潘蓉蓉 高敏 戴曉云 劉克堅(jiān)

鎮(zhèn)江市婦幼保健院（鎮(zhèn)江212001）

耳聾是嚴(yán)重影響生活質(zhì)量的疾病，也是臨床上最常見的遺傳病。2006年我國(guó)第二次殘疾人抽樣調(diào)查結(jié)果顯示[1]：我國(guó)聽力言語(yǔ)殘疾者為2780萬(wàn)人，占總殘疾人口的33.52%，并以每年3萬(wàn)聾兒的速度在增長(zhǎng)。耳聾至少60%由遺傳因素導(dǎo)致[2]，另外40%由環(huán)境因素或未知因素引起。研究表明，中國(guó)耳聾人群中GJB2、SLC26A4及線粒體基因（mtDNA12Sr RNA）是導(dǎo)致大部分遺傳性耳聾發(fā)生的三大責(zé)任基因，所占比例分別約為21%、14.5%及3.8%，由此催生出的耳聾基因診斷技術(shù)在中國(guó)已成為耳聾病因?qū)W分析的有力工具，并常規(guī)應(yīng)用于臨床檢測(cè)[3]。2018年3月，中國(guó)聾人協(xié)會(huì)發(fā)起“聽見未來(lái)，從預(yù)防開始”公益行活動(dòng)，在全國(guó)15個(gè)大中城市對(duì)耳聾高危人群進(jìn)行免費(fèi)耳聾基因檢測(cè)。鎮(zhèn)江市婦幼保健院作為檢測(cè)單位之一，對(duì)符合條件的271名耳聾高危人群進(jìn)行了常見遺傳性耳聾基因檢測(cè)，檢測(cè)情況如下。

1 研究對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

1.有耳聾遺傳家族史的0-3歲的嬰幼兒；2.有耳聾遺傳家族史的孕婦；3.已育有聾兒但聽力正常的家長(zhǎng)；4.年齡在45歲以下的持證聾人。共271人參加檢測(cè)，其中男性146人，女性125人；聾人185人，聽力正常86人。

1.2 方法

1.2.1 一般檢查

標(biāo)本采集前對(duì)受檢者進(jìn)行宣教，告知耳聾基因檢測(cè)的目的、意義及檢測(cè)范圍，對(duì)自愿接受檢測(cè)的受檢者，詳細(xì)詢問病史，包括家族史、藥物接觸史（主要詢問有無(wú)氨基糖苷類抗生素用藥史）、主要臨床癥狀（發(fā)病年齡、原因、耳聾發(fā)展情況、有無(wú)頭部外傷史）等情況。體格檢查，包括全身查體以及耳鼻咽喉?？撇轶w。聽力學(xué)及影像學(xué)檢查。建立常見遺傳性耳聾基因檢測(cè)信息表，簽訂檢測(cè)知情同意書。

1.2.2 DNA提取方法

抽取外周靜脈血2～3 ml，EDTA抗凝。采用MagPure Tissue∕Blood DNA LQ kit (Cat.no.D6312-01，D6312-02,Magen)系統(tǒng)對(duì)DNA進(jìn)行提取。然后采用引物及多重PCR緩沖試劑，使用多重PCR技術(shù)，對(duì)致病位點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)增，同時(shí)連接測(cè)序接頭，一次性完成文庫(kù)構(gòu)建。

1.2.3 耳聾基因檢測(cè)方法

采用二代測(cè)序法（東莞博奧木華基因科技有限公司），使用基因測(cè)序儀BioelectronSeq 4000進(jìn)行檢測(cè)，共檢測(cè)GJB2、SLC26A4、GJB3、MYO15A、TECTA、DIABLO、COCH、DSPP、GPR98、DFNA5、TMC1、MT-CO1、MT-RNR1、MT-TH、MT-TS1、MT-TL1、PRPS1、MYO7A等18個(gè)基因中100個(gè)位點(diǎn)。

2 結(jié)果

2.1 本研究耳聾基因檢測(cè)結(jié)果

271例檢測(cè)共包含61個(gè)家庭164例檢測(cè)和107例個(gè)人（均為聾人）檢測(cè)，男性146人，占54%；女性125人，占46%。聾人185例，占68%；聽力正常人群86例，占32%。查出一種及以上遺傳性耳聾致病突變169例，占62%；未查出遺傳性耳聾致病突變102例，占38%。藥物性耳聾基因攜帶者或患者23例，占已查明原因人群14%，其中，聾人20人，聽力正常3人；藥物性耳聾基因合并其他類型耳聾基因突變攜帶者或患者4人，占已查明原因人群2%，其中聾人2人，聽力正常2人，兩者合占16%。

2.2 致聾基因變異具體情況

共檢出169人攜帶致聾基因變異，檢出率62.36%。其中GJB2基因80例（純合17例，雜合39例，復(fù)合雜合24例），占29.52%；SLC26A4基因60例（純合11例，雜合30例，復(fù)合雜合19例），占22.14%；mtDNA12Sr RNA基因23例（1555A＞G均質(zhì)18例，1494C＞T均質(zhì)3例，7444G＞A均質(zhì)2例），占8.49%；GJB2/SLC26A4雙雜合突變型2例，占0.74%；GJB2/MT-CO1雙雜合突變型4例，占1.48%。具體檢測(cè)結(jié)果見表1。

2.3 61個(gè)家庭耳聾基因檢測(cè)結(jié)果

61個(gè)家庭164例檢測(cè)中已查明耳聾原因的有39個(gè)家庭，占64%；因檢測(cè)范圍受限未能查明耳聾原因或僅夫妻一方查明原因的有22個(gè)家庭，占36%。聽力正常夫婦生育聾兒的有38個(gè)家庭，占62%，其中已查明耳聾原因的有23個(gè)家庭，占60%；因檢測(cè)范圍受限未能查明耳聾原因或僅夫妻一方查明原因的有15個(gè)家庭，占40%。夫婦一方或雙方為聾人生育聾兒的有23個(gè)家庭，占38%，其中查明耳聾原因的有16個(gè)家庭，占69%；因檢測(cè)范圍受限未能查出耳聾原因或僅夫妻一方查明原因的有7個(gè)家庭，占31%。另有3對(duì)聾人夫婦致聾基因相同（均為常染色體隱性遺傳耳聾基因），生育聾兒的概率幾乎為100%。

表1 271例耳聾高危人群致聾基因檢出情況（n=271）Table 1 Detection of deafness genes in 271 high-risk deaf people（n=271）

2.4 107例個(gè)人耳聾基因檢測(cè)結(jié)果

107例個(gè)人檢測(cè)中能查明耳聾原因的有49例，占46%，另有7名聾人僅查出GJB2或SLC26A4基因1個(gè)位點(diǎn)突變，占6%，兩者合占52%；未能查出原因的有51例，占48%。

2.5 185例聾人耳聾基因檢測(cè)結(jié)果

聾人185例中能查明耳聾原因的有94例，僅查出GJB2或SLC26A4基因1個(gè)位點(diǎn)突變的有20例，共114例，占62%；未檢出致聾基因變異的有71例，占38%。聽力正常人群86例中能查出攜帶遺傳性耳聾基因突變的有55例，占64%；未檢出致聾基因變異的有31例，占36%。

3 結(jié)論

耳聾是一種嚴(yán)重影響生活質(zhì)量的疾病，它可以由基因突變引起，也可由環(huán)境因素（如細(xì)菌感染、病毒感染、聲損傷等）或基因和環(huán)境互相作用引起。目前中國(guó)耳聾人群中約66%的遺傳性耳聾已能夠得到明確診斷。對(duì)于明確遺傳學(xué)病因和遺傳風(fēng)險(xiǎn)的耳聾人群和聽力正常的致聾基因突變攜帶者，在其婚配前進(jìn)行遺傳咨詢，孕前進(jìn)行胚胎植入前診斷（PGD），孕期適宜時(shí)間進(jìn)行耳聾產(chǎn)前診斷，可指導(dǎo)其家庭生育聽力正常的孩子[4]。對(duì)于遺傳性耳聾的預(yù)防,明確耳聾病因是關(guān)鍵。耳聾基因診斷可為相當(dāng)部分的耳聾患者揭示分子病因，為耳聾家庭提供致病基因的攜帶狀況和遺傳規(guī)律等信息，從而為耳聾的遺傳咨詢、產(chǎn)前診斷及出生缺陷預(yù)防提供理論基礎(chǔ)和依據(jù)[5]。

高通量測(cè)序技術(shù)的快速發(fā)展，為臨床耳聾基因診斷帶來(lái)了革命性的發(fā)展機(jī)遇，檢測(cè)基因及熱點(diǎn)位點(diǎn)的增加，使攜帶者檢出率大大提高，能更好地明確耳聾原因[6]。本研究對(duì)耳聾高危人群進(jìn)行18個(gè)基因中100個(gè)位點(diǎn)的檢測(cè)，檢出致聾基因只有GJB2、SLC26A4及線粒體基因（mtDNA12Sr RNA）三種基因，這也印證了這三種基因是導(dǎo)致我國(guó)遺傳性耳聾發(fā)生的三大責(zé)任基因。二代測(cè)序法（檢測(cè)18個(gè)基因中100個(gè)位點(diǎn)）對(duì)耳聾高危人群來(lái)說(shuō)更加適合，因?yàn)镚JB2基因和SLC26A4基因分別15、56個(gè)位點(diǎn)的檢測(cè)范圍相比四個(gè)基因中9個(gè)位點(diǎn)或15個(gè)位點(diǎn)的芯片檢測(cè)法來(lái)說(shuō)，明顯提高了耳聾高危人群的致聾基因變異檢出率。對(duì)僅查出GJB2或SLC26A4基因1個(gè)位點(diǎn)突變和未檢出致聾基因變異的聾人，應(yīng)積極地進(jìn)行耳聾基因的全序列檢測(cè)以明確致聾原因。

本研究61個(gè)家庭中聽力正常夫婦生育聾兒的有38個(gè)家庭，通過檢測(cè)查明耳聾原因的有23個(gè)家庭；夫婦一方或雙方為聾人生育聾兒的有23個(gè)家庭，查明原因的有16個(gè)家庭。無(wú)論是聽力正常的遺傳性耳聾基因攜帶者，還是耳聾人群，采用常見遺傳性耳聾18個(gè)基因中100個(gè)位點(diǎn)的檢測(cè)，可以預(yù)防生育聾兒和耳聾發(fā)生的概率均在60%左右，沒有明顯差異，這意味著正常人群和耳聾人群從懷孕前規(guī)范開展遺傳性耳聾預(yù)防工作同等重要。聽力正常人群和耳聾人群均有可能生育聾兒，這是由耳聾遺傳模式?jīng)Q定的，因此對(duì)準(zhǔn)備懷孕或懷孕早期婦女規(guī)范開展遺傳性耳聾預(yù)防工作，是預(yù)防聾兒出生和耳聾發(fā)生最有效的辦法，可以避免大部分遺傳性因素導(dǎo)致的耳聾。

本研究藥物性耳聾占已查明原因人群16%，而且成年之后大多數(shù)人已耳聾，這意味著對(duì)新生兒進(jìn)行遺傳性耳聾基因檢測(cè)，盡早對(duì)藥物敏感性耳聾基因攜帶者及其母系家庭成員進(jìn)行遺傳咨詢和用藥指導(dǎo)，告知終身禁用氨基糖苷類藥物，可以避免“一針致聾”風(fēng)險(xiǎn)。考慮到藥物性耳聾基因攜帶者“一針致聾”的風(fēng)險(xiǎn)，醫(yī)生在使用氨基糖苷類藥物前一定要詳細(xì)詢問病史或檢測(cè)耳聾基因，避免發(fā)生“一針致聾”風(fēng)險(xiǎn)。

規(guī)范開展遺傳性耳聾預(yù)防，在婚前、孕前或產(chǎn)前及對(duì)新生兒進(jìn)行常見遺傳性耳聾基因檢測(cè)，有助于了解咨詢者、病人及其家屬所攜帶基因突變類型和構(gòu)成，可有效減少聾兒出生和有效預(yù)防耳聾發(fā)生[7]。①對(duì)準(zhǔn)備懷孕或懷孕中期前（考慮到若孕婦檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性，則其丈夫也可能需要檢測(cè)，以及耳聾產(chǎn)前診斷的時(shí)間節(jié)點(diǎn)等要求，建議在孕17周以內(nèi)或更早）婦女在知情同意的基礎(chǔ)上普遍開展常見遺傳性耳聾基因檢測(cè)，對(duì)攜帶者根據(jù)各種基因的遺傳方式進(jìn)行相應(yīng)規(guī)范服務(wù)。對(duì)攜帶相同常染色體隱性遺傳耳聾基因的聽力正常的夫婦（生育聾兒概率為25%），進(jìn)行遺傳咨詢，在自愿的基礎(chǔ)上接受產(chǎn)前診斷,即在孕早期通過絨毛膜穿刺，孕中期通過羊水或臍帶血穿刺，進(jìn)行耳聾產(chǎn)前基因診斷，可以有效地規(guī)避生育聾兒的風(fēng)險(xiǎn)；對(duì)藥物性耳聾基因攜帶者指導(dǎo)其本人及母系家庭成員終身禁用氨基糖苷類藥物，避免發(fā)生“一針致聾”風(fēng)險(xiǎn)。②在聾-聾婚配模式中，對(duì)耳聾患者夫婦在戀愛前根據(jù)個(gè)人意愿規(guī)范開展遺傳性耳聾預(yù)防工作，如果聾人希望不再生育耳聾后代，可以指導(dǎo)基因互補(bǔ)型婚姻、避免基因相同型婚姻，有效避免100%幾率生育聾兒現(xiàn)象發(fā)生。③對(duì)新生兒規(guī)范開展遺傳性耳聾預(yù)防工作，可使新生兒遺傳性耳聾患者及耳聾基因攜帶者得到早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早干預(yù)，可以避免藥物敏感性耳聾基因攜帶者發(fā)生“一針致聾”風(fēng)險(xiǎn)，延緩大前庭導(dǎo)水管綜合征患者“一巴掌致聾”現(xiàn)象發(fā)生，也可為其父母再生育以及本人今后婚育提供參考。

通過規(guī)范開展遺傳性耳聾基因檢測(cè)、遺傳咨詢和指導(dǎo)，為受檢者評(píng)估生育聾兒或耳聾發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，讓受檢者有選擇妊娠結(jié)局和采取措施預(yù)防耳聾發(fā)生的機(jī)會(huì)，必要時(shí)在本人及家屬自愿的前提下開展耳聾產(chǎn)前診斷，讓有明確生育聾兒幾率的家庭不再生育聾兒，能查明原因的已生育過聾兒的家庭不再生育聾兒，藥物性耳聾基因攜帶者不再發(fā)生“一針致聾”風(fēng)險(xiǎn)，指導(dǎo)聾人婚配減少100%幾率生育聾兒現(xiàn)象發(fā)生，可望實(shí)現(xiàn)“減少60%左右的聾兒出生和耳聾發(fā)生”的目標(biāo)。