（遼寧省遼陽(yáng)市中心醫(yī)院，遼寧 遼陽(yáng) 111000）

現(xiàn)階段，肺癌病發(fā)率呈現(xiàn)出逐漸增長(zhǎng)的趨勢(shì)，為患者身心帶來(lái)極大折磨，嚴(yán)重影響了患者生活質(zhì)量。肺癌作為惡性腫瘤，在免疫表型、分子遺傳學(xué)水平、細(xì)胞學(xué)以及組織學(xué)等方面有著異質(zhì)性，通常分為小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌。結(jié)合肺癌患者總數(shù)進(jìn)行分析，75%以上患者屬于非小細(xì)胞肺癌，僅有25%左右的患者是小細(xì)胞肺癌類型[1]?；诖耍疚碾S機(jī)抽取我院2016年～2017年收治的50例肺穿刺與支氣管鏡活檢患者作為本次報(bào)道的研究對(duì)象，分析免疫組化在肺小細(xì)胞癌活檢診斷中的作用，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：隨機(jī)抽取我院2016年～2017年收治的50例肺穿刺與支氣管鏡活檢患者作為本次報(bào)道的研究對(duì)象，其中，男性患者29例、女性患者21例，患者年齡35～73周歲、平均年齡是（56.37±5.63）周歲。結(jié)合病理組織形態(tài)學(xué)進(jìn)行分析，全體患者均確診肺癌，傾向肺小細(xì)胞癌，50例患者進(jìn)行Syn、ki67、CgA、34βE12、P63、CK5/6、LCA免疫組化診斷。

1.2 方法：病理組織學(xué)檢查，標(biāo)本是10%中性福爾馬林固定，通過(guò)常規(guī)脫水、切片、石蠟包埋、HE染色，采取顯微鏡觀察，按照形態(tài)學(xué)特征完成診斷。免疫組化檢測(cè)，認(rèn)真遵循試劑盒的操作要求、規(guī)范說(shuō)明展開(kāi)具體工作，使用PBS緩沖液、正常性肺組織切片當(dāng)做陰性組以及陽(yáng)性組，主要檢測(cè)項(xiàng)目為p63、TTF-1、p40，記錄相關(guān)信息[2]。

1.3 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：檢驗(yàn)判定的方式[3]：若p63、TTF-1、p40染色呈棕黃色、棕褐色，判定陽(yáng)性。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞占比（%）將結(jié)果細(xì)分成以下情況：第一，陰性（無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞）；第二，+（陽(yáng)性細(xì)胞≤10%）；第三，++（陽(yáng)性細(xì)胞維持于11%-50%）；第四，+++（陽(yáng)性細(xì)胞維持于51%～75%）；第五，++++（陽(yáng)性細(xì)胞≥76%）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS2.0對(duì)50例肺癌患者的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析，計(jì)數(shù)資料（例數(shù)比率），當(dāng)P＜0.05時(shí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 病理組織學(xué)結(jié)果：50例確診為肺癌的患者中3例非何杰金氏淋巴瘤、9例低分化鱗癌、38例小細(xì)胞肺癌。小細(xì)胞肺癌的鏡下?tīng)顟B(tài)為：癌細(xì)胞呈現(xiàn)巢狀、小梁狀、片狀分布，其細(xì)胞核為卵圓形、梭形、圓形，核染色質(zhì)呈微細(xì)顆粒狀且染色相對(duì)較深，核仁不明顯或嚴(yán)重缺乏，細(xì)胞分界模糊以及胞質(zhì)稀少。低分化鱗癌的鏡下?tīng)顟B(tài)為：癌細(xì)胞呈現(xiàn)出巢狀、片狀分布，其細(xì)胞核為卵圓形，泡狀核或染色質(zhì)過(guò)粗，核仁相對(duì)明顯但是胞質(zhì)過(guò)少；非何杰金氏淋巴瘤的鏡下?tīng)顟B(tài)為：腫瘤細(xì)胞整體排列過(guò)于分散，細(xì)胞核為卵圓形、圓形，染色質(zhì)過(guò)粗。

2.2 免疫組化結(jié)果：50例確診為肺癌的患者中小細(xì)胞肺癌表達(dá)率高達(dá)100%（50/50）、CgA表達(dá)率64%（32/50）、CK5/6表達(dá)率6%（3/50）、TTF-1表達(dá)率74%（37/50）、Syn表達(dá)率86%（43/50），LCA、34βE12、p63均是陰性表達(dá)。2例非何杰金氏淋巴瘤中Syn灶狀區(qū)陽(yáng)性表達(dá)、LCA陽(yáng)性表達(dá)，Sclc、TTF-1、CgA、34βE12、p63陰性表達(dá)；3例低分化鱗癌中CK5/6、34βE12、p63陽(yáng)性表達(dá)，1例Syn灶狀區(qū)陽(yáng)性表達(dá)，TTF-1、LCA、CgA、Sclc陰性表達(dá)。

3 討 論

近年來(lái)，醫(yī)學(xué)技術(shù)日漸成熟，腫瘤學(xué)、分子生物學(xué)等研究獲得極大進(jìn)步，針對(duì)不同組織學(xué)類型和腫瘤分子改變出現(xiàn)差異化病理類型、治療。結(jié)合臨床實(shí)際情況進(jìn)行分析，小細(xì)胞肺癌診斷相對(duì)復(fù)雜，非常容易被誤診成非小細(xì)胞肺癌。所以，我們必須最大程度上提高病理準(zhǔn)確性，現(xiàn)行診斷方法為活檢檢測(cè)技術(shù)，可是正式檢測(cè)環(huán)節(jié)使用的樣本量過(guò)少并且會(huì)受到人工擠壓，造成細(xì)胞變性，降低鏡下組織結(jié)構(gòu)分辨清晰程度，最終出現(xiàn)誤診[4]。

通過(guò)免疫組化方式進(jìn)行肺小細(xì)胞癌鑒別，相較于其他的檢測(cè)方式有著更明顯的優(yōu)勢(shì)。借助于不同酶系統(tǒng)來(lái)催化差異化顯色底物，進(jìn)而呈現(xiàn)出對(duì)應(yīng)的顏色，完成同張組織切片中不同抗原的表達(dá)。免疫組化有著實(shí)用性強(qiáng)、操作便捷、特異性高以及靈敏度高等特征，通常情況下，使用這一方式需要注意以下兩個(gè)問(wèn)題：一是，為防止出現(xiàn)交叉反應(yīng)，應(yīng)該正確篩選不同酶；二是，盡量選擇色彩對(duì)比更加明顯的色組當(dāng)做顯色底物[5]。此外，實(shí)際操作階段需要嚴(yán)謹(jǐn)把控具體環(huán)節(jié)，多角度規(guī)避影響最終檢測(cè)結(jié)果的因素，輔助醫(yī)師、患者做出正確的治療判斷。免疫組化雙染時(shí)需要遵循相關(guān)操作原則：陽(yáng)性表達(dá)部位可以是細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)，根據(jù)抗體、細(xì)胞膜表達(dá)的不同陽(yáng)性部位，若同步執(zhí)行2～3種抗體（有著直標(biāo)或者間標(biāo)），率先進(jìn)行間標(biāo)抗體，然后才是直標(biāo)抗體，重視抗原性強(qiáng)弱程度，根據(jù)順序從弱至強(qiáng)展開(kāi)標(biāo)記。

4 免疫組化技術(shù)分析

4.1 免疫組化方法：首先，腫瘤組織起源的鑒別診斷。由于免疫組化作為復(fù)雜性生物技術(shù)，對(duì)于組織起源確定等方面的應(yīng)用有著較大前景[8]。針對(duì)各抗體標(biāo)志物有著對(duì)應(yīng)的染色方式，其目的就是可以明確各類組織的起源以及判斷組織內(nèi)是否存有特異抗原；其次，腫瘤生長(zhǎng)的活躍程度、微小轉(zhuǎn)移灶判斷。檢測(cè)激素受體為臨床治療提供參考依據(jù)[9]，以乳腺癌細(xì)胞為例，雌激素陽(yáng)性表達(dá)，患者需要給予三苯氧胺治療，發(fā)揮出封閉乳腺癌細(xì)胞的雌激素受體效能；再次，進(jìn)行激素類細(xì)胞定位、定性的檢測(cè)，了解內(nèi)分泌細(xì)胞類型與功能狀況[9]，如類癌、垂體瘤以及胰島細(xì)胞瘤等；最后，按照陽(yáng)性標(biāo)記顯色程度劃分成棕黑色（強(qiáng)陽(yáng)性）、棕黃色（中等強(qiáng)度）以及淡黃色（弱陽(yáng)性）。結(jié)果判斷環(huán)節(jié)，前兩個(gè)有著較強(qiáng)的意義，能夠作為檢測(cè)判讀的依據(jù)。除卻標(biāo)本處理與方法學(xué)等因素，可以和細(xì)胞表達(dá)輕度異常，以及部分細(xì)胞攝取周圍組織抗原等原因[10]。結(jié)合章俊強(qiáng)等[11]研究厄洛替尼治療表皮生長(zhǎng)因子受體突變型小細(xì)胞肺癌1例的報(bào)告展開(kāi)分析，免疫組化標(biāo)記過(guò)程中，陽(yáng)性標(biāo)記的細(xì)胞學(xué)特征是把抗原在細(xì)胞內(nèi)定位情況、分布情況顯現(xiàn)出來(lái)，擬標(biāo)記細(xì)胞應(yīng)該將診斷結(jié)果的陽(yáng)性細(xì)胞作為前提條件，實(shí)現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)需要在細(xì)胞特定的抗原部位，反之不可以把陽(yáng)性表達(dá)當(dāng)做判斷的主要依據(jù)。

4.2 免疫組化結(jié)果判讀原則：第一，設(shè)置染色對(duì)照。每個(gè)染色都應(yīng)該以特定性陽(yáng)性與陰性對(duì)照當(dāng)做基礎(chǔ)，才可以正確判讀出染色結(jié)果。如果沒(méi)有相關(guān)的陽(yáng)性對(duì)照，則無(wú)法做出準(zhǔn)確的陰性結(jié)果。同樣，如果沒(méi)有相關(guān)的陰性對(duì)照，也難以判斷出準(zhǔn)確的陽(yáng)性結(jié)果[12]。所以，免疫組化染色沒(méi)有對(duì)照，即便是做出判斷其可靠性也相對(duì)較低；第二，抗原表達(dá)應(yīng)該在特定的部位。李彥瑋等[13]中國(guó)人群肺癌Napsin A蛋白表達(dá)的Meta分析提出陽(yáng)性表達(dá)應(yīng)該在細(xì)胞與組織的特定抗原部位才可以視作陽(yáng)性。如LCA在細(xì)胞膜中，而不是在抗原所處部位的陽(yáng)性表達(dá)不能夠判斷成陽(yáng)性；第三，陰性結(jié)果不可以視作抗原不表達(dá)。熊焰等[14]學(xué)者在非小細(xì)胞肺癌磷脂酰肌醇3激酶p110α蛋白高表達(dá)的臨床意義及機(jī)制的研究報(bào)道中提出了陰性結(jié)果不可以認(rèn)為有著否定意義，對(duì)于陽(yáng)性表達(dá)可以分為多少或者強(qiáng)弱，即便是少數(shù)細(xì)胞呈陽(yáng)性并且在抗原所在部位，也應(yīng)該視作陽(yáng)性表達(dá)，不可以認(rèn)為單一細(xì)胞的陽(yáng)性不能夠當(dāng)做陽(yáng)性；第四，免疫組化和HE切片診斷需要把HE切片診斷當(dāng)做主要參考。若是發(fā)生HE切片、免疫組化的診斷結(jié)果不一致問(wèn)題，醫(yī)護(hù)人員需要綜合參考影像學(xué)、實(shí)驗(yàn)室結(jié)果以及患者臨床資料，不可以片面采取免疫組化的診斷結(jié)果取代HE切片的診斷結(jié)果[15]；第五，假陰性結(jié)果原因。因?yàn)榻M織自溶和抗原擴(kuò)散，使得抗原消失，尤其是長(zhǎng)期固定標(biāo)本里因?yàn)榭乖┏鰧?huì)造成假陰性結(jié)果，所以應(yīng)該采用新鮮固定標(biāo)本[16]?？贵w失去活性、抗體自身敏感度不達(dá)標(biāo)或者濃度不足也會(huì)引起假陰性，再加上人員操作不當(dāng)，洗脫不足、溫度過(guò)高或者反應(yīng)時(shí)間不足更是加重了假陰性結(jié)果出現(xiàn)概率。此外，細(xì)胞、組織的抗原含量相對(duì)較低，如果采取直接檢測(cè)法將會(huì)呈現(xiàn)出陰性，而選擇間接檢測(cè)法則呈現(xiàn)出陽(yáng)性；第六，假陽(yáng)性結(jié)果原因。采用抗體同其他無(wú)關(guān)抗原出現(xiàn)交叉反應(yīng)，其特異性較差，尤其是使用多克隆抗血清后更容易發(fā)生。這種情況在范軍振等[17]免疫組織化學(xué)法在非小細(xì)胞肺癌EML4-ALK融合基因檢測(cè)中的應(yīng)用中也發(fā)生過(guò)抗體濃度相對(duì)較高、染色環(huán)節(jié)切片過(guò)于干燥，使得抗體同組織出現(xiàn)了非特異性組合。同時(shí)，細(xì)胞和組織的生物素、內(nèi)源性過(guò)氧物酶以及堿性磷酸酶出現(xiàn)了非特異性的顯色操作。

總而言之，肺穿刺與支氣管鏡活檢單純由形態(tài)學(xué)角度進(jìn)行肺小細(xì)胞癌的診斷過(guò)于片面，風(fēng)險(xiǎn)性過(guò)高，其需要同不典型類癌、淋巴瘤以及低分化鱗癌進(jìn)行鑒別并且上述四種疾病治療方案不盡相同。所以免疫組化標(biāo)志物Syn、ki67、CgA、34βE12、P63、CK5/6、LCA在鑒別診斷以及診斷中有著十分重要的作用。