yán)重威脅患者生命的一種臨床綜合征?；颊咧饕憩F(xiàn)出明顯的酸堿平衡失調(diào)、電解質(zhì)紊亂、腎功能衰退等癥狀[4]。目前對于該病的治療，臨床上主要采取透析、降脂、抗聚、抗凝等手段[5]，但治療成本高，患者耐受性差。因此在臨床上迫切需要一種治療該病的藥物。近年來，中藥治療慢性疾病成為更多患者的選擇，傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為慢性腎衰存在明顯脾腎陽虛，多夾有濕濁、淤血等實邪，治療應(yīng)以腎為中心，脾腎雙支，活血化瘀為主。益腎降濁膠囊在臨床上主要用于補腎降脾、逆降清濁。因此本文通過灌胃給予腺嘌呤構(gòu)建慢性腎衰竭大鼠，探討益腎降濁膠囊對大鼠慢性腎功能衰竭的保護作用。

高濃度腺嘌呤的攝入是常用的CRF大鼠模型造模方法，腺嘌呤可以被機體代謝從而阻塞損傷腎小管間質(zhì)導(dǎo)致腎功能減退[6]。在本研究結(jié)果中，模型組大鼠出現(xiàn)明顯的體重減輕，腎指數(shù)升高，血清及尿液中的的生化指標(biāo)升高，以及腎臟組織出現(xiàn)腎小球及腎小管的病理變化，提示造模成功。

本文通過對CRF大鼠灌胃給與益腎降濁膠囊藥物后，測定各組的腎功能指標(biāo)，與CRF模型組大鼠相比，各治療組大鼠血清中的Scr、BUN以及24h尿液中的蛋白含量均顯著降低，且隨著益腎降濁膠囊劑量的增加，大鼠的各項腎功能指標(biāo)降低的越明顯。同時對各組大鼠的腎組織進行病理分析顯示，益腎降濁膠囊組能夠顯著改善CRF大鼠腎組織病理形態(tài)，改善大鼠腎功能，促進機體代謝。表明益腎降濁膠囊對腺嘌呤所致的大鼠慢性腎衰具有一定的治療作用，不同劑量的治療作用具有差異性。