王全慧

天津市血液中心，天津 300110

丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)是血液篩查的一個(gè)非特異性指標(biāo)，通過對(duì)2016-2018年不合格血液標(biāo)本分析發(fā)現(xiàn)，本站全血ALT的不合格率高達(dá)0.25%，甚至高于輸血相關(guān)感染標(biāo)志物的檢出率。ALT檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)室血液檢測的合格率。通常血液檢測涉及完成檢測必需的儀器、試劑、校準(zhǔn)品、實(shí)驗(yàn)程序[1]。實(shí)驗(yàn)室需選擇國家批準(zhǔn)的且符合國家要求的儀器、試劑盒、檢測方法。儀器及設(shè)備的分析性能對(duì)血液質(zhì)量和臨床輸血安全起到至關(guān)重要的作用?！堆炯夹g(shù)操作規(guī)程(2015版)》[2]中規(guī)定，定量試驗(yàn)性能驗(yàn)證通常包括正確度、精密度、可報(bào)告范圍和參考區(qū)間的驗(yàn)證[3]，本實(shí)驗(yàn)室對(duì)以上參數(shù)進(jìn)行分析,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 隨機(jī)選取本站2018年1-7月已檢測的無償獻(xiàn)血者標(biāo)本。

1.2儀器與試劑 儀器:日本東芝全自動(dòng)生化分析儀(型號(hào)TBA-120FR)。試劑購自上海科華生物工程股份有限公司(試劑批號(hào)20180611)。其他試劑包括英國RANDOX低值質(zhì)控血清(批號(hào)1145UN)、英國RANDOX高值質(zhì)控血清(批號(hào)815UE)、英國RANDOX校準(zhǔn)品(批號(hào)914UE)。

1.3方法與判定標(biāo)準(zhǔn)

1.3.2正確度 通過對(duì)2018年本實(shí)驗(yàn)室參加原國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)評(píng)3個(gè)批次15份標(biāo)本結(jié)果進(jìn)行分析，成績合格即為驗(yàn)證通過。

1.3.3線性范圍 采用其他實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測標(biāo)本獲得的高值(H)血清及低值(L)血清。取H、L血清標(biāo)本各1份，進(jìn)行配比:標(biāo)本1為4L；標(biāo)本2為3L+1H；標(biāo)本3為2L+2H；標(biāo)本4為1L+3H；標(biāo)本5為4H。檢測時(shí),按標(biāo)本1、2、3、4、5、5、4、3、2、1排列，每份標(biāo)本測量2次,記錄結(jié)果。以理論水平為橫坐標(biāo)(X)，實(shí)測水平為縱坐標(biāo)(Y)。計(jì)算出R2和回歸方程式Y(jié)=bX+a。若R2≥0.995,b為0.97～1.03，則判定線性范圍驗(yàn)證通過。

1.3.4可報(bào)告范圍 根據(jù)線性回歸方程，若b不接近1，a較大，應(yīng)具體分析是高水平還是低水平標(biāo)本的預(yù)測值和實(shí)測值存在較大偏倚?？梢酝ㄟ^用t檢驗(yàn)(α=0.05)判斷截距a和0差異以及斜率b和1差異有無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。若差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義則在線性范圍內(nèi)檢測結(jié)果可靠。

1.3.5生物參考區(qū)間 隨機(jī)選取健康獻(xiàn)血者血清標(biāo)本78份進(jìn)行檢測，對(duì)參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證。參考區(qū)間：健康體檢者血清標(biāo)本ALT≤50 U/L。判斷標(biāo)準(zhǔn)：R=(測定結(jié)果在參考范圍內(nèi)的例數(shù)/總測定例數(shù))×100%，R≥90%即驗(yàn)證通過。

2 結(jié) 果

2.1精密度驗(yàn)證 低、高值質(zhì)控血清批內(nèi)不精密度分別為2.90%、1.10%，符合<5.0%的要求，驗(yàn)證通過。低、高值質(zhì)控血清批間不精密度分別為3.81%、2.03%，符合<6.7%的要求,驗(yàn)證通過。見表1。

表1 ALT精密度驗(yàn)證結(jié)果

2.2正確度驗(yàn)證 對(duì)2018年3個(gè)批次15份室間質(zhì)評(píng)標(biāo)本結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析，結(jié)果均在規(guī)定范圍內(nèi)，驗(yàn)證通過。見表2。

2.3線性范圍驗(yàn)證 實(shí)測值與預(yù)測值對(duì)應(yīng)的結(jié)果見表3。得到線性回歸方程Y=0.997X-0.418 1。R2≥0.995,b為0.97～1.03，線性范圍驗(yàn)證通過。見表3及圖1。

表2 2018年ALT室間質(zhì)評(píng)反饋結(jié)果分析

2.4可報(bào)告范圍驗(yàn)證 通過t檢驗(yàn)判斷b與1的差異：Sb=0.002，tb=1.365,t(0.05,18)=1.734，tb0.05)。Sa=0.830，ta=0.503，t(0.05,18)=1.734，ta0.05)。TBA-120FR可報(bào)告范圍在20～690 U/L的檢測結(jié)果可靠。

表3 ALT線性范圍驗(yàn)證(U/L)

圖1 ALT的線性回歸

2.5生物參考區(qū)間驗(yàn)證 本實(shí)驗(yàn)室所檢測的78份標(biāo)本檢測結(jié)果均在生物參考區(qū)間內(nèi)，R=100%(成績合格率為100%)，≥90%，故參考區(qū)間驗(yàn)證通過。

3 討 論

ALT檢測一直作為獻(xiàn)血者血液篩查的一個(gè)必檢指標(biāo)，其檢測結(jié)果不合格造成的血液浪費(fèi)也成為試驗(yàn)室關(guān)注的焦點(diǎn)。2007年本站對(duì)獻(xiàn)血員獻(xiàn)血前的血液檢測項(xiàng)目中增加了ALT，因ALT檢測不合格造成的血液報(bào)廢明顯減少，但不合格率仍處于較高水平。ALT檢測試劑盒均為具備相關(guān)資質(zhì)的廠家根據(jù)國家藥典生產(chǎn)，采用速率法的自動(dòng)化檢測設(shè)備進(jìn)行檢測。但是不同實(shí)驗(yàn)室采用的檢測流程、儀器及試劑有所差異，檢測方法所體現(xiàn)的性能有所不同[4]。為了解檢測方法的性能，檢測方法產(chǎn)生誤差的大小，有必要每年進(jìn)行1次檢測方法、程序的性能驗(yàn)證。美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)EP9-A2方案要求每半年進(jìn)行1次比對(duì)[5]，國內(nèi)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)則規(guī)定每年至少進(jìn)行1次比對(duì)[6]。

鑒于血站實(shí)驗(yàn)室檢測對(duì)象為健康獻(xiàn)血人群，對(duì)精密度驗(yàn)證采用低值和高值兩個(gè)水平的RANDOX質(zhì)控血清。質(zhì)控血清有更好的穩(wěn)定性，在溶解凍干血清標(biāo)本時(shí)嚴(yán)格控制操作手法、溶解時(shí)間、加液量、混勻的力度，使標(biāo)本穩(wěn)定、均一，這樣可以使CV值更低[7]。也有報(bào)道稱，選擇接近本實(shí)驗(yàn)室“醫(yī)學(xué)決定水平”的標(biāo)本，可以更好地反映儀器的真實(shí)性能[8]。本實(shí)驗(yàn)室低、高值質(zhì)控血清的批內(nèi)和批間變異均在驗(yàn)證范圍內(nèi)。在判斷標(biāo)準(zhǔn)上，批內(nèi)不精密度采用<1/4TEa，而批間不精密度采用<1/3TEa[9]，通常情況下，批間變異度總是大于批內(nèi)變異度，設(shè)定兩個(gè)判定標(biāo)準(zhǔn)更具實(shí)際意義。

正確度估計(jì)最常用的方法:(1)方法比較試驗(yàn)。將實(shí)驗(yàn)室采用的檢測方法和公認(rèn)的檢測方法[10]同時(shí)檢測一批不同ALT水平的標(biāo)本。通過結(jié)果的差異計(jì)算檢測方法偏倚是否在允許誤差范圍內(nèi)。(2)能力驗(yàn)證活動(dòng)。直接參加權(quán)威機(jī)構(gòu)組織的能力驗(yàn)證活動(dòng)，能力驗(yàn)證的成績可以證明新檢測方法檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。本研究將本站2018年參加原國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)評(píng)的15份標(biāo)本的檢測結(jié)果與反饋結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析。實(shí)驗(yàn)室的檢測結(jié)果全部在參考范圍內(nèi)，合格率為100%，驗(yàn)證通過。但通過計(jì)算偏倚可以發(fā)現(xiàn)有5份標(biāo)本相對(duì)偏倚大于10%(1/2TEa)，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)偏倚有正有負(fù)，而且每份標(biāo)本同時(shí)檢測4次精密度良好，可排除系統(tǒng)誤差。分析原因可能為偶然誤差，室間質(zhì)評(píng)標(biāo)本為凍干粉，需要加定量蒸餾水進(jìn)行溶解，可能操作人員加入的蒸餾水量不準(zhǔn)確，或者溶解時(shí)間不夠，混勻不充分，這些細(xì)小誤差都會(huì)造成低靶值標(biāo)本的較高偏倚[11]。

線性范圍驗(yàn)證通常采用配制包含不同分析物水平的系列標(biāo)本進(jìn)行檢測，將按稀釋比例計(jì)算的預(yù)測值X和實(shí)測值Y設(shè)置為2個(gè)變量進(jìn)行線性回歸[11]，得到回歸方程。理論上，回歸直線應(yīng)當(dāng)為過原點(diǎn)、斜率為1的直線，直線所達(dá)的限值即為可報(bào)告范圍。TBA-120FR廠家提供的線性范圍為8～1 000 U/L。本室選取的ALT低值血清為20 U/L，高值血清為690 U/L。血液篩查實(shí)驗(yàn)室主要針對(duì)的是健康的無償獻(xiàn)血者，而且采血前已經(jīng)過初篩檢測，大部分檢測結(jié)果小于50 U/L。線性驗(yàn)證范圍超過500 U/L的意義不大。

經(jīng)回歸分析得回歸方程Y=0.997X-0.418 1，b=0.997，a=0.418 1。實(shí)際工作中很難達(dá)到b=1，a=0。b在1.00±0.03范圍內(nèi)R2=0.995。一般認(rèn)為該回歸線性良好，檢測范圍內(nèi)的結(jié)果可靠。但是b和1，a和0有無差別，可以通過t檢驗(yàn)進(jìn)行判斷[12]。本研究發(fā)現(xiàn)，a與0差異無統(tǒng)計(jì)意義(P>0.05)，b和1差異無統(tǒng)計(jì)意義(P>0.05)。TBA-120FR在20～690 U/L的檢測結(jié)果可靠。

CLSI的C28-A3文件指出[13]，對(duì)于大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室沒有必要建立自己的參考區(qū)間，只需進(jìn)行驗(yàn)證即可。本次驗(yàn)證隨機(jī)選取常規(guī)健康獻(xiàn)血者血清標(biāo)本78份進(jìn)行檢測，全部結(jié)果均在生物參考區(qū)間內(nèi)，驗(yàn)證通過。

對(duì)全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行性能驗(yàn)證是血站實(shí)驗(yàn)室加強(qiáng)質(zhì)控、獲得準(zhǔn)確結(jié)果的重要途徑和方法[14]。實(shí)驗(yàn)室在進(jìn)行性能驗(yàn)證時(shí)要結(jié)合ISO15189和國家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)文件，本著科學(xué)、專業(yè)的態(tài)度盡量做到簡便、適用，使性能驗(yàn)證真正為血液檢測過程中的監(jiān)控與改進(jìn)發(fā)揮應(yīng)有的作用[15]。